邱耕
- 作品数：6 被引量：7H指数：1
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- 3种白血病细胞株中P73、DAPK、O^6 MGMT和CDH1基因启动子区CpG岛甲基化模式分析
- 2016年
- 目的分析3种白血病细胞株中P73、DAPK、O6MGMT和CDH1基因启动子区Cp G岛甲基化模式。方法运用亚硫酸氢盐测序法分析P73、DAPK、O6MGMT和CDH1抑癌基因启动子区Cp G岛在健康人外周血白细胞(正常对照)和U937、HL-60及Jurkat白血病细胞株中甲基化状态,绘制其甲基化图谱,并应用甲基化特异性PCR法在不同细胞中进行验证。结果正常对照、U937、HL-60及Jurkat基因组甲基化率分别为7.26%(238/3 279)、61.33%(1 813/2 956)、89.35%(3 090/3458)、58.10%(1 342/2 310),白血病细胞株与正常对照比较,P均<0.01。P73基因可鉴别正常细胞和肿瘤细胞,DAPK基因可区分开肿瘤细胞HL-60、U937及Jurkat,O6MGMT可进一步把U937与Jurkat区分开。结论 P73、DAPK、O6MGMT和CDH1基因具有特异的甲基化模式,通过3次MSP检测能将正常细胞和白血病细胞株进行鉴别。
- 叶松山侯俊然邱耕毛秉豫卞华杨雷
- 关键词：白血病
- 基于p73和DAPK基因异常甲基化模式的白血病肿瘤标志物研究被引量：1
- 2016年
- 目的肿瘤抑制基因异常甲基化状态与白血病发生关系密切,发展白血病甲基化标志物成为研究热点。但白血病类型复杂,利用单个基因甲基化模式作为肿瘤标志物具有一定局限性。本研究通过探讨基于肿瘤抑制基因p73和死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase gene,DAPK)异常甲基化模式对白血病诊断分型的价值和意义,寻找一种联合多基因异常甲基化模式作为白血病肿瘤标志物的方法。方法应用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP),分析正常人白细胞、单核细胞系白血病细胞株U937、粒细胞系HL-60及淋巴细胞系Jurkat基因组中,p73和DAPK基因启动子区CpG岛甲基化状态,将测序结果汇集到Office Excel 2010文件中,并计算各CpG位点甲基化率,绘制2个基因在4种细胞来源基因组中的CpG岛甲基化模式图,从而筛选特异甲基化位点组合。通过甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR,MSP),在白血病细胞株、30例正常对照和104例白血病患者外周血标本中,验证基因异常甲基化模式的诊断效能。结果成功测序约107个含BSP产物转化质粒的菌株,并绘制出p73和DAPK基因CpG岛甲基化模式图。正常细胞基因组两者去甲基化程度远高于白血病细胞株。p73基因在正常细胞与白血病细胞株中,甲基化状态完全相反。DAPK基因在HL-60中与其他白血病细胞株甲基化状态存在明显差异。p73基因MSP甲基化检测可以鉴别正常细胞和白血病细胞,在临床白血病标本诊断中的灵敏度、特异度和准确度分别是21.5%、100.0%和43.1%,DAPK基因甲基化检测可以鉴别HL-60与其他白血病细胞株,其诊断急性非淋巴细胞白血病的灵敏度、特异度和准确性分别是59.1%、100.0%和77.2%。结论 p73和DAPK基因启动子区CpG岛在不同类型白血病细胞基因组中存在特异的甲基化位点,将其作为白血病初步诊断分型的潜在肿瘤标志物具有一定临床意义,�
- 叶松山刘先娟侯俊然毛秉豫邱耕
- 关键词：DAPK基因白血病肿瘤抑制基因肿瘤标志物表观遗传学
- 黑色素瘤抗原基因MAGE-A3 5′端CpG岛异常甲基化检测被引量：1
- 2011年
- 目的研究黑色素瘤抗原基因MAGE-A3 5′端CpG岛异常甲基化状态,探讨其作为肝细胞肝癌(HCC)肿瘤标志物的可行性。方法利用重亚硫酸盐测序聚合酶链反应(BSP)分析HCC细胞株HepG2和健康对照者来源白细胞基因组中MAGE-A3基因5′端CpG岛异常甲基化状态,寻找HCC细胞MAGE-A3 5′端CpG岛去甲基化位点。结果 HepG2细胞和健康对照者来源白细胞基因组MAGE-A3 5′端CpG岛存在不同的甲基化状态,前者存在特异性去甲基化位点。结论 MAGE-A3 5′端CpG岛去甲基化位点的检测可用于HCC的早期诊断。
- 毛恺丁肖华邱耕叶松山杨晓菲何蕴韶
- 关键词：肿瘤肝细胞去甲基化
- HCC及血液系统恶性肿瘤中DNA甲基化肿瘤标志物研究
- 肿瘤标志物以无创性和简便的优点成为肿瘤早期诊断和病情监测的重要指标。表观遗传学兴起为从该角度推动肿瘤分子标志物发展提供了可能。DNA甲基化是表观遗传学三个组成部分之一，也是迄今为止研究最为成熟的一部分。DNA甲基化在肿瘤...
- 邱耕
- 关键词：DNA甲基化表观遗传学肿瘤标志物原发性肝细胞癌血液系统恶性肿瘤
- 文献传递
- 反向点杂交检测肝癌细胞DNA甲基化方法的建立被引量：1
- 2012年
- 目的建立反向点杂交(RDB)检测DNA甲基化的方法,并应用于临床肝癌细胞MAGE-A3 5'端CpG位点异常甲基化的检测。方法亚硫酸氢盐修饰后聚合酶链式测序分析细胞株Hep G2和外周血白细胞DNA的甲基化模式差异,建立RDB检测DNA甲基化方法,进行方法学评价,并运用于临床肝癌病理组织标本、肝硬化组织标本和正常对照组。结果 RDB检测肝癌细胞MAGE-A3 5'端CpG位点异常甲基化的灵敏度、特异度和准确性分别是83%(25/30)、100%(60/60)和94%(85/90)。其与临床肝癌诊断金标准的检验结果一致性较好(Kappa=0.870,P<0.05)。结论建立了RDB检测肝癌细胞DNA异常甲基化的方法,并可用于肝癌的临床早期诊断。
- 丁肖华毛恺邱耕叶松山杨晓菲何蕴韶
- 关键词：肝细胞肝癌DNA甲基化反向点杂交
- SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测DNA甲基化方法的建立被引量：4
- 2007年
- 近期，表观遗传学与肿瘤发生关系的研究日益增多。DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分，并已成为肿瘤早期诊断的研究热点。甲基化特异性PCR（MSP）是检测DNA甲基化的常用方法之一，该方法灵敏度和特异度高，但操作繁琐，难以自动化。TaqMan荧光定量PCR法，即Methylight在MSP的基础上设计1条TaqMan探针，该方法的准确性和检测的灵敏度都很高。然而，因需要设计合成特异的探针而使其的应用受限，而且TaqMan探针昂贵。本研究建立SYBRGreenⅠ荧光定量PCR（FQ—PCR）检测DNA甲基化的方法，通过临床标本检测和对比试验，以证明其与Methylight的检测效能，以便为DNA甲基化检测的临床应用提供工具。
- 杨晓菲邱耕叶松山丁肖华欧志英王伟毅何蕴韶
- 关键词：荧光定量PCR检测SYBR荧光定量PCR法肿瘤早期诊断甲基化特异性
