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郭芬: 作品数：23 被引量：34H指数：3; 供职机构：广东药学院生命科学与生物制药学院更多>>; 发文基金：国家教育部博士点基金广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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BRPF1及其新型转录本BRPF2与RHOX5蛋白间的相互作用: 2012年; RHOX5基因是最早发现的小鼠RHOX基因簇(reproductive homeobox on the X chromosome)成员,可特异性地在生殖系统中表达。RHOX5蛋白在胚胎发育、生殖组织的发育、精子的生成和成熟等多个环节发挥作用,但其功能的发挥途径尚不明确。在前期筛选与RHOX5蛋白相互作用的分子中初步获得一个BRPF1的新型转录本BRPF2。进一步构建pGBKT7-BRPF2质粒,酵母双杂交实验确定其与RHOX5蛋白的相互作用,GST-pull down实验确定其在体外的直接结合;PCR扩增BRPF1基因,构建pGBKT7-BRPF1和pGADT7-BRPF1质粒,酵母双杂交实验和GST-pulldown实验证明RHOX5蛋白亦可以直接结合BRPF1蛋白。BRPF1及其新型转录本BRPF2与RHOX5蛋白间的相互作用证实暗示了BRPF2极有可能与BRPF1竞争性结合RHOX5蛋白,为三种蛋白功能的研究提供了新的思路。; 郭芬林丕容李月琴苏宪礼王丁丁周天鸿; 关键词：蛋白相互作用酵母双杂交

小鼠Pem-GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：1: 2003年; 　目的:为制备重组小鼠Pem(以下简称mPem)-谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白,作为研究mPem蛋白功能的材料.方法:根据携带小鼠Pem基因编码序列的模板质粒pEGFP/mPem设计合成特异性引物,PCR扩增小鼠Pem基因编码序列,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-3中,得到重组表达质粒pGEX-4T-3/mPem,用此重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,IPTG诱导重组菌表达mPem蛋白,SDS-PAGE及WesternBlot鉴定表达产物.结果:重组菌株明显诱导表达出预期相对分子质量49000的融合蛋白.结论:成功构建了mPem-GST原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出mPem-GST融合蛋白,为mPem蛋白功能的研究打下了基础.; 张畅斌李月琴郭芬王莹周天鸿; 关键词：基因表达大肠杆菌小鼠原核表达质粒胚胎发育

小鼠Rhox5蛋白与鞘脂激活蛋白原功能性相互作用的研究: 小鼠Rhox5为同源异型框基因，隶属于Rhox基因簇/(reproductive homeobox on the X chromosome genes cluster/)β亚簇。多项研究表明其在生殖系统的发育、精子的形成...; 郭芬; 文献传递

利用PCR-ASO技术分析MR基因多态性及与妊高征相关性研究: 2003年; 目的　探讨中国人群中盐皮质激素受体基因 (MR)外显子 3上C944T多态性与妊高征的相关性。方法　通过聚合酶链式反应 -等位特异性寡核苷酸杂交 (PCR -ASO)方法测定MR外显子 3上C944T多态性频率并通过统计学方法探讨这些多态性与妊高征的相关性。结果　MR外显子 3上C944T多态性位点中C等位基因和T等位基因在正常孕妇组中分别为 5 8 0 0 %与 42 0 0 %,在妊高征组中分别为 5 3 45 %与 46 5 5 %,在随机人群组中分别为 5 5 15 %与44 85 %。结论　中国人群中MR基因外显子 3上存在C944T多态性。; 郭芬莫雪华李月琴何华坤王莹周天鸿; 关键词：多态性妊高征

Prosaposin基因哺乳动物细胞表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立: 2010年; 目的构建前凋亡因子prosaposin的哺乳动物细胞表达质粒,转染NIH3T3细胞,建立稳定转染prosaposin的细胞系。方法采用PCR方法扩增prosaposin的开放阅读框,酶切后的PCR扩增产物和退火后的人工合成的c-Myc抗原表位标签,共同克隆至pcDNA3.1(+)哺乳动物细胞表达载体中,构建pcDNA-Psap-Myc融合表达质粒。用脂质体将经过验证、测序的pcDNA-Psap-Myc质粒转染NIH3T3细胞,通过G418筛选建立稳定过表达prosaposin的NIH3T3细胞系。采用RT-PCR和western blotting方法,检测prosaposin在稳定转染的NIH3T3细胞系中的表达。结果成功构建了pcDNA-Psap-Myc融合表达质粒,建立了稳定过表达prosaposin的NIH3T3细胞系。RT-PCR和Western blotting结果表明,构建的稳定细胞系中成功表达prosaposin-Myc融合蛋白。结论Prosaposin哺乳动物细胞表达质粒的成功构建和稳定转染NIH3T3细胞系的建立,为进一步体外研究prosaposin蛋白的功能及其与其他分子间的相互作用奠定了基础。; 郭芬李月琴李实骞罗志文张欣周天鸿

联合靶向Survivin和Livin的双重siRNA表达载体的构建及其活性鉴定被引量：1: 2013年; 目的构建联合靶向凋亡抑制基因Survivin和Livin的双重siRNA表达载体并鉴定其活性,为研究同时下调Survivin和Livin表达的协同效应奠定基础。方法选取已证实有效的分别靶向Survivin和Livin的siRNA序列,通过定向克隆技术构建同时编码2个siRNA分子的真核表达载体pSilencer2.1-Sur-Liv,将其转染HepG2细胞后检测Survivin和Livin mRNA水平的变化,同时转染表达DsRed2-SURVIVIN和GFP-LIVIN的Hela荧光报告细胞观察荧光强度变化。结果双重siRNA表达载体pSilencer2.1-Sur-Liv构建成功,转染HepG2后Survivin和Livin mRNA水平明显下降,转染Hela报告细胞后荧光强度变弱。结论联合靶向Survivin和Livin的双重siRNA表达载体构建成功,并能有效下调Survivin和Livin的表达水平。; 陈孟璋郭芬; 关键词：RNA干扰 SURVIVIN LIVIN

含外显子8的prosaposin蛋白亚型与Rhox5蛋白间的相互作用被引量：1: 2010年; 研究含外显子8的prosaposin蛋白亚型(PsapE8)与同源异型框蛋白Rhox5蛋白间的相互作用.重叠延伸PCR法扩增PsapE8的cDNA序列,将其按照通读框方式分别克隆至pGBKT7和pGADT7酵母双杂交载体中构建pGBKT7-PsapE8和pGADT7-PsapE8重组质粒.酵母双杂交实验检测PsapE8与Rhox5蛋白在酵母体内的结合;体外转录翻译S35标记的PsapE8蛋白,GSTpull-down实验检测PsapE8与Rhox5蛋白在体外的结合情况.成功地构建了pGBKT7-PsapE8和pGADT7-PsapE8重组质粒,酵母双杂交实验表明PsapE8蛋白在酵母体内可以结合Rhox5蛋白;GST pull-down实验再次验证了两者在体外的结合;表明含有外显子8的prosaposin蛋白亚型PsapE8可以与Rhox5蛋白相结合.; 郭芬李月琴李实骞罗志文张欣周天鸿; 关键词：蛋白相互作用

小鼠Myf5真核表达载体的构建及其在细胞中的定位: 2010年; 目的:获得小鼠生肌调节因子Myf5基因并构建pEYFP-C1真核表达载体,观察Myf5在小鼠C3H10T1/2细胞中的定位。方法:利用PCR获得Myf5基因克隆到pEYFP-C1载体中,利用脂质体将构建的表达载体转染C3H10T1/2细胞,荧光观察融合蛋白的表达。结果:从小鼠cDNA文库中得到760bp的myf5的CDS序列后,重组到pEYFP-C1载体中并转染C3H10T1/2细胞,荧光显示Myf5蛋白定位在细胞核中。结论:Myf5载体成功构建并在小鼠C3H10T1/2细胞表达,证明了Myf5蛋白定位于细胞核,为进一步研究Myf5与其他蛋白的相互作用奠定了基础。; 刘向东郭芬黄晓峰刘兆宇张欣李月琴周天鸿; 关键词：MYF5 细胞定位

应用载体介导的RNAi技术抑制HCMV的UL49基因表达被引量：2: 2005年; 为了研究RNA干涉抑制HCMV UL49基因的作用,以pLXSN(U6启动子)为模板通过两步PCR的方法扩增含U6启动子的siRNA表达片段,并通过TA克隆将siRNA表达片段克隆到pMD18-T载体构建成siRNA表达质粒,同时以人巨细胞病毒AD169病毒株基因组为模板PCR扩增UL49基因,将其克隆到pEGFP-N1构建融合质粒pEGFP-UL49。通过脂质体介导将siRNA表达质粒和pEGFP-UL49质粒共转染人宫颈癌细胞系HeLa,在荧光显微镜下观察RNA干涉结果。通过这种方法得到具有介导RNA干涉的siRNA片段,为UL49基因沉默研究提供技术基础。; 曾志锋李月琴唐冬生张欣王莹郭芬周天鸿; 关键词：RNAI技术 RNA干涉技术人巨细胞病毒基因表达载体介导

小鼠RHOX5蛋白两种截短型突变体的原核表达及其与MDFIC互作的鉴定被引量：3: 2009年; 目的:表达和纯化两种小鼠RHOX5蛋白的截短型突变体,确定完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。方法:生物信息学分析小鼠同源异型框蛋白RHOX5的cDNA序列,分别对RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C进行PCR、分别扩增RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C并将其克隆至pGEX4T3原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒分别转化大肠杆菌RosettaTM2(DE3)菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione-Sepherase 4B颗粒对融合蛋白进行小批量亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳分离目标蛋白,确定融合蛋白的表达。进行GST-pull down实验,检测完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。结果:在大肠杆菌RosettaTM2(DE3)中有效地实现了GST-RHOX5、GST-RHOX5 N和GST-RHOX5 C 3种融合蛋白的可溶性表达;经Glutathione Sepherase 4B颗粒亲和纯化后,获得了纯化后GST融合蛋白;GST-pull down实验证实,含有homeodomain的RHOX5蛋白和RHOX5C截短型突变体可以与MDFIC蛋白相结合,而RHOX5N截短型突变体则丧失了与MDFIC蛋白结合的能力。结论:实现了RHOX5及其两种截短型突变体的原核表达和纯化,证实RHOX5蛋白的homeodomain结构域是其与MDFIC结合的关键部位。; 郭芬李实骞欧淑芳初彦辉李月琴张欣周天鸿; 关键词：原核表达和纯化

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