冯立文
- 作品数：19 被引量：145H指数：6
- 供职机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划吉林省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学更多>>
- 鸡痘病毒基因探针检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2007年
- 利用PCR方法成功克隆了鸡痘病毒(Fowl poxvirus,FPV)4b核心蛋白基因549bp片段,序列分析表明,该序列与模板DNA(AF198100)碱基序列的同源性为99.45%,只有3个碱基差异,第215位由C→T,第386位由T→A,第388位由G→A。回收FPV 4b核心蛋白基因549bp片段,以其为模板制备了地高辛标记的DNA探针。对新标记的探针进行标记效率检测,结果显示其标记效率为100mg/L;敏感性检测表明,该探针对同源DNA的检出限量为10pg;特异性检测结果表明,用本试验所标记的探针对提取的FPV 282E4和FPV JL株DNA、重组质粒pMD18-T-4b进行检测结果均呈阳性,而鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、CEF的核酸提取物均成阴性,说明该探针具有较强的特异性。初步应用表明,本试验所建立的FPV的基因探针检测法可用于FPV的检测。
- 郭建顺金宁一张国才张学东冯立文沈晓峰
- 关键词：鸡痘病毒基因探针
- 光滑爪蟾皮肤抗菌肽的分离纯化及活性检测被引量：8
- 2011年
- 通过高效液相色谱法,对光滑爪蟾皮肤分泌物进行分离纯化,得到具有抗菌活性的光滑爪蟾皮肤抗菌肽。通过最小抑菌浓度(MIC)试验、溶血活性试验及癌细胞抑制试验,对其体外生物活性进行研究。结果表明,经过纯化得到2个纯度高且具有活性的抗菌肽(AMP1和AMP2),质谱鉴定结果得出其相对分子质量分别为1 082.78和2237.34。MIC结果表明,AMP1对S.aureus ATCC25923、Escherichia coli ATCC25922的MIC值分别为23.63、8.71mg/L,对MRSA无抑菌作用。AMP2对S.aureus ATCC25923,Escherichia coli ATCC25922、MRSA的MIC值分别为4.94、10.7、86.6mg/L。溶血试验显示AMP1,AMP2具有极弱溶血活性,且对癌细胞SW480具有抑制作用。
- 潘朋朋冯立文李吉平侯峰汤鑫李莎王东旭徐静刘琳娜高宏伟
- 关键词：抗菌肽生物活性
- SPRN转基因小鼠感染Scraipe鼠适应性病毒后动物行为与脑组织形态比较被引量：5
- 2011年
- 通过建立Scraipe鼠适应性病毒感染Tg（sprn—B）／C57BL／6转基因小鼠与C57BL／6野生型小鼠，观察鼠行为学及脑组织形态学的病理变化，探讨Shadoo蛋白在感染过程中对小鼠学习记忆能力及中枢神经系统的影响。结果显示在Morris水迷宫定位航行中，4～7d转基因感染组与野生型感染组的逃避潜伏期差异极显著（P〈0．01）；空间探索试验中，转基因感染组与野生型感染组的第1次穿越平台时间及穿越平台次数羞异极显著（P〈0．01）。HE染色观察鼠脑切片发现，转基因感染组与野生型感染组相比，海马、皮质、小脑空泡数量略少，海马区锥体层细胞排列比较紧密，细胞轮廓比较完整，小脑蒲肯野氏细胞清晰明显。
- 王东旭林超万家余潘朋朋李莎冯立文高宏伟
- 关键词：MORRIS水迷宫组织形态学
- 家兔肌肉组织表达外源性生长激素释放因子对增重的影响被引量：14
- 2003年
- 用 Wicks法提取 pc DNA- GRF(1～ 32 )质粒并用 DNA Cacu L ator定量 ,同时制备原生质体。将 5 4只家兔随机分为 9组 ,分别注射质粒 pc DNA- GRF(1～ 32 ) 0 .4(用布比卡因处理 )、0 .4(含 10 %甘油 )、0 .4(含 2 5 %蔗糖 )、0 .2、0 .4、0 .6、0 .8mg及空质粒 0 .1mg和原生质体 1m L( ～ 组 )。分别于注射后 0、3、8、14、19、2 4、31d称重 ;于注射后 0、3、8、19、31d采血并分离血清 ,测定血清中 GH浓度 ,用 t检验进行统计学分析。结果表明 ,布比卡因处理组注射后 3d内GH浓度升高 6 5 %(P<0 .0 1) ,平均日增重 2 9g(P<0 .0 5 ) ;注射 0 .8mg组 31d平均日增重较对照组多 34 .6 2 %;注射原生质体组 31d平均日增重较对照组多 40 .5 7%(P<0 .0 5 )。 31d后将家兔屠宰 ,取注射部位肌肉提取 DNA和总RNA,用 PCR和 RT- PCR方法分别检测到了 GRF在肌肉中的存在和表达 ;用 EL ISA方法没能检测到血清中的 GRF抗体。
- 张永亮连继勤刘松财冯立文
- 关键词：家兔肌肉组织增重
- 科技期刊论文基金项目表达形式的规范化被引量：17
- 2006年
- 为了探讨我国科技期刊基金项目表达形式的规范化和标准化问题,随机选取100种中国科学引文数据库(CSCD)的刊源期刊,对其论文基金项目的表达形式进行调查,结果是其表达形式比较混乱。通过分析提出了有关建议。
- 郭建顺张学东沈晓峰冯立文李文红陈傲第
- 关键词：科技期刊
- 利用E.coli-App穿梭载体构建温控双基因裂解载体pMC-WK被引量：3
- 2011年
- 采用PCR方法从噬菌体PhiX174基因组中扩增出裂解蛋白E基因,从金黄色葡萄球菌基因组中扩增出核酸酶A基因(SN),通过15个柔性氨基酸linker将双基因串联,插入PBV220表达载体,构建温控双基因裂解系统(DLS)。PCR扩增DLS,将其与E.coli-App穿梭载体pMC-Express相连,构建重组穿梭载体pMC-WK。裂解试验表明,E-15aalinker-SN裂解较E裂解迅速而彻底,菌体裂解率达到99.999 4%;经PCR扩增出的DLS具有裂解活性。本试验成功构建了温控双基因裂解载体pMC-WK,为App菌影疫苗的研究奠定了基础。
- 孙颖金天明冯立文袁洁
- 关键词：穿梭载体
- 创立中国畜牧兽医品牌科技期刊的思考与尝试被引量：4
- 2004年
- 张学东冯立文沈晓峰李伟民郭建顺王哲高宏伟
- 关键词：畜牧兽医科技期刊
- 甜味蛋白(brazzein)基因的人工合成及其在大肠杆菌中的重组表达被引量：5
- 2006年
- 根据从西非植物Pentadiplandra brazzeanaBaillion果实中分离的甜味蛋白brazzein的成熟区氨基酸序列,采用大肠杆菌(Escherichia coli)偏爱的密码子,人工合成了5对寡聚核苷酸序列,经体外连接和PCR扩增后得到了187 bp的brazzein的编码序列,将该序列插入pET-28a载体构建成重组表达载体pET-Br。将pET-Br转化至大肠杆菌BL-21细胞,诱导表达后得到了与预计相对分子质量相同的蛋白。该蛋白约占细菌可溶性蛋白的18.9%,分离纯化后通过蛋白复性,得到有微甜味的产物。
- 刘松财张永亮任晓慧张明军柳巨雄冯立文
- 关键词：甜味蛋白BRAZZEIN
- 生长激素释放因子(GRF)在动物肌肉组织的表达被引量：35
- 2000年
- 向大鼠后肢小腿前部注射生长激素释放因子 ( GRF)的表达质粒 pc DNA3 -GRF4 0 μg,于注射后 2 d开始 ,每隔 5d杀 2只取样 ,提取 RNA和 DNA,用 PCR和 RT-PCR检测质粒及其表达。结果表明 ,在 3 0 d时仍为阳性结果。注射部位肌肉组织免疫组化检测结果表明 ,在部分大鼠 ( 1 4/ 2 4 )的肌肉组织中检测到了 GRF分子。给家兔注射 pc DNA3 -GRF质粒 1 0 0μg(第 组注射质粒 ,第 组注射含 1 0 %甘油的质粒 ) ,于注射后 1 d开始采血分离血清 ,用 RIA法测定血清生长激素 ( GH)的水平。结果表明 ,第 组在 5d时 ,GH水平上升2 7.1 %( P <0 .0 5)。本研究结果表明 ,外源 GRF在肌肉组织可获得表达 ,并能提高动物体内的
- 张永亮欧阳红生刘松财连继勤冯立文赵建军张玉静
- 关键词：GH外源基因表达GRF肌肉组织
- 生长激素释放因子在CHO细胞的表达被引量：6
- 2002年
- 在对生长激素释放因子 (GRF)基因改造和化学合成 ,并构建了其真核表达载体 pc DNA3- GRF(1- 32 )的基础上 ,用 L ipofectin将上述载体转染 CHO细胞进行瞬时表达。提取转染细胞总 RNA,用 RT- PCR和 Dot blotting检测 GRF基因的表达情况 ,用 Western blotting检测转染细胞上清液的表达产物 ,均得到了阳性结果。制备大鼠垂体单层细胞 ,测定表达产物的生物学活性 ,结果表达产物可刺激生长激素释放 ,并且比对照组提高 3.8倍。试验结果表明 ,已构建的真核表达载体 pc DNA3- GRF(1- 32 )能表达出有生物学活性的 GRF。
- 张永亮刘松财欧阳红生冯立文赵建军张玉静
- 关键词：GRFCHO细胞真核表达
