刘优萍
- 作品数：32 被引量：345H指数：6
- 供职机构：上海市内分泌代谢病临床医学中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市教育委员会重点学科基金更多>>
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- My027融合蛋白表达载体构建及其在大肠杆菌的表达
- 2008年
- 目的探索My027蛋白的体外表达,通过原核表达获得大量可溶性My027融合蛋白。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法获得融合蛋白,采用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)、Western印迹法及质谱进行鉴定。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠杆菌BL-21胞质中,纯化后的目的蛋白经SDS-PAGE、Western印迹法及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白My027在pGEX-4T-2原核表达载体可获高效表达,为进一步研究其功能奠定基础。
- 李晓华郑升刘优萍骆天红罗敏
- 关键词：融合蛋白原核表达
- 长期高脂饮食加小剂量链脲佐霉素建立人类普通2型糖尿病大鼠模型的研究被引量：108
- 2003年
- 目的 建立类似人类普通 2型糖尿病大鼠模型。方法 采用长期高脂高能量饮食结合小剂量链脲佐霉素 (STZ)腹腔注射的方法。结果 模型大鼠有高血糖 (18 78± 1 97)mmol L、高甘油三酯血症 (10 95 4± 5 5 4 )mmol L、高胆固醇血症 (2 4 4 2± 0 74 )mmol L、脂肪肝、高胰岛素血症 (0 937± 0 2 6 )mmol L、胰岛素敏感性下降及不低于正常对照组的体重。结论 这是一种类似人普通
- 杨架林李果刘优萍张芳林崔九兰张迪周文中罗敏
- 关键词：高脂饮食糖尿病大鼠模型非胰岛素依赖型
- I-IFG,I-IGT及IFG合并IGT患者胰岛素分泌及抵抗模式的比较
- 自从美国糖尿病学会(ADA)于1997年提出IFG以来,临床和流行病研究对空腹和餐后血糖的发生机制及临床后果的探索和争论从未曾停止.尤其是流行病学研究,各地科学家或进行大规模横断面研究或长时间前瞻研究,但目前对IFG和I...
- 谢晓燕顾燕云刘优萍李纪平张迪周文中刘赟俞璐徐伟斌李鸿韩俊峰李华峰田景琰骆天红李果罗敏
- 关键词：餐后血糖
- 文献传递
- 2型糖尿病性心脏病变早期相关基因的筛选和分析被引量：10
- 2002年
- 目的 筛选 2型糖尿病性心脏病变早期相关基因并探讨其发病机制。方法 (1)SD大鼠高热量饮食 2个月后链脲佐菌素 (STZ ,15mg/kg)一次性尾静脉注射 ,建立 2型糖尿病大鼠模型。(2 )分别于模型建立后 0 5、1 5、6 0个月取大鼠心脏组织进行电镜观察。 (3)模型建立后 15d抽提大鼠心脏组织总RNA进行荧光标记的mRNA差异显示分析 ,用Northernblot证实差异表达基因并对未知序列进行生物信息学分析。结果 (1)建立的 2型糖尿病模型大鼠 ,具有外周胰岛素抵抗和胰岛功能仅轻微受损等特征。 (2 )心肌超微结构观察结果证实糖尿病心脏病变出现于模型建立后 1 5个月的大鼠心脏 ,并随着病程延长而加重。 (3)应用mRNA差异显示分析技术筛选得到的克隆中 ,已知序列有肌型肉碱棕榈酰转移酶 ;未知序列分别命名为DCM1、2、5、6、8、11、12、16 ,已提交Genbank。结论 糖尿病心脏病变早期在超微结构发生改变前已出现能量代谢途径相关酶类基因表达差异 ,对其进一步研究将为早期干预逆转糖尿病心脏病变提供思路。
- 张芳林李果丁伟刘优萍谢超张迪周文中孙卫华杨架林罗敏
- 关键词：相关基因基因筛选发病机制动物模型超微结构
- IA-2基因的克隆及原核表达研究被引量：1
- 2001年
- 目的 应用基因工程技术获取足量且具有免疫活性的IA 2重组蛋白 ,为建立IA 2抗体检测方法奠定基础。方法 通过逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法从小鼠脑组织RNA中扩增编码IA 2胞内结构域的cDNA ,构建表达型重组质粒 ,经DNA序列分析确证后 ,在大肠杆菌中表达 ,用亲和层析纯化融合目的蛋白 ,并以斑点印迹技术 (Dotblot)鉴定其免疫原性。结果 所获特异PCR产物正确重组至PinpointXa 1表达载体中。经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核表达及亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约 5 6 0 0 0的融合目的蛋白 ,表达量约 1mg蛋白 /升菌液 ,且表达产物与谷氨酸脱羧酶抗体阳性的糖尿病患者血清及健康对照血清发生的显色反应差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 原核表达的IA 2融合蛋白具有免疫学活性 ,可用于糖尿病患者血清中相关抗体的检测。
- 宗阳罗敏丁伟金群燕陈源陈刚蔡东升刘优萍谢超
- 关键词：自身抗原基因表达糖尿病DM
- 人脂肪细胞新蛋白My027的发现及功能初步研究
- 目的寻找脂肪细胞表达的新蛋白及其功能的研究有助于拓宽思路,揭示脂肪细胞在疾病中的作用提供更多线索。方法利用双向电泳及质谱技术观察人脂肪细胞蛋白表达谱,对发现的新蛋白先通过RT- PCR,原核表达及质谱分析进行证实。再通过...
- 李晓华郑升刘优萍李华峰骆天红李杲罗敏
- 文献传递
- 受血糖调控的定点突变胰岛素原真核表达载体的构建被引量：2
- 2004年
- 目的 构建受血糖调控的含葡萄糖-6-磷酸酶(G6p)启动子的定点突变胰岛素原基因真核表达载体。方法 应用基因突变技术(重叠延伸拼接法)改变胰岛素原C肽两端的氨基酸序列,使之能被存在于大多数细胞中的furin酶所识别并剪切为成熟的胰岛素,新序列命名为INS/furin;应用基因重组技术将G6p启动子序列替代真核表达载体pIRES中的CMV启动子序列,并将INS/furin亚克隆至pIRES的多克隆位点B。结果 Sgf Ⅰ和Sac Ⅰ、Xba Ⅰ和Not Ⅰ两种组合的双酶切及特定引物测序均证实载体构建成功。结论 带有G6p启动子的含定点突变胰岛素原基因的真核表达载体有望成为糖尿病基因治疗理想的候选载体。
- 张芳林张迪刘优萍周文中杨键刘赟李纪平李果罗敏
- 关键词：血糖真核表达载体糖尿病
- 甲状腺激素调节幼年大鼠海马Goα及Gsα基因表达的研究
- 2000年
- 蔡东升刘优萍陈刚宗阳罗敏
- 关键词：甲状腺激素海马
- 非肥胖2型糖尿病大鼠腹腔脂肪组织基因差异表达的鉴定
- 2003年
- 目的 研究非肥胖2型糖尿大鼠腹腔脂肪组织基因差异表达。方法 基因差异表达筛查使用代表性差异分析(cDNA RDA)技术;最终的差异产物经亚克隆、测序及生物信息学分析;半定量RT-PCR对筛查到的已知基因表达量进行初步的鉴定。结果 在大鼠脂肪组织中,发现7个高表达的表达序列标签(ESTs),6个为新的ESTs,1个为已知基因[脂蛋白脂酶(LPL)基因],其中1个EST与小鼠肌肉ERA-like GTPase(Era)基因部分相似(相似性约15％)。LPL基因在非肥胖2型糖尿病及高脂饮食组大鼠腹腔脂肪组织表达上调。结论 在大鼠腹腔脂肪组织中发现6个新的ESTs和1个已知基因高表达,其中1个EST与小鼠肌肉ERA-like GTPase(Era)基因部分相似。LPL基因表达上调可能与高脂饮食、高血脂、胰岛素抵抗及非肥胖2型糖尿大鼠分子发病机制相关。
- 杨架林李果张芳林刘优萍张迪周文中许光武杨义生罗敏
- 关键词：非肥胖2型糖尿病基因差异表达发病机制
- 糖脂病相关基因克隆、鉴定及功能分析-代谢综合征分子机制系列研究
- 李果张芳林罗敏朱宏达骆天红左祥生陈刚李纪平刘优萍刘赟张迪周文中陈家伦
- 该课题建立了接近人类临床表现、包括糖尿病心血管病变在内的各种糖脂病变的大鼠模型。进行瘦素受体、脂蛋白酶、ApoE、ACE等基因与中国人2型糖尿病及其心血管并发症的多态性系列分析，对相关基因型的检测有助于疾病的早期诊断和治...
- 关键词：
- 关键词：糖脂病基因克隆代谢综合征分子机制
