俞昭旸
- 作品数：11 被引量：16H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 旋毛虫p43与p53核酸疫苗的构建及其免疫保护性被引量：1
- 2013年
- 为探讨旋毛虫p43、p53基因的核酸疫苗对小鼠的免疫保护效果与免疫保护机制,将p43、p53基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,分3次肌肉注射免疫3组昆明小鼠。于三免后2周经口感染旋毛虫肌幼虫(100蚴/只),在攻虫后第7天和第35天剖杀小鼠,计算成虫减虫率、肌幼虫减虫率和繁殖力指数,评估其免疫效果。在各时间点上取小鼠血清用于检测抗体水平和脂肪酸结合蛋白(H-FABP)。结果显示,试验各组成虫减虫率与对照组相比差异显著(P<0.05),LPG及RCI减虫率与对照组相比均差异极显著(P<0.01);IgG抗体水平提高,与PBS组差异显著(P<0.05);各组H-FABP检测结果均低于70pg/mL。结果表明旋毛虫p43与p53基因的核酸疫苗具有较好的抗旋毛虫的免疫保护效果,且两核酸疫苗对小鼠心肌无损伤。
- 庞宇李巍韩彩霞伊娜娜刘畅俞昭旸宋铭忻
- 关键词：旋毛虫P43P53核酸疫苗免疫保护性
- 小鼠TLR2的克隆表达及生物学活性分析被引量：1
- 2013年
- 采用RT-PCR方法从小鼠巨噬细胞中扩增Toll样受体2(mTLR2)基因,得到基因全长CDS,经克隆测序正确后构建真核表达质粒pcDNA3.1-mTLR2。重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别用RT-PCR与免疫荧光检测其表达及细胞定位。利用TLR2激活物pam3csk4刺激转染重组质粒的HEK293T细胞后,用双荧光素酶报告基因系统分析其下游转录因子NF-κB的转录活性。结果显示,mTLR2转染后成功表达并定位于细胞膜,pam3csk4刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组,说明表达的mTLR2具有野生型分子的功能。本研究成功克隆与表达了mTLR2基因且表达产物具有生物学活性,为研究TLR2信号通路及其在抗寄生虫感染中的作用奠定了基础。
- 俞昭旸李巍唐颖李兴超刘畅禹洋徐佳宋铭忻
- 关键词：TOLL样受体2真核表达核转录因子-ΚB
- 小鼠TLR2的克隆表达及生物学活性分析
- 采用RT-PCR方法从小鼠巨噬细胞中扩增Toll样受体2(mTLR2)基因,得到基因全长CDS,经克隆测序正确后构建真核表达质粒pcDNA3.1-mTLR2.重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别用RT-PCR与免疫荧...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云俞昭旸王泽
- 旋毛虫抗原的单抗制备及检测方法的建立
- 究采用体外培养旋毛虫肌幼虫方法制备ES抗原,用于免疫小鼠制各单克隆抗体,经过三轮筛选筛,得到2株稳定分泌抗旋毛虫肌幼虫ES抗原抗体的杂交瘤细胞株,2株细胞分泌抗体亚型均属于IgG类.选取其中A11细胞株制备腹水并纯化,纯...
- 韩彩霞路义鑫李巍李晓云俞昭旸刘畅唐颖宋铭忻
- 关键词：兽医学旋毛虫单克隆抗体
- 旋毛虫抗原对Toll样受体作用及双抗体夹心ELISA检测方法建立
- 旋毛虫排泄分泌抗原（excretory-secretory antigen，ES抗原），是一类由旋毛虫虫体分泌排泄而产生，可以进入宿主机体，直接暴露于宿主免疫系统，诱导宿主产生免疫反应的抗原物质。可用于疾病诊断、疫苗以及...
- 俞昭旸
- 关键词：旋毛虫单克隆抗体核转录因子-ΚB双夹心ELISA
- 文献传递
- 一种检测食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的方法
- 一种检测食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的方法，涉及一种检测旋毛虫和猪囊尾蚴的方法。是要解决目前诊断食源性寄生虫的方法只能检测一种虫体的问题。方法：一、设计旋毛虫和猪囊尾蚴特异性引物，并采用生物素标记；二、样品处理；三、双重PCR...
- 宋铭忻张子群李巍付丽君韩彩霞李晓云唐颖俞昭旸
- 文献传递
- 感染旋毛虫小鼠腹腔巨噬细胞TLR4及细胞因子的变化被引量：4
- 2014年
- 为研究旋毛虫感染对小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)及细胞因子的影响,本研究分别取感染前、后不同时期小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量PCR和流式细胞术检测巨噬细胞TLR4的表达量,western blot检测TLR信号传导相关蛋白MyD88和NF-κB相对表达量,并对巨噬细胞培养上清液细胞因子浓度进行测定。结果显示,巨噬细胞TLR4在基因和蛋白水平上表达量变化趋势基本一致,呈双峰状,峰值分别在感染后4 d和21 d:旋毛虫感染初期4 d左右TLR4表达升高,之后降低,14 d左右至最低点,感染后期21 d左右TLR4表达重新升高,然后降低并趋于稳定。MyD88/NF-κB的相对表达量及炎性因子含量变化趋势与巨噬细胞TLR4表达量变化趋势相似。由此表明,小鼠腹腔巨噬细胞TLR4的表达与旋毛虫生活史的不同阶段及抗原密切相关,在旋毛虫不同时期抗原刺激下,经由TLR4/MyD88/NF-κB传导途径活化细胞,继而引起炎性因子分泌发生变化。
- 李晓云徐佳李巍禹洋刘畅俞昭旸宋铭忻
- 关键词：旋毛虫巨噬细胞细胞因子
- 感染旋毛虫小鼠不同时期TLR2/TLR4 mRNA表达量及血清炎性因子的变化
- 2014年
- 目的探讨旋毛虫感染对小鼠不同组织细胞TLR2/TLR4(Toll样受体)表达量及血清炎性因子的影响。方法分别取感染前、后不同时期小鼠心肌、肺及腹腔巨噬细胞,应用半定量PCR方法检测TLR2/TLR4mRNA相对表达量,同时应用ELISA方法对血清相关炎性因子进行检测。结果随着旋毛虫感染时间的变化,TLR4和TLR2在心肌、肺和腹腔巨噬细胞上的表达略有不同,但大致呈双峰状。旋毛虫感染初期4d左右,TLR2/TLR4mRNA表达均有不同程度升高,之后降低,14d左右,心肌与肺TLR升高,巨噬细胞TLR则继续下降,在21d左右,心肌TLR表达量达到最高值,且与对照组差异显著(P<0.05),肺组织TLR呈下降趋势,巨噬细胞TLR表达升高,之后下降并趋于稳定。感染鼠的血清中炎性因子IL-2和NO的表达量显著升高(P<0.05),而TNF-α、IL-10和IL-12的表达量则显著降低(P<0.05),IL-6的表达量变化不明显。结论旋毛虫感染可引起小鼠心肌、肺和巨噬细胞上的Toll样受体TLR2/TLR4表达发生变化,继而调节相关细胞因子分泌也发生变化,这种变化与旋毛虫生活史不同阶段抗原及其引起的宿主免疫反应和组织器官损伤具有一定相关性。
- 徐佳李晓云韩彩霞禹洋刘畅俞昭旸宋铭忻
- 关键词：旋毛虫炎性因子
- 旋毛虫HSP70基因的原核表达及其免疫原性被引量：4
- 2012年
- 利用RT-PCR方法扩增旋毛虫HSP70基因,将其扩增产物克隆到pEASY-Blunt Simple载体中,经限制性酶切后与pET-28a(+)载体连接,进一步转化至感受态细胞Transetta(DE3)中,用IPTG诱导表达重组旋毛虫HSP70。以纯化的重组HSP70制备多克隆抗体,并对HSP70进行免疫印迹分析及免疫组织化学染色。结果表明,重组质粒的鉴定和DNA测序均正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,在70ku处获得一目的条带;免疫组织化学染色结果显示,该HSP70具有很好的免疫原性。证实,成功构建了重组表达质粒pET28a-HSP70,为深入研究旋毛虫HSP70的功能奠定了基础。
- 徐佳禹洋唐颖俞昭旸李晓云宋铭忻
- 关键词：旋毛虫热休克蛋白70原核表达
- 一种检测食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的方法
- 一种检测食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的方法，涉及一种检测旋毛虫和猪囊尾蚴的方法。是要解决目前诊断食源性寄生虫的方法只能检测一种虫体的问题。方法：一、设计旋毛虫和猪囊尾蚴特异性引物，并采用生物素标记，二、样品处理；三、双重PCR...
- 宋铭忻张子群李巍付丽君韩彩霞李晓云唐颖俞昭旸
