郭文东
- 作品数：10 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国医科大学更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hTFF3基因真核表达载体构建及表达鉴定
- 2011年
- 目的克隆人肠三叶因子基因hTFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中表达。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功。将重组载体转至真核细胞,荧光显微镜观察下转染效率,同时采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因TFF3的表达。结果成功将hTFF3基因克隆到真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(200 bp)。在荧光显微镜下观察转染后的细胞可见明显的绿色荧光,RT-PCR及Western blot结果表明:转染后的细胞中TFF3在转录和翻译水平的表达均有明显提高。结论成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中显著表达,为进一步研究TFF3因子的生物学功能奠定了基础。
- 郑倩倩郭文东朱亚勤
- 关键词：肠三叶因子克隆
- 人IKKγ基因重组载体的构建及在原核体内的表达纯化
- 2013年
- 目的构建重组原核表达载体pGEX-5X-1-IKKγ,诱导GST-IKKγ融合蛋白的表达并以GST-pulldown方法得到纯化的融合蛋白。方法应用PCR技术,以M6P8载体为模板扩增得到IKKγ全长序列,并亚克隆至带有GST标签的pGEX-5X-1载体中。经酶切、测序鉴定后,重组载体转化至原核细胞中并进行诱导表达,以SDS-PAGE凝胶电泳染色鉴定融合蛋白的表达。融合蛋白经GSTbeads沉降后,Western blot分析、鉴定融合蛋白的表达及纯化情况。结果将人IKKγ亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-1,酶切、测序鉴定无误。经诱导得到高表达的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳染色后可见高表达条带。Westernblot鉴定经GSTbeads沉降后的蛋白,在74kD鉴定出融合蛋白的特异性条带。结论成功构建了原核表达载体pGEX-5X-1-,并在原核细胞内表达,融合蛋白可以经GSTbeads沉降用于GST-pulldown实验。
- 郭文东朱亚勤
- p65蛋白的诱导表达及电子显微镜观察其显微结构
- 2012年
- 目的:构建重组原核表达载体pGEX-5x-1-p65,诱导GST-p65融合蛋白的表达并观察其包涵体的显微结构。方法:应用PCR技术扩增得到p65全长序列,并亚克隆至带有GST标签的pGEX-5x-1载体中。经酶切、测序鉴定后,在原核细胞中诱导表达GST-p65融合蛋白并将诱导后的菌体制作透射电镜标本,观察菌体内部显微结构。结果:成功构建表达载体pGEX-5x-1-p65,原核细胞中诱导表达、凝胶电泳后未见可溶性融合蛋白的高效表达。透射电镜观察到在承载有重组载体的菌体内部出现大量高电子密度的包涵体。结论:成功构建了原核表达载体pGEX-5x-1-p65,电子显微镜观察并证实在原核细胞内p65蛋白诱导表达形成包涵体。
- 郭文东郑倩倩朱亚勤
- 关键词：P65透射电镜包涵体
- hβ-arrestin2基因重组质粒构建及蛋白表达和定位
- 2015年
- 目的:构建p EGFP-C1-β-arrestin2融合蛋白表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:以p GEX-5X-1-β-arrestin2为模板,PCR法扩增hβ-arrestin2编码序列,亚克隆至p EGFP-C1中,p EGFP-C1-β-arrestin2经双酶切初步鉴定再送测序公司检测正确后瞬时转染人胚肾细胞HEK293,Western blot检测融合蛋白表达。激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白在HEK293细胞中的分布。结果:hβ-arrestin2编码序列被成功克隆至p EGFP-C1中,Western blot检测到融合蛋白表达,分子量约为77k Da,p EGFP-C1-β-arrestin2定位于HEK293细胞的细胞质中。结论:成功构建hβ-arrestin2基因真核表达载体,证实了融合蛋白定位在HEK293的细胞质中。
- 刘彩红毛琪郭文东朱亚勤
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 组蛋白去乙酰化酶SIRT1调控肿瘤微环境的研究进展被引量：1
- 2021年
- SIRT1是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖的去乙酰化酶家族(即Sirtuins家族)中的明星成员,因为其在衰老、免疫以及炎症方面的功能而与肿瘤高度相关。研究表明,SIRT1能够通过调节肿瘤微环境中的免疫细胞功能、各种细胞因子的分泌、调节肿瘤细胞的分泌行为以及肿瘤细胞的黏附功能,重塑肿瘤微环境,进而影响肿瘤的发展和转移。在这里,我们综述了SIRT1对肿瘤微环境调节的研究进展,这可能为肿瘤的临床治疗提供新的靶点和思路。
- 王卓郭文东张潇文都宁宋晓宇曹流
- 关键词：肿瘤微环境SIRT1烟酰胺腺嘌呤二核苷酸去乙酰化酶免疫细胞功能
- IKKβ诱导表达及其介导的TFF3激活NF-κB通路机制初探
- 前言
肠三叶因子3 /(Trefoil Factor 3, TFF3/)是三叶因子家族的成员,广泛表达于哺乳动物的多种组织,对粘膜上皮有保护和修复作用,是一种调节性小肽。有研究表明,在炎症、癌症等病理状态下,...
- 郭文东
- 关键词：IKKΒTFF3炎症信号
- 文献传递
- 一种基于自噬关键蛋白ATG7的突变体及其应用
- 本发明属于生物技术和延缓衰老的治疗领域，涉及一种基于自噬关键蛋白ATG7的突变体及其在延缓衰老治疗中的应用，特别涉及通过氨基酸位点突变模拟蛋白修饰状态及其在延缓衰老治疗中的应用。一种基于自噬关键蛋白ATG7的突变体，其氨...
- 王卓曹流郭文东宋晓宇周婷婷
- 一种基于自噬关键蛋白ATG7的突变体及其应用
- 本发明属于生物技术和延缓衰老的治疗领域，涉及一种基于自噬关键蛋白ATG7的突变体及其在延缓衰老治疗中的应用，特别涉及通过氨基酸位点突变模拟蛋白修饰状态及其在延缓衰老治疗中的应用。一种基于自噬关键蛋白ATG7的突变体，其氨...
- 王卓曹流郭文东宋晓宇周婷婷
- 文献传递
- TFF3-Twist-p65炎症应答信号调节的上游分子机制初探
- 肠三叶因子3(TrefoilFactor3,TFF3)是三叶因子家族的成员,主要分布于杯状细胞,并在上丘脑发现其表达。研究表明,TFF3除作为粘膜保护肽,对上皮组织起到损伤修复作用外,最近发现它具有抗凋亡活性;临床研究发...
- 郑倩倩刘彩红郭文东冯艳玲朱亚勤
- 关键词：TFF3TWISTP65炎症应答
- 文献传递
- TFF3-Twist-p65炎症应答信号调节的上游分子机制初探
- 肠三叶因子3(TrefoilFactor3,TFF3)是三叶因子家族的成员,主要分布于杯状细胞,并在上丘脑发现其表达.研究表明,TFF3除作为粘膜保护肽,对上皮组织起到损伤修复作用外,最近发现它具有抗凋亡活性;临床研究发...
- 郑倩倩刘彩红郭文东冯艳玲朱亚勤
- 关键词：TFF3TWISTP65炎症应答
