饶振华
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：江西中医药大学药学院现代中药制剂教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NODs信号通路在RAW264.7细胞抗烟曲霉菌刺激中的作用被引量：2
- 2012年
- 【目的】通过培养RAW264.7细胞,并运用siRNA沉默NOD2基因来研究NODs信号通路在体外抗烟曲霉中的作用。【方法】体外培养RAW264.7细胞,接种2×105个/孔细胞于六孔板中,分为正常对照组(N)和正常沉默组[NOD2(RNAi),正常+烟曲霉孢子刺激组(N+Af)和正常沉默+烟曲霉孢子刺激组[NOD2(RNAi)+Af],每组三复孔。通过RT-PCR法检测细胞中NOD1、NOD2、RIP2 mRNA表达;Western blot法检测细胞中分泌蛋白TNF-α表达。【结果】与N组比较,N+Af组NOD1、NOD2 mRNA和TNF-α蛋白表达显著上升。与阴性对照组(Nctrol)相比,NOD2(RNAi)组NOD2 mRNA表达明显受到抑制,沉默效果达到80%以上,说明RAW264.7细胞中NOD2基因被成功沉默。与NOD2(RNAi)组比较,NOD2(RNAi)+Af组NOD1、RIP2 mRNA和TNF-α蛋白表达小幅上升,但无显著性差异(P>0.05)。与NOD2基因沉默前比较发现:与N组比较,NOD2(RNAi)组,TNF-α蛋白表达显著性升高(P<0.05)。与N+Af组比较,NOD2(RNAi)+Af组,TNF-α蛋白显著性降低(P<0.05);NOD1、RIP2 mRNA在各组中表达均未见显著性差异。【结论】NODs信号通路在RAW264.7细胞抗烟曲霉中发挥作用,尤以NOD2的作用较突出。
- 罗闳丹张海红苏明声梁永红饶振华谢小梅
- 关键词：烟曲霉菌RAW264.7细胞SIRNA
- TLR4基因的沉默下调了NOD1信号通路在RAW264．7细胞中抗烟曲霉孢子刺激作用被引量：3
- 2012年
- 为研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时NOD1和TLR4信号通路在细胞处于正常状态和免疫抑制状态时发挥的作用,以及沉默TLR4基因后对NOD1信号通路的影响,通过建立细胞免疫抑制模型,利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,运用RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后NOD1,TLR4,RIP2,MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达变化.研究发现:(1)给予RAW264.7细胞含免疫抑制剂甲泼尼龙琥珀酸钠浓度为0.04mg/mL的RPMI1640培养液培养12h后,细胞抑制效果最佳,存活率约为90%.(2)正常RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,NOD1和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用,当细胞处于免疫抑制状态时,NOD1和TLR4信号通路不能激发其有效的免疫应答.(3)TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞,沉默效率达83%.(4)TLR4基因的沉默,使NOD1信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,表明沉默TLR4基因下调了NOD1信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用.
- 饶振华谢卫华苏明声龙凯罗闳丹谢小梅
- TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究单核巨噬细胞RAW264．7受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和TLR4信号通路发挥的作用，以及沉默TLR4基因后，对TLR2信号通路的影响。方法利用RNAi技术将11LR4-siRNA转染RAW264．7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h，将细胞随机分为正常组（N组）、正常＋烟曲霉孢子刺激组（N＋Af组）、正常＋TLR4-siRNA组[TLR4（RNAi）组]、正常＋TLR4-siRNA＋烟曲霉孢子刺激组[TLR4（RNAi）＋Af组]，RT-PCR和Westernblot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88mRNA及TNF-α蛋白的表达变化。结果（1）TLR4基因沉默前：与N组比较，N＋Af组TLR2、TLR4、MyD88mRNA及TNF．Ot蛋白表达量均显著升高（P〈0．05）。（2）TLR4-siRNA（100nmol／L）转染RAW264．7细胞，沉默效率达83％。（3）TLR4基因沉默后：与N组比较，TLR4（RNAi）组TLR2、MyD88mRNA的表达量均显著降低（P〈0．05）；与N＋缈组比较，rrLR4（RNAi）＋4厂组的TLR2、MyD88mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低（P〈0．05）；与TLR4（RNAi）组比较，TLR4（RNAi）＋A厂组MyD88mRNA表达量显著升高（P〈0．05），而TLR2mRNA及TNF．仪蛋白表达量却无显著变化（P〉0．05）。结论RAW264．7细胞受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和TLR4信号通路被激活，通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用；当沉默TLR4基因后，TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用，沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用，可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用。
- 饶振华朱根华谢卫华苏明声龙凯罗闳丹谢小梅
- 侵袭性肺曲霉病发生发展过程中TLRs／NF—κB信号通路的激活和不同功能细胞因子的产生被引量：4
- 2011年
- 目的 研究小鼠侵袭性肺曲霉病（IPA）发生过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活和不同功能细胞因子的产生情况,探讨IPA的发病机制.方法 小鼠随机分为正常组、正常＋接种烟曲霉菌组（正常接菌组）和免疫抑制＋接种烟曲霉菌组（IPA模型组）,经鼻吸入烟曲霉孢子后在不同时相点处死小鼠,无菌取肺组织分别进行病理切片,烟曲霉菌落计数,RT-PCR法、Western blot法动态检测小鼠感染烟曲霉菌过程中肺组织TLR2、TLR4 mRNA表达、NF-κB p65蛋白、促炎细胞因子TNF-α、IL-1β及抗炎细胞凶子IL-10含量的变化规律.结果 （1）鼻吸入烟曲霉菌后72 h,IPA模型组肺组织出现严重炎症反应,并有大昔的菌丝生成,同时各时相点的烟曲霉菌负倚均高于正常接菌组;（2）与正常接菌组比较,IPA组TLR2 mRNA感染早期（24 h）低表达,感染后期（120 h、144 h）高表达;而TLR4mRNA则在感染过程中一直处于低表达状态;NF-κB p65感染早期（24 h）骤然升高后持续下降.（3）正常小鼠感染烟曲霉菌后,肺组织巾促炎细胞因子TNF-α、IL-1β在感染早期皆呈高表达,且最高表达量均出现在48 h或72 h,随后下降并恢复至正常水平.同时感染后期抗炎细胞因子IL-10表达水平升高;而IPA小鼠在感染甲.期抗炎症细胞因子IL-10大量释放,后期显著降低,促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β缓慢且低水平释放.结论 TLRs/NF-κB信号通路的异常激活,引起促炎细胞因子和抗炎细胞因子之间失去动态平衡,可能是导致侵袭性肺曲霉病发生发展的原因之一.
- 谢小梅李祥罗闳丹石青张海红饶振华
- 关键词：侵袭性肺曲霉病细胞因子
- NODs蛋白及其与TLRs相互调控在机体抗病原真菌感染中的作用被引量：2
- 2012年
- 宿主的模式识别受体（paaemrecognitionrecep—tors，PRRs）主要包括Toll样受体（TLRs）和核苷酸结合寡聚化结构域（NODs）两大类受体，其中TLRs是胞膜模式识别受体，NODs是近年来新发现的胞质模式识别受体。目前，已有大量关于TLRs与NODs在细菌感染免疫应答中作用的研究，
- 饶振华谢小梅
- 关键词：TLRS真菌感染模式识别受体TOLL样受体白及
