- 中华仓鼠卵巢细胞在检测百日咳菌免疫原中的应用被引量：3
- 1992年
- 采用中华仓鼠卵巢(CHO)细胞检测百日咳菌主要免疫原—百日咳毒素(LPF)和丝状血凝素(FHA),仅发现LPF使CHO细胞呈现明显的特异性簇聚反应,敏感性高,能检测出100pg/ml蛋白氮抗原量。与小鼠白细胞增多促进试验相比,CHO细胞法具有简便、经济、省时等优点,可作为一种检测百日咳毒素免疫原的实用辅助方法。
- 王祖森张蓉杨晓明何长民
- 关键词：卵巢细胞仓鼠
- rHB-DTaP联合疫苗中抗-HBs抗体应答被引量：3
- 1997年
- 在乙肝、白喉、破伤风、无细胞百日咳（ｒＨＢ－ＤＴａＰ）四联疫苗的研制过程中，我们采用基因工程乙肝疫苗（ＣＨＯ），精制白喉、破伤风类毒素和无细胞百日咳菌苗原液，按不同的稀释液，不同的加入顺序以及不同的含量等制备四联疫苗，并以单价基因工程乙肝疫苗（ｒＨＢ）做对照，进行小鼠试验，接种４周后采血检测抗－ＨＢｓ水平。结果表明，不同配方的四联疫苗中ｒＨＢ与ＤＴａＰ均无干扰，相容性好；抗－ＨＢｓ免疫应答水平与单价苗（ｒＨＢ）无显著性差异（Ｐ＞０．０５），使用生理盐水制备的ｒＨＢ－ＤＴａＰ其抗－ＨＢｓ免疫应答水平较醋酸盐缓冲液者高（Ｐ＜０．０５），ｒＨＢ－ＤＴａＰ中的抗－ＨＢｓ免疫应答水平与ｒＨＢ原液的加入顺序无关（Ｐ＞０．０５）；ｒＨＢ含量以２０μｇ／ｍｌ为宜。
- 任魁孙述学郑菊梅何长民
- 关键词：联合疫苗白喉
- 百日咳杆菌69KDa外膜蛋白的分离纯化及生物学特性研究被引量：1
- 1995年
- 本文发展了一种从百日咳杆菌Ⅰ相菌株中纯化６９ＫＤａ外膜蛋白的简易方法，将细菌体经加热浸提、乙醇沉淀蛋白、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ＿（５０）柱层析精制而成。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹、光密度仪扫描分析，证明纯化制剂为均一的、特异性的６９ＫＤａ外膜蛋白，其收率为５４．２％，纯度达９９．２％，每微克６９ＫＤａ蛋白制。剂中内毒素含量低于０．８５ＥＵ；ＰＴ残留量小于０．１０５ｎｇ。ｆＬ６９ＫＤａ蛋白抗血清能凝集含有３因子凝集原的百日咳菌株。用纯化的６９ＫＤａ蛋白免疫小鼠，能够保护小鼠抵抗致死剂量的１８３２３菌株的脑内攻击，与ＰＴ、ＦＨＡ组成的无细胞百日咳菌苗的效力，较含ＰＴ和ＦＨＡ的组分菌苗为高。表明６９ＫＤａ蛋白与ＰＴ、ＦＨＡ显示协同保护作用，有望成为无细胞百日咳菌苗的另一候选组分。
- 孙述学何长民
- 关键词：百日咳杆菌菌苗提纯
- DTP-rHB联合疫苗的研制
- 1999年
- 本文对制备ＤＴＰ—ｒＨＢ联合疫苗的实验条件进行了初步探索，并优选最佳配方制备的三批连续中试产品经安全、效力试验测定，结果表明，联合疫苗中各组分均能达到相应规程要求，抗原间无干扰作用，相容性好。联合疫苗中的ｒＨＢ免疫应答较单价苗明显提高（Ｐ＜ ０．０５），有增强作用。ＨＢｓＡｇ含量以２０ μｇ／ｍ ｌ为宜，稳定性试验证明，该联合疫苗质量稳定、安全、有效。
- 任魁孙述学李玉陈爱荣魏然宋继萍郑菊梅何长民
- 关键词：百日咳白喉破伤风乙型肝炎联合疫苗
- 无细胞百日咳菌苗的抗原性和免疫原性研究被引量：12
- 1991年
- 采用百日咳杆菌C.S中国株经培养、盐析、浸提、组分分离以及脱毒等工艺,制备出含有LPF和FHA两种主要免疫原的无细胞百日咳菌苗。SDS-PAGE的结果表明,菌苗的LPF和FHA组分和参考品的相同,测得的分子量与文献报道的结果相一致。小鼠体重减轻、白细胞增多、组织胺敏感以及热原质等试验证明,菌苗中无内毒素;菌苗的免疫原性经我国和日本的国家检定部门检定,其效价为14.5～44.3IPU/ml,说明菌苗是安全有效的,
- 何长民杨晓明陈平纡陈爱荣张蓉程夷边淑娟吕桂荣
- 关键词：百日咳菌苗抗原性
- 吸附百日咳、白喉、破伤风、乙肝联合疫苗的稳定性研究
- 2002年
- 对 6批吸附百日咳、白喉、破伤风、乙肝联合疫苗 (DTP rHB) ,分别置不同温度、不同时间进行效力、安全稳定性试验。结果表明 ,2～ 8℃保存 2 5年、18～ 2 2℃保存 6月、3 7℃保存 3周其效力和安全试验仍能达到相应规程要求 ,长期保存应以 2～ 8℃为宜。
- 任魁孙述学李玉魏然宋继萍郑菊梅何长民
- 关键词：有效性百日咳白喉破伤风乙肝
- ELISA在检测百日咳杆菌免疫原中的应用被引量：4
- 1992年
- 本文采用ELISA技术,实验研究了LPF-ELISA和FHA-ELISA的最适条件以及LPF和FHA免疫原在纯化过程中的动态。实验结果表明,LPF-ELISA的HP最佳包被浓度为0.413μg/100μl;所用第二抗体(抗LPF兔血清)的最佳浓度为2.8EU/100μl。FHA-ELISA的抗FHA豚鼠血清的最佳包被浓度为0.05EU/100μl,所用第二抗体(抗FHA兔血清)的最佳浓度为2.25EU/100μl。LPF和FHA在经培养、盐析、浸提、超速和分级离心后,其ELISA单位与蛋白量密切相关,呈同步消长。证明用LPF-ELISA和FHA-ELISA作新菌苗批量生产工序中的质量控制,是一种行之有效的方法。
- 陈平纡杨晓明陈爱荣何长民
- 关键词：ELISA百日咳杆菌
- 百日咳杆菌LPF和FHA的纯化及其特性的研究
- 1993年
- 采用羟基磷灰石、HP—Sepharose 4B和Sephadex G—200色层分析方法,精制出了单一的白细胞增多促进因子(LPF)和丝状血凝素(FHA)组分.经SDS—PAGE证明,精制LPF呈现四条带,其分子量分别为30,000、27,000、23,000和14,000;精制FHA呈现三条带,其分子量分别为185,000、130,000、105,000.ELISA检测证明,精制LPF为620EU/mL,精制FHA为402EU/mL;小鼠LP和HS活性测定结果证明,0.136μg的精制LPF可引起白细胞的明显增高,0.015μg可引起HS活性,0.29μg可引起组胺致敏小鼠50%的死亡;CHO细胞簇聚活性检测结果显示,3.3pg的精制LPF可引起CHO细胞明显的簇聚反应;免疫双扩散试验结果显示,精制LPF和FHA分别与其相应的抗LPF和抗FHA血清形成特异性的沉淀线;电镜结果显示,精制LPF呈直径约6nm的球形颗粒;精制FHA呈2×40—100nm的丝状结构.
- 潘兹书何长民
- 关键词：白细胞增多百日咳杆菌纯化
- 肽核酸寡聚体研究进展
- 1998年
- 肽核酸寡聚体是一类９０年代发现的新型ＤＮＡ同类物，在生物化学和分子生物学领域已得到广泛应用。本文对ＰＮＡ寡聚体的结构、特性、合成。
- 王剑虹何长民
- 百日咳杆菌粘着素的分子克隆、表达、纯化及生物学特性研究被引量：2
- 1997年
- 大肠杆菌中克隆了编码百日咳杆菌粘着素（Ｐｅｒｔａｃｔｉｎ，Ｐｒｎ）１．９ｋｂ的结构基因，获得了４株表达Ｐｒｎ的重组菌株，以融合蛋白的形式，对Ｐｒｎ进行了表达。Ｐｒｎ融合蛋白的表达量占细胞总蛋白量的４６．４％。融合蛋白纯度达８９．２％。免疫印迹证明，抗天然Ｐｒｎ的单克隆抗体ＢＰＥ３能识别重组菌中及纯化的Ｐｒｎ融合蛋白。Ｐｒｎ融合蛋白能与抗百日咳杆菌Ⅰ相血清发生特异凝集反应。Ｐｒｎ融合蛋白及重组菌免疫小鼠后，对百日咳杆菌毒力株１８３２３的脑内攻击，保护率达６０～６２．５％。
- 杨晓明何长民
- 关键词：百日咳杆菌分子克隆生物学特性
