何晓阳
- 作品数：17 被引量：112H指数：4
- 供职机构：深圳市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目广东省大学生创新实验项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学环境科学与工程更多>>
- 雌激素样化合物对人细胞色素氧化酶2A6基因的转录调控
- 2014年
- 目的建立尼古丁代谢酶CYP2A6报告基因高容量筛选系统,分析环境和天然雌激素样化合物对CYP2A6基因转录的影响。方法构建3种CYP2A6基因转录上游-2460^+1全长、增强子-启动子串联和3倍增强子-启动子串联的荧光素酶报告基因重组体pGL3-2A6 3UP,GL3-2A6 EP和pGL3-2A63EP,分别与雌激素受体α(ERα)及海肾荧光蛋白表达载体三重共转染人肝HepG2细胞。用双荧光素酶报告基因分析技术,选择确认对雌二醇诱导应答最强的CYP2A6报告基因系统;分别用氰戊菊酯、2,2',4,4'-四溴联苯醚、4-二羟基二苯基丙烷、全氟辛酸铵、淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素等7种拟雌激素化合物处理转染报告基因的HepG2细胞,同时设置雌二醇10 nmo·lL-1阳性和0.1%DMSO阴性对照,48 h后测定各组细胞相对荧光强度,分析评估拟雌激素物质对CYP2A6基因转录的诱导作用。结果 3种CYP2A6报告基因重组体中pGL3-2A6 3EP对雌二醇诱导应答最强,且呈显著量效依赖关系。7种拟雌激素化合物对CYP2A6报告基因均具显著诱导作用,其中,2,2',4,4'-四溴联苯醚1.0~100.0 nmol·L-1诱导倍变值为1.45±0.13~3.30±0.13(P<0.01),诱导效应最强。表现出相似的量效诱导关系,淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素10μmo·lL-1时的诱导倍变值为2.41~2.83(P<0.01)。结论建立灵敏可靠、重复性强的CYP2A6报告基因高容量筛选系统,证实多种拟雌激素物质通过激活ERα诱导CYP2A6报告基因转录。提示环境拟雌激素污染物和药材食材雌激素样活性物质可诱导个体尼古丁代谢酶基因表达,从而干扰个体尼古丁代谢清除活性及其对环境化合物致癌代谢活化水平。
- 黄春玲邓寒柯雪娥韩霜雪何晓阳
- 关键词：细胞色素P450CYP2A6
- 阿尔茨海默病转基因小鼠肝内核受体和细胞色素氧化酶基因转录谱变化被引量：1
- 2015年
- 目的探讨阿尔茨海默病(AD)病变与肝Ⅰ相药酶基因表达的相关性,为早期和长期药物干预AD病程提供实验参考。方法制备B6.129-PS1M146V/APPSwe/Tau P301L三重转基因AD模型小鼠(3×Tg AD小鼠)及同系非转基因正常小鼠(NTg小鼠)肝组织总RNA和总蛋白质样品,逆转录PCR/实时荧光定量PCR技术检测肝核因子4(HNF4)等7种核受体和细胞色素氧化酶P4501a2(Cyp1a2)等7种CYP基因mRNA相对表达量,比较基因转录谱差异;Western蛋白印迹法检测技术检测差异显著的目的基因蛋白质水平。结果与NTg小鼠相比,3×Tg AD小鼠HNF4、雌激素受体(ERα)及组成型雄甾烷受体均下调近66%(P<0.01),孕烷X受体和芳香烃受体分别上调1.84和1.64倍(P<0.05),糖皮质激素受体及受氧化应激激活的核因子E2相关因子未见显著变化;主要药物代谢酶Cyp2b10及Cyp2a5 mRNA分别降低至正常小鼠水平的3%(即下降97%,P<0.01)和30%(P<0.05),Cyp2e1、Cyp2j9、Cyp3a11基因的转录水平则分别上调了2.26倍、2.42倍和3.66倍(P<0.05);Cyp1a2和Cyp2d22基因转录在两种小鼠中无明显差异。Western蛋白印迹分析证实,3×Tg AD小鼠ERα和CYP2a5明显下降(P<0.05)而Cyp3a11表达则明显上升(P<0.05),蛋白质表达变化的趋势与其相应mRNA水平改变一致。结论 3×Tg AD小鼠肝内核受体基因及CYP酶基因转录谱发生显著改变,提示AD病变可能干扰机体肝代谢功能,对机体内源性及外源性化合物生物转运产生影响。
- 韩双雪郑海洋刘洋麦紫君黄秀娴何晓阳
- 关键词：阿尔茨海默病AD模型小鼠核受体细胞色素氧化酶基因转录
- 维生素C粉末分解动力学研究被引量：9
- 1990年
- 在有氧避光条件下,用恒温恒湿加速试验法,研究了在相对湿度小于临界相对湿度时,维生素C粉末的表观变色速率常数k_C与温度、湿度的关系为:k_C=k′exp(-E_a/RT)exp(m′RH),k′与m′为常数,RH为相对湿度,E_a为活化能。RH<70％时的E_a=104.33 kJ·mol^(-1)。还研究了在各种相对湿度下维生素C粉末含量变化的曲线方程为:C=N/(1+Bt^n),速率方程为:k_d为分解反应的表现速率常数,N为原始百分含量,C为时间t的含量,B与n为常数。RH为97,93与79.5％时的E_a分别为86.87,88.22与202.64 kJ·mol^(-1)。
- 何晓阳殷恭宽马宝忠
- 关键词：维生素C分解动力学
- 对非生物类专业生物学实验课的改革与创新被引量：3
- 2011年
- 非生物学专业公选课生命科学基础实验的基本目的是引导学生学习科学研究的基本思路与实践方法。研究如何转变传统的教学理念,在普及基本知识和训练基本实验技能中,整合适当的探索性研究内容。通过围绕着一些重要的生命科学概念建设不同的探索性实验项目,如实地考察全国示范性工程的深圳市湿地生态保护工程,使学生主动学习,深化、扩展、整合各种相关知识。学生们通过课程学习,不仅得到生命学科基本知识普及与基础技能训练,而且能够改善其批判性思考、综合性分析和进行科学交流能力,从而成为具有创新性思维并持续终生学习、勇于应对将来各种科学和人文挑战的新型人才。
- 何晓阳徐晓峰黄健子陈伟钊聂晓云
- 关键词：生物学实验实验教学
- 阿尔茨海默病的防治策略研究进展被引量：46
- 2013年
- 评述了阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的多种病因学说,包括胆碱能学说、β-淀粉样级联学说、ABC学说(aging,beta-amyloid,channel)、tau蛋白过度磷酸化学说、氧化应激学说、神经细胞凋亡学说和基因突变学说等.指出AD是多因素引起的病变,其发病机制也必然有多种.由于该病与人体衰老过程密切相关,发病机理复杂,且神经细胞丢失后不具再生能力,这就决定了研究治疗AD有效药物的艰巨性.还指出AD防治工作应重视早期预报和早期干预,发展早期诊断方法包括正电子发射计算机断层扫描、磁共振成像,及血液和尿液中寻找灵敏的生物标志物等技术方法.目前有关AD防治药物包括一线治疗药物、疫苗、尚在研究阶段的药物、辅助性治疗药物、中药以及医疗保健品.前3类药物因疗效或研究结果长期未取得突破性进展,人们开始关注后3类药物对延缓AD的作用及机理.课题组重点开展后3种药物防治AD的作用和机理研究,发现硒代蛋氨酸、辅酶Q-10和中药组分淫羊藿甙对防治AD有好的疗效.综述了目前抗AD药物的研究现状和面临的挑战,提出AD的防治策略是:摒弃针对单一致病因素的治疗思路,从多因素及内在相互联系的系统生物学角度,开展AD防治机制及新药研发.
- 倪嘉缵陈平刘琼郑易之何晓阳宋国丽应明续旭
- 关键词：神经退行性疾病阿尔茨海默病病理学医学成像药物疗法
- 从分子水平探索旋转恒定磁场对机体作用之机理被引量：25
- 2001年
- 用ＲＣＭＦ旋磁治疗装置研究磁场对信息物质的影响，放射免疫测定发现磁场促使血浆内啡肽显著升高；荧光分光光度法和ＥＬＩＳＡ法测定发现磁场可以显著抑制５－ＨＴ及顺铂等中枢性致呕药物引起的呕吐反应，并同步伴有脑组织、小肠组织５－ＨＴ水平的可逆性下降．磁场处理对小鼠５－ＨＴ水平的影响表现出明显的窗口效应和滞后效应，磁场对药物致呕的抑制效应与其对５－ＨＴ的下调水平有平行相关关系．提示磁场对体内５－ＨＴ水平的降低，可能是其抑制细胞毒性化疗药物致呕的内在基础．应用硝酸还原酶反应－分光光度法和ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学技术，发现磁场可促使丘脑下部一氧化氮（ＮＯ）含量显著升高，并具有显著滞后效应．ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性神经细胞及ＮＡＤＰＨ－ｄ和血管加压素（ＡＶＰ）双染阳性神经细胞集中分布在丘脑下部室旁核、室周核和视上核，但不存在于视交叉上核，提示室旁核、室周核和视上核一氧化氮肽能神经细胞是丘脑下部的一氧化氮的主要来源．磁场处理后大鼠丘脑下部一氧化氮含量较正常对照组显著升高应归因于这些神经细胞受磁场作用表达增强．一氧化氮和血管加压素的共存可能对磁场调节内分泌具有一定意义．发现磁场可促使肾上腺一氧化氮量显著升高，并维持一定时间，神经肽Ｙ免?
- 张小云罗振国何晓阳韩庆国张维德
- 关键词：Β-内啡肽一氧化氮
- 特异促进肝细胞CYP3A4基因高表达的慢病毒表达载体及其构建方法与应用
- 本发明提供一种特异促进肝细胞CYP3A4基因高表达的慢病毒表达载体，包括pLVX-AcGFP-C1表达载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和CYP3A4基因cDNA序列；所述多克隆位点包括Xho I酶...
- 徐新云毛侃琅何晓阳毛吉炎应明
- 文献传递
- 深圳市南山区不同水体中的原生动物被引量：1
- 1998年
- 自１９９４年到１９９６年对深圳市南山区西丽湖、香蜜湖及深圳大学等地区部分水体进行了原生动物普查，并对部分水样进行了常规化学分析．水体ｐＨ值范围在６．４４～８．０２，盐度范围在０．４３‰～１５．１３‰，其中分布的原虫已确认的种类有７６种．本文结果对该地区微观生态调查提供了参考．
- 何晓阳韩庆国张小云
- 关键词：水体污染生物监测原生动物水化学
- CYP3A4高表达肝细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响
- 2013年
- 目的建立CYP3A4高表达肝细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响。方法 PCR扩增CYP3A4基因并将其克隆到慢病毒高表达载体中,将已经构建的慢病毒载体进行转染后,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌罗霉素进行筛选得到CYP3A4高表达肝细胞株,通过荧光定量PCR和Western蛋白质印迹法鉴定细胞株。用三氯乙烯0,0.25,0.5,1.0,2.0和4.0mmol·L-1对正常肝肝细胞和CYP3A4高表达肝细胞进行染毒12h,实时定量PCR检测凋亡基因bcl-2,胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9以及癌基因c-fos,c-myc,K-ras和p53的表达。结果测序证明重组慢病毒高表达载体CYP3A4基因序列正确,荧光定量PCR检测CYP3A4高表达肝细胞株比正常肝细胞CYP3A4基因表达提高94倍。Western蛋白质印迹结果显示,CYP3A4高表达肝细胞株CYP3A4蛋白表达水平是正常肝细胞的2.36倍。CYP3A4高表达肝细胞bcl-2mRNA表达水平随三氯乙烯浓度增加呈下降趋势,与正常细胞相比,三氯乙烯0.25和0.5mmol·L-1使CYP3A4高表达肝细胞中的bcl-2mRNA明显升高(P<0.01);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0mmol·L-1处理使CYP3A4高表达肝细胞组的凋亡基因胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9的mRNA表达水平明显升高(P<0.05);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0mmol·L-1处理的CYP3A4高表达肝细胞c-fos、c-myc和k-ras基因的表达显著升高(P<0.01),p53表达水平明显下降(P<0.01)。结论三氯乙烯对CYP3A4高表达肝细胞株中的凋亡基因和癌基因表达具有明显促进作用,说明CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素。
- 毛侃琅徐新云何晓阳毛吉炎张然谢杏秦逍云
- 关键词：肝细胞细胞色素P-450CYP3A4慢病毒感染三氯乙烯
- 定点突变法确定人体CYP2A6和CYP2A13香豆素代谢的关键氨基酸被引量：3
- 2009年
- 【目的】通过比较人体主要尼古丁代谢酶CYP2A6和CYP2A13野生型及突变体酶蛋白对香豆素7-羥化反应的催化动力学特征,确定影响两者催化活性差异的关键氨基酸残基,提供建立评估人群尼古丁代谢酶基因多态性与吸烟行为及癌症易感性生物标记的依据。【方法】运用定点突变和Sf9昆虫杆状病毒蛋白表达体系产生CYP2A6和CYP2A13在300,301以及369位点氨基酸互换的突变体蛋白质,测定系列香豆素浓度下的各个酶蛋白对香豆素7-羥化的催化反应活性,获得动力学参数并与野生型酶蛋白进行比较分析。【结果】与野生型CYP2A6相比较,其Ile300→Phe突变体催化效率(Kcat=Vmax/Km)显著下降而Gly301→Ala突变体催化效率显著上升(1.64和8.02相对于野生型3.56,P<0.01)。与之相对应,CYP2A13的Phe300→Ile突变体催化效率则明显上升而Ala301→Gly突变体催化效率显著下降(1.03和0.06相对于野生型的0.27,P<0.05)。这些酶催化特性的改变,主要是由于Vmax的改变所致。369位的氨基酸残基,无论是Ser还是Gly对CYP2A6或CYP2A13的香豆素7-羥化反应催化活性均无明显的影响。【结论】300和301位的氨基酸是影响CYP2A6及CYP2A13对香豆素7-羥化反应催化活性的关键残基,而369位氨基酸不影响此活性。
- 何晓阳孙莉SHEN Jian洪钧言
- 关键词：CYP2A6点突变关键氨基酸
