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弗氏枸橼酸杆菌CF74的FliS蛋白功能研究被引量：1: 2015年; 目的研究弗氏枸橼酸杆菌CF74的FliS蛋白功能。方法构建弗氏枸橼酸杆菌CF74 fliS的精确缺失突变株(CF74ΔfliS)及其互补菌株(CF74pfliS),并进行细菌游动性实验,检测它们对THP1细胞的粘附性和细胞毒性的作用。并用Western blotting方法检测FliC蛋白在培养上清中的分泌。结果弗氏枸橼酸杆菌CF74ΔfliS突变株没有游动性,而回补株CF74pfliS回补了游动性。而且,CF74ΔfliS突变株降低对THP1细胞的粘附和细胞毒作用,其回补株恢复了粘附性和细胞毒性。此外,CF74ΔfliS突变株降低FliC蛋白在培养上清中的分泌。结论 FliS蛋白影响弗氏枸橼酸杆菌CF74的游动性,并参与其对宿主细胞的粘附和细胞毒作用。; 刘丽云郝帅孙晖; 关键词：细胞毒性

潜在致病性的弗氏枸橼酸杆菌的筛查被引量：1: 2015年; 目的筛查具有潜在致病性的弗氏枸橼酸杆菌。方法对从河南省睢县分离到的36株弗氏枸橼酸杆菌进行黏附HEp-2细胞的检测,以及与HEp-2细胞(MOI:100)作用10 h后的乳酸脱氢酶(LDH)释放情况分析。同时比较弗氏枸橼酸杆菌CF74(Citrobacter freundii 74)、CF72(Citrobacter freundii 72)、肠聚集性大肠埃希菌(Enteroaggregative E.coli,EAEC)、肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic E.coli,EPEC)2348/69和HB101的黏附和细胞毒性差异。结果 16株弗氏枸橼酸杆菌几乎没有黏附性,黏附指数<1;18株弗氏枸橼酸杆菌具有中等强度的黏附性,黏附指数<100;2株弗氏枸橼酸杆菌CF74和CF65(Citrobacter freundii 65)具有强的黏附性。与HEp-2细胞作用10 h后,除了CF74(24.4%),其余的35株弗氏枸橼酸杆菌具有低的LDH释放量,LDH释放量与阴性对照HB101(5.02%)相似。说明除了CF74,其余的弗氏枸橼酸杆菌不具有细胞毒性。CF74具有和EAEC042一样的聚集性黏附类型,并且CF74引起的LDH释放率明显高于CF72、2348/69和HB101(P<0.01)而低于EAEC17-2。结论作为潜在的致病菌,CF74具有强的黏附性和细胞毒性。; 刘丽云夏胜利孙晖; 关键词：细胞毒性细胞黏附乳酸脱氢酶

我国分离的大肠埃希菌O157∶H7的毒力基因检测分析被引量：15: 2010年; 目的了解我国部分省区分离的大肠埃希菌O157∶H7菌株特异基因和毒力基因携带特点及在不同动物宿主来源的菌株分布情况。方法采用PCR对分离菌株的O157、H7抗原特异基因rfbEO157、fliCH7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因进行检测。结果在1992-2006年收集的O157及H7抗原阳性的345株大肠埃希菌株中,rfbEO157、fliCH7特异基因均为阳性,eaeA和hlyA的阳性率分别为99.4%和99.1%,stx2的阳性率为91.9%,stx1阳性率仅为13.3%,stx1+stx2的阳性率为13.0%,来源于病人和动物菌株的stx2阳性率均高于stx1。检测菌株中毒力基因型以eaeA+hlyA+stx2为主。携带毒力基因的O157∶H7菌株在羊、牛等动物宿主中广泛存在。结论 stx2是病人及羊、牛等动物来源的产志贺毒素大肠埃希菌O157∶H7携带的主要毒素基因型。; 王涛刘丽云王娉熊衍文白雪梅叶长芸徐建国; 关键词：毒力基因

弗氏枸橼酸杆菌CF74的T6SS影响FliC的表达和分泌被引量：1: 2016年; 目的研究弗氏枸橼酸杆菌CF74的T6SS基因组岛功能。方法构建弗氏枸橼酸杆菌CF74的T6SS基因组岛的精确缺失突变株(CF74ΔT6SS)。对弗氏枸橼酸杆菌CF74和其突变株CF74ΔT6SS的全菌蛋白和上清蛋白进行提取,并进行2-DE分析。结果在CF74ΔT6SS全菌蛋白中,有4个蛋白表达上调,42个蛋白表达下调,并且Fli C的表达下调十分明显;在CF74ΔT6SS的培养上清中,有27个蛋白表达上调,36个蛋白表达下调,并且Fli C、Flg K和Fli D的表达下调十分明显。结论弗氏枸橼酸杆菌CF74的T6SS可以影响Fli C蛋白的表达和分泌。; 王艺婷郝帅肖迪叶长芸熊衍文刘丽云; 关键词：2-DE

espP基因在O157∶H7大肠埃希菌分离株中的分布: 2010年; 目的了解espP基因在中国部分地区产志贺毒素O157大肠埃希菌分离株中的分布情况及特点。方法根据O157∶H7的溶血素基因hlyA和细胞外分泌蛋白基因espP设计特异性引物,对113株O157大肠埃希菌分离株进行PCR检测。结果 hlyA的阳性率为99.1%,espP的阳性率为72.5%,且只在有大质粒pO157的菌株中检测到espP。结论 espP存在于携带pO157大质粒的O157∶H7大肠埃希菌中,其分布与菌株来源、志贺毒素携带情况等没有相关性。; 刘丽云熊衍文白雪梅叶长芸; 关键词：肠出血性大肠埃希菌

安徽省马鞍山市分离的枸橼酸杆菌的分子分型: 2016年; 目的了解中国安徽省马鞍山市分离到的枸橼酸杆菌的分子流行病学特征。方法 2007 2011年从安徽省马鞍山市的腹泻患者粪便、食品和食品加工者肛拭分离到62株枸橼酸杆菌,包括13株弗氏枸橼酸杆菌、41株杨氏枸橼酸杆菌和8株布氏枸橼酸杆菌。所有菌株用XbaⅠ酶切进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和扩增7个管家基因的多位点序列分型(MLST)分析。结果 PFGE将62株枸橼酸杆菌分成43个带型(PTs),MLST将其分成53个ST型别(STs)。CITX01.CN0039是PFGE的优势带型,由2007-2008年间从食品和腹泻患者粪便分离的7株杨氏枸橼酸杆菌组成。53个ST型别分成5个ST序列群,ST序列群39个优势菌株来自腹泻患者粪便、食品和食品加工者肛拭分离的枸橼酸杆菌。从腹泻患者粪便、食品和食品加工者肛拭分离得到的枸橼酸杆菌具有相同的PTs和STs。结论在食品和人群中监测枸橼酸杆菌对预防和控制枸橼酸杆菌引起的腹泻是必要的。; 刘丽云汪永禄金东LAN Rui Ting原方芳叶长芸徐建国; 关键词：枸橼酸杆菌脉冲场凝胶电泳多位点序列分型

弗氏枸橼酸杆菌TaqMan实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法的建立被引量：1: 2013年; 目的建立针对弗氏枸橼酸杆菌的TaqMan实时荧光定量-聚合酶链反应(real time-PCR)检测方法。方法针对弗氏枸橼酸杆菌的特有序列设计引物和TaqMan探针,扩增目的基因建立标准曲线,确定检测方法的灵敏度;对20种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌进行检测,评价该检测方法的特异性;使用牛奶模拟标本评价方法在实际检测工作中应用性。结果 TaqMan real time-PCR检测方法对弗氏枸橼酸杆菌重组质粒的检测灵敏度为1.0×101拷贝/反应体系;该检测方法在检测30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现特异性扩增。该检测方法对牛奶模拟样本中弗氏枸橼酸杆菌检测下限为1.0×102cfu/ml的菌量;通过对1.0×107、1.0×105和1.0×103三个浓度质粒标准品的重复检测,确定本方法的组内变异系数为1.90%～3.91%;组间变异系数为1.52%～1.69%。结论本研究建立的TaqMan real time-PCR检测方法可作为检测弗氏枸橼酸杆菌灵敏、特异、快速的方法。; 金东王艺婷白雪梅叶长芸刘丽云

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刘丽云