陈晓玲
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：河南职工医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MAGE-3基因片段真核表达质粒的构建
- 2005年
- 目的克隆人MAGE-3基因片段,以构建真核重组表达质粒pcDNA3.1-MAGE-3,为制备以MAGE-3基因片段为基础的核酸疫苗及探讨相关的肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法RT-PCR法从肝癌组织制备出含BamHI、EcoRI酶切位点的MAGE-3基因片段,pGEM-TEasy为克隆载体,pcDNA3.1为真核表达载体,采用DNA重组技术,将目的基因先克隆至pGEM-TEasy载体再亚克隆至pcDNA3.1载体上,然后,据氨苄青酶素(Amp)抗性、蓝白筛选实验、克隆鉴定引物T7/SP6PCR扩增方法鉴定阳性克隆,并对阳性克隆pcDNA3.1-MAGE-3中的插入序列进行DNA测序。结果扩增出了MAGE-3目的基因片段;经蓝白筛选实验、克隆鉴定引物扩增方法鉴定得到重组子pGEM-T-MAGE-3;引物扩增方法鉴定得到重组子pcD-NA3.1-MAGE-3;DNA测序后与GenBank中MAGE-3相应序列比较,结果完全一致。结论成功构建了重组pcDNA3.1-MAGE-3肿瘤核酸疫苗,为肿瘤免疫治疗提供了条件。
- 裴瑞杨红梅陈洁陈晓玲杨萍赵国强
- 关键词：肿瘤免疫治疗
- MAGE-3目的基因真核表达载体的构建
- 2005年
- 目的构建黑色素瘤抗原-3(M AGE-3)目的基因真核重组表达载体pcDNA 3.1-M AGE-3。方法用RT-PCR法从肝癌组织制备含B amHⅠ、E coRⅠ酶切位点的M AGE-3目的基因,采用DNA重组技术将目的基因克隆至pGEM-T E asy载体和亚克隆至pcDNA 3.1载体上,根据氨苄青霉素(Am p)抗性、蓝白筛选实验、引物扩增等方法筛选、鉴定阳性克隆,并对其中的插入序列M AGE-3目的基因进行DNA测序。结果扩增出M AGE-3目的基因;重组质粒pcDNA 3.1-M AGE-3中的插入片段经DNA测序后与G enB ank中M AGE-3相应序列比较,结果完全一致。结论成功构建了真核重组表达载体pcDNA 3.1-M AGE-3,为肿瘤免疫治疗提供了条件。
- 裴瑞杨红梅陈洁陈晓玲杨萍赵国强
- 关键词：克隆重组质粒肿瘤免疫治疗
- MAGE-3目的基因原核表达载体的构建和表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌(E.coli)BL21中的表达,为制备以黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)基因片段为基础的肽疫苗及特异诊断试剂提供抗原打下基础。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法制备MAGE-3目的基因,以pGEM-TEasy为克隆载体,pGEX-4T-1为原核表达载体,将MAGE-3目的基因克隆至pGEM-TEasy载体和亚克隆至pGEX-4T-1载体上。筛选、鉴定阳性克隆并将其转化E.coliBL21.经IPTG诱导,12%SDS-PAGE电泳分离和WesternBlot表达鉴定。结果正确构建了原核重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-3;在E.coliBL21中检测到含该重组表达质粒的转化菌表达出分子量35kD的融合蛋白;基因测序结果表明,阳性克隆中的MAGE-3目的基因序列与GenBank公布的已知序列完全一致。结论成功构建的原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3及其所表达的融合蛋白,为以MAGE-3目的基因为基础的肽疫苗及特异诊断试剂的研制提供抗原打下了基础;为后续实验提供了依据。
- 裴瑞陈洁杨红梅陈晓玲杨萍赵国强
- 关键词：逆转录-聚合酶链反应克隆表达肿瘤免疫
- 黑色素瘤抗原-3基因片段真核表达质粒的构建
- 2006年
- 目的构建真核重组表达质粒pcDNA-3.1-MAGE-3,为制备肿瘤核酸疫苗及探讨相关的免疫治疗提供实验依据。方法采用逆转录!聚合酶链反应(RT-PCR)法从肝癌组织中制备出含BamHI、EcoRI酶切位点的黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)目的基因;pGEM!TEasy为克隆载体,pcDNA3.1为真核表达载体,将目的基因分别先后定向克隆至其上;根据氨苄青霉素(Amp)抗性、蓝白筛选实验、引物T7/SP6PCR扩增方法鉴定阳性克隆,并对其中的插入序列进行DNA测序。结果成功扩增出目的基因;经鉴定得到重组质粒pGEM-T-MAGE-3和pcDNA3.1-MAGE-3;DNA测序后与GenBank中MAGE!3相应序列比较完全一致。结论成功构建pcDNA3.1!MAGE!3肿瘤核酸疫苗,可为免疫治疗提供实验依据。
- 裴瑞赵国强杨红梅陈洁陈晓玲杨萍
- 关键词：克隆重组质粒肿瘤免疫治疗
