于学东
- 作品数：20 被引量：52H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 鼠疫耶尔森氏菌多重PCR-微孔板杂交-EIA检测技术的研究
- 目的:建立鼠疫耶尔森氏菌防污染多重PCR—微孔板杂交—EIA检测鉴定技术用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测鉴定.方法:针对分别存在于鼠疫耶尔森氏菌pMT1和pPCP1质粒上的毒力基因caf1和pla,以及一段276bp染色体序...
- 于学东
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌多重PCR微孔板杂交防污染
- 文献传递
- PCR检测鼠疫耶尔森氏菌研究进展被引量：10
- 2003年
- 快速确诊鼠疫对鼠疫的防治工作至关重要。传统的细菌学“四步检查法”和血清学方法检测虽可确诊鼠疫 ,但存在烦琐、费时、费用高、不能进行快速诊断等弊病。PCR方法具有快速、特异、敏感的特点 ,尤其对培养条件苛刻、生长缓慢或已死亡的病原体检测优势更为明显 ,国内外学者现已建立了多种PCR方法用于鼠疫的检测 ,鼠疫PCR方法简便安全 。
- 于学东杨瑞馥
- 关键词：PCR鼠疫耶尔森氏菌
- 日本脑炎病毒非结构蛋白NS5对IFN-α介导的信号转导通路的抑制作用被引量：7
- 2008年
- 目的探讨日本脑炎病毒抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路过程中发挥关键作用的病毒特异蛋白,为阐明日本脑炎病毒抑制Ⅰ型IFN介导的JAK-STAT信号转导通路的作用机制奠定基础。方法分别构建日本脑炎病毒编码的7种非结构蛋白基因(NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B和NS5)的重组真核表达载体。采用间接免疫荧光法和Western blotting观察它们在细胞内的表达及定位情况。利用含萤火虫荧光素酶(Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,观察表达病毒不同非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路的活化程度。构建融合表达红色荧光蛋白的STAT1重组真核表达载体pRed-STAT1,利用该重组载体在表达病毒非结构蛋白的细胞内观察融合蛋白Red-STAT1在IFN-α作用下的细胞内定位情况。同时,对表达病毒非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的STAT1分子的磷酸化水平进行检测。结果日本脑炎病毒的7种非结构蛋白均可在哺乳动物细胞内正确表达,而且表达蛋白均位于细胞质中。在这7种非结构蛋白中,NS5可阻断STAT1分子的核转运及抑制STAT1分子的磷酸化水平,从而抑制IFN-α介导的细胞内JAK-STAT信号转导通路的活化。结论日本脑炎病毒的非结构蛋白NS5对Ⅰ型IFN系统的信号转导通路具有显著的抑制作用,可能是一种Ⅰ型IFN系统的拮抗蛋白。
- 赵慧邓永强陈水平姜涛韩剑峰李晓峰于学东秦成峰秦鄂德
- 关键词：病毒非结构蛋白质类
- 衣壳蛋白缺失突变登革病毒的制备与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的制备登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的衣壳蛋白缺失突变病毒。方法在DEN2-43株病毒感染性全长cDNA克隆的基础之上,利用融合PCR技术构建衣壳蛋白基因缺失的全长cDNA,将其线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔法导入宿主细胞获得衣壳蛋白缺失突变病毒。结果序列比对表明,所获得的恢复病毒带有与预期一致的缺失突变。结论成功制备衣壳蛋白缺失突变病毒,为进一步研究衣壳蛋白基因突变对登革病毒生物学特性的影响奠定了基础。
- 朱武洋秦鄂德于曼秦成峰于学东
- 关键词：登革病毒
- 登革四价疫苗研究进展
- 2008年
- 登革病毒感染引起的登革热和登革出血热是重要的蚊媒病毒病。近20年来,在全球范围内登革出血热的发病率和病死率急剧上升,但目前仍缺乏安全有效的疫苗。着重介绍目前已经或正在进入临床研究阶段的四价登革减毒活疫苗,以及灭活疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗和DNA疫苗的研究进展。
- 于学东秦鄂德
- 关键词：登革病毒减毒活疫苗
- 登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用。方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase,R.luc)报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6)。将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R.luc报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测。结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调。结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用。
- 于学东姜涛陈水平邓永强韩剑峰赵慧李晓峰刘然于曼秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革病毒复制子报告基因翻译
- PCR快速鉴定鼠疫耶尔森氏菌被引量：10
- 2003年
- 建立一种简便、快速、特异的PCR检测方法,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。针对鼠疫耶尔森氏菌特异的一段染色体序列3a设计引物,扩增一276 bp片段的鼠疫标识序列。应用该PCR反应体系,对我国17个生态型及1个待定的生态型共计275株鼠疫耶尔森氏菌及48株相关菌株的PCR扩增结果表明,实验菌株均扩增出预期的276 bp片段产物带,48株相关菌株均阴性,其检测灵敏度为100 pg DNA。说明该方法用于鼠疫耶尔森氏菌的检测鉴定简便、快捷,具有很高的特异性和敏感性。
- 于学东裴德翠周东生宋亚军郭兆彪王津杨瑞馥
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌PCR引物设计
- 一种检测甲型流感病毒的环介导等温扩增通用试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种检测甲型流感病毒的环介导等温扩增通用试剂盒及其应用。本发明提供的专用引物，包括引物1、引物2、引物3，引物4，所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4的核苷酸序列分别为序列表中的序列1、序列2、序列...
- 姜涛刘娟于学东秦鄂德秦成峰
- 文献传递
- PCR快速鉴定鼠疫耶尔森氏菌
- 本文针对鼠疫耶尔森氏菌特异的一段染色体序列3a设计引物,扩增一276bp片段的鼠疫标识序列。研究结论:该方法用于鼠疫耶尔森氏菌的检测鉴定简便、快捷,具有很高的特异性和敏感性;为鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定提供了有力手段。
- 于学东裴德翠周东生宋亚军郭兆彪王津杨瑞馥
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌PCR检测
- 文献传递
- 含有海肾萤光素酶报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子的构建被引量：6
- 2008年
- 目的：构建含有海肾萤光素酶（Renilla luciferase，R．luc）报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子。为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段。方法：利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型病毒亚基因组复制子（DENRP），用顺式水解酶元件（cis-acting hydrolase element，CHYSEL）技术将R．luc报告基因插入到DENRP缺失的结构基因区，构建含有R．1uc报告基因的复制子（DEN-R．luc2A-RP）。将构建的复制子线性化并体外转录成RNA后，经电穿孔转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光、RT．PCR和R．luc检测技术对复制子进行鉴定。结果：所构建的prM-E基因缺失的复制子和含有海肾萤光素酶报告基因的复制子，均可在BHK-21细胞中自主复制并稳定表达病毒特异蛋白。DEN-R．luc2A-RP可持续表达外源R．luc报告基因21d，在转染后24～96h R．luc荧光信号呈线性增强。在该区间进行实时检测可显示复制子复制和翻译水平的变化。结论：获得了两株可在BHK-21细胞中稳定表达的复制子，为进一步研究登革4型病毒复制和翻译机制奠定了基础。
- 于学东秦成峰姜涛陈水平邓永强刘然赵慧李晓峰朱武洋于曼秦鄂德
- 关键词：登革病毒复制子
