黄莹莹
- 作品数：40 被引量：48H指数：4
- 供职机构：浙江大学医学院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- 大型仪器共享平台运行机制综合创新探析被引量：3
- 2023年
- 大型仪器不仅是高校科学研究和社会服务的物质基础,也是高校研究生实验技能培养的重要载体。推进大型仪器共享平台运行机制创新是服务于高校创新驱动发展战略的重要举措。文章以浙江大学医学院大型仪器共享平台为例,阐述平台在组织构架、大型仪器调研和论证、研究生操作技能培养、实验技术队伍建设、安全管理等五个方面的创新举措。该校通过综合创新,建立高效、安全的大型仪器共享平台运行体系,提升平台服务能力和水平,促进平台内涵式发展,为高校科学研究、研究生培养和社会服务提供了良好的技术支撑。
- 方三华李艳伟黄莹莹刘双双
- 一种利用流式细胞分选仪获取指定粒径外泌体的分离纯化方法
- 本发明公开了一种利用流式细胞分选仪获取指定粒径外泌体的分离纯化方法，包括使用流式细胞分选仪进行外泌体分选，使用50μm空气喷射喷嘴，鞘液的压力为75‑80.5psi，样品流的压力与鞘液的压力差值为0.3‑0.6psi；阈...
- 宋兴辉杨尧顺王琳琳李艳伟邢月婷王佳佳黄莹莹郭春
- 文献传递
- 流式细胞分选仪高效分选条件的探索
- 2021年
- 目的针对如何提高流式分选试验分选得率和纯度的问题,建立高效的流式细胞分选条件,为流式分选技术应用提供参考依据。方法2019年10月至2020年6月设计以BD FACS Sorp Aria II为例,首先以微球样品作为研究对象,经检测不同分选速率、不同分选模式及不同喷嘴条件下的分选结果,分析其影响因素,并以优化的条件尝试高效分选naïve T细胞。结果70μm喷嘴,purity模式下,flow rate 1.0、3.0、5.0、7.04种速率的分选纯度均达到98%以上,但flow rate值越高,分选得率越低。不同分选模式分选时,yield模式的分选效率和得率都是最高的,分别为(99.67±0.33)%、(79.78±7.14)%,但其纯度显著低于另2种模式(均P<0.05)。3种喷嘴条件下分选后的纯度均达到98%以上,且得率差异无统计学意义(P>0.05)。结论分选原代naïve T细胞,70μm喷嘴,flow rate1.0,purity模式条件最合适。
- 黄莹莹徐琴姜宇
- 关键词：喷嘴纯度
- 一种新的皮肌炎患者外周血Treg淋巴细胞亚群的多色分析方法的建立
- 2022年
- 为探索建立新的皮肌炎患者外周血Treg淋巴细胞亚群分析方法,利用流式细胞仪设计并优化针对Treg细胞的15色流式染色方案。该文收集了皮肌炎患者和健康志愿者的外周血,用密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。该研究分别对抗体浓度、染色时间、孵育温度、是否避光、荧光素放置时间及上机收样电压等进行优化,最终完成单样品15色高通量流式检测,并结合FlowJo软件对目标细胞Treg亚群进行高阶数据分析。结果表明,(1)BLANK十字架法结合染色指数法可确立方案(Panel)的最适电压值;(2)抗体TIGIT BV421、HLA-DR PE、CD127 BV605、CD103 R718、CD25 PE-Cy7滴定后的最优标记量分别为1.25、1.25、3、2.5、5μL/test(100μL染色体积/test);(3)多色流式抗体染色的最佳条件是4°C、避光条件下孵育30 min;(4)样本制备后应尽快检测,放置时间不超过24 h。该研究中建立的15色Panel可成功分析人PBMC样本Treg细胞亚群及相关活化分子的表达情况。此方法可应用于以皮肌炎为代表的伴有Treg细胞缺陷的外周血Treg淋巴细胞亚群的分析。
- 黄莹莹姜宇邢月婷李艳伟郭春王佳佳徐琴
- 关键词：皮肌炎
- 一种细胞外囊泡的流式检测方案的探索与建立被引量：1
- 2021年
- 该研究旨在探索细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)分析的标准化流程,建立一种高效的EVs检测方法,为EVs功能及临床转化研究提供技术支撑。实验采用经典的超速离心法分离EVs,借助已知直径的聚苯乙烯微球设定并优化流式检测EVs的参数,联合应用散色光信号及荧光信号对EVs进行双参数分析鉴定,最后通过电镜观察及蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)对鉴定结果进行验证。结果显示,参照纳米微球设定的条件可清楚地将100 nm颗粒信号与噪音信号分离,且微球稀释的梯度和检测到的浓度之间呈线性相关,可以对EVs进行定量分析;荧光染色结果显示,EVs呈CFSE(5,6-Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,蛋白结合染料)及FM1-43(fixable analog of FM?1-43 membrane stain,亲脂性染料)双阳性,占比约3%;电镜验证其形态及直径与预期相一致。该研究通过优化流式方案及双荧光参数分析鉴定探索了EVs流式检测的标准化流程,建立了高效、准确的EVs流式检测方法。
- 郭春王佳佳李艳伟邢月婷宋兴辉黄莹莹叶小康
- 关键词：流式细胞术
- 一种流式鞘液桶内桶固定装置
- 本实用新型提供了一种流式鞘液桶内桶固定装置，包括底板，底板底面四角分别安装有万向轮，底板顶面中间处竖向垂直固定有与底板长轴垂直的中间板，中间板件底板上面隔成两个鞘液桶固定空间，中间板两侧安装有至少一个矩形架，矩形架为半封...
- 李艳伟邢月婷刘丽黄琼黄莹莹王佳佳郭春阿依西布.萨吾提周南
- “小鼠脾脏单细胞悬液不同制备方法及其流式细胞术检测”综合实验的建立与探索被引量：3
- 2023年
- 由于流式细胞术应用中涉及的样品制备、仪器使用和数据解读均比较复杂,该文对流式实验教学的内容和形式进行了有益的探索,建立了“小鼠脾脏单细胞悬液不同制备方法及其流式细胞术检测”的综合性实验。新方法不仅包含小鼠原代组织取材、单细胞悬液不同制备方法(手动解离、自动解离)、流式细胞仪计数、显微观察等步骤,而且能涵盖流式抗体的配色与标记、流式细胞仪操作、数据分析(T淋巴细胞亚群的分群)等多个知识点,并围绕不同解离方法对实验结果的影响进行了探讨,极大地改善了实验教学效果和质量,充分发挥了流式细胞术在高校教学和科研中的重要支撑作用,使学生学会完整的流式技术链条,并提升了其科研能力与创造力,从而为培养复合型科研人才提供助力。
- 黄莹莹邢月婷阿依西布·萨吾提杨丹李艳伟王佳佳郭春周南
- 关键词：单细胞悬液实验教学
- 研究生大型仪器操作能力培养的探索和实践
- 2022年
- 文章以浙江大学医学院公共技术平台为例,从制度建设和组织保障、综合培养体系建设等方面阐述如何推动和实施研究生的大型仪器操作能力培养,如何实现共享平台大型仪器的高效利用和研究生培养的有机结合。实践表明,提升研究生的大型仪器操作能力,不仅显著提高大型仪器的使用效率和开放共享水平,而且助推研究生高水平科研产出,促进科研高水平和高质量发展。
- 方三华杨丹刘丽黄莹莹刘双双肖桂凤
- 稀有细胞群单细胞分选方案的优化
- 2020年
- 目的:探讨稀有细胞群单细胞分选方案的优化。方法:分析仪器设备的设置、分选前细胞的准备和分选方案的选择。结果:通过提供的单细胞分选的方案,使单克隆形成率达86.5%。结论:建立了单细胞分选的优化方案,并重点分析了提高单克隆形成率的影响因素和解决方法。
- 宋兴辉李艳伟王佳佳邢月婷黄莹莹郭春
- 关键词：细胞活性
- 水稻内源木聚糖酶osx基因的克隆及表达分析被引量：2
- 2013年
- 为进一步了解植物内源木聚糖酶基因结构及其表达特性,从水稻中克隆和表达了一种内源木聚糖酶基因。通过序列比对分析确定保守区序列,以PCR扩增得到的保守区序列从众多水稻木聚糖酶预测序列中"钓取"可能的目标基因,并以此基因为模板设计引物,通过RT-PCR扩增得到一条长度为1 443 bp的基因片段osx,测序结果与水稻木聚糖酶基因预测序列NM_001061680一致性高达99%,该序列编码480个氨基酸,经预测不存在信号肽序列。构建表达载体pET28-a(+)-osx,导入大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,该表达产物未检测到木聚糖酶活性。受大麦和玉米内源木聚糖酶基因表达的前体为无活性蛋白需要剪切加工的启示,进一步通过在线蛋白同源建模分析,设计引物去掉蛋白N端约120个氨基酸,C端约40个氨基酸,保留"Glyco-hydro-10"结构域,使其成功实现了原核活性表达,表达蛋白约40 kDa,木聚糖酶活性为11.53 IU/mL。
- 黄莹莹马明章孙仁杰詹仪花翁晓燕
- 关键词：水稻木聚糖酶基因同源建模
