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人HAS3启动子的结构与功能初步分析: 透明质酸合成酶3/(Hyaluronan synthase 3,HAS3/),是一个参与透明质酸合成的酶分子,在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用。为了进一步深入研究HAS3基因的转录调控机制,本研究克隆鉴定了HAS3...; 镇磊; 关键词：CDNA末端快速扩增启动子转录调控; 文献传递

人FAM33A基因启动子的克隆与鉴定被引量：6: 2009年; 目的鉴定人FAM33A基因的启动子，为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法采用5’RACE技术（5’端cDNA快速扩增）鉴定FAM33A的转录起始位点。采用PCR定向克隆、酶切亚克隆等策略，构建FAM33A启动子荧光素酶报告基因。采用Lipofeetamine^TM2000转染H1299细胞，并通过Dual-Lu-ciferase@ Reporter Assay System进行荧光素酶报告基因活性检测。结果确定了FAM33A的转录起始位点，构建了覆盖FAM33A 5’端ATG附近约2kb区域的一系列FAM33A启动子荧光素酶报告基因。启动子活性分析表明，这些重组体均具有较高的启动子活性，同时含有典型的GC盒以及Sp1、E2F和GATA-1等潜在的转录因子结合位点。结论FAM33A启动子区域主要定位于转录起始位点附近约590bp的区域内。; 杜刚卜友泉杨正梅兰欢崔涛镇磊刘革力宋方洲; 关键词：启动子转录调控细胞周期

siRNA介导的NFBD1表达沉默对HeLa细胞增殖与凋亡的影响被引量：7: 2008年; NFBD1,也称MDC1,是1个参与细胞内DNA损伤后细胞应答反应的重要分子.为探讨NFBD1在细胞增殖和凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究采用siRNA技术抑制NFBD1的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞HeLa细胞增殖和细胞凋亡的影响.半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,筛选到的短链NFBD1 siRNA能有效抑制内源NFBD1的表达,抑制程度约100%.细胞生长曲线分析结果表明,siRNA介导的NFBD1表达沉默导致HeLa细胞生长增殖的显著抑制.FACS分析结果表明,NFBD1表达抑制导致sub-G1峰的出现,同时蛋白质印迹分析观察到了caspase 3和PARP(poly-ADP-ribose polymerase)的剪接激活,表明NFBD1表达抑制诱发了细胞凋亡.在该凋亡过程中,P53及其下游靶分子Bax和Puma的表达水平均没有发生明显变化,但Noxa的表达在mRNA和蛋白质水平上均显著上调,强烈提示该凋亡过程很可能是1个不依赖P53的凋亡途径,且Noxa的转录激活在该凋亡过程中可能起着重要作用.这些结果表明,NFBD1参与细胞生长增殖和凋亡的调节,是一个潜在的肿瘤治疗新靶点.; 卜友泉杨正梅兰欢镇磊刘革力宋方洲; 关键词：SIRNA 细胞增殖细胞凋亡

人HAS3启动子的结构与功能初步分析被引量：1: 2009年; 透明质酸合酶3(hyaluronan synthase3,HAS3),是一个参与透明质酸合成的酶分子,在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用.为了进一步研究HAS3基因的转录调控机制,本研究克隆鉴定了HAS3基因的启动子.首先应用5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了HAS3基因的转录起始位点,发现了丰度和转录起始位点不同的两种新的HAS3基因剪接变异体.通过PCR定向克隆策略,构建了覆盖HAS3基因5′端侧翼区起始密码子ATG上游约4.3kb区域的一系列HAS3基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,HAS3基因启动子定位于转录起始位点附近约450bp的区域内.转录因子结合位点分析表明,HAS3基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒以及C/EBP等其它潜在的转录因子结合位点.结果提示,Sp1和C/EBP等转录因子可能参与HAS3基因的转录调控.; 镇磊卜友泉杜刚杨正梅兰欢崔涛刘革力宋方洲; 关键词：CDNA末端快速扩增启动子转录调控

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镇磊