刘利民
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：河南省红十字血液中心更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 6例河南株HGV NS5基因变异的研究
- 1999年
- 目的：探讨河南省庚型肝炎病毒基因的变异特征。方法：利用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴＮｅｓｔＰＣＲ） 扩增ＨＧＶＮＳ５ 区序列；将ＰＣＲ扩增产物克隆入Ｔ载体，进行测序和分析。结果：河南株ＨＧＶＮＳ５核酸和氨基酸序列与ＧｅｎＢａｎｋ 中ＨＧＶ 对应位置序列的同源性分别为８９．０％ ～９８．４％ 和９５．０％ ～９８．４％ ；河南株存在本地区的独特变异点（２３ 位Ａｌｇ→Ｇｌｙ，１１９ 位Ｐｈｅ→Ｌｅｕ ，１５３ 位Ａｓｐ→Ｇｌｕ） 。结论：ＨＧＶＮＳ５ 区基因相当保守，是ＰＣＲ方法检测ＨＧＶ的适宜扩增区段；推测这三个变异点可能是河南株ＨＧＶ 进化标志。
- 邢培清赵国强张淑琴刘利民苏堤
- 关键词：庚型肝炎病毒基因变异
- TT病毒结构蛋白抗原在大肠杆菌中的表达及应用被引量：2
- 2002年
- 目的 用原核系统表达TT病毒 (TTV)的重组蛋白抗原 ,建立诊断 (TTV)感染的特异性方法。方法 采用PCR方法扩增TTVORF2 基因 ,将之插入到测序质粒载体中进行测序 ,验证序列正确后将之嵌入到原核表达载体pQE30中 ,并转化大肠杆菌M15菌株 ,进行诱导表达。用SDS -PAGE分析表达产物。表达产物经Ni-NTA柱层析纯化后 ,得到纯度为 90 %的ORF蛋白抗原。用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了West ern -Blot分析 ,用间接ELISA方法检测血清抗 - (TTV)IgG抗体。结果 经IPTG诱导后 ,筛选出 2株高表达株。结论 该蛋白具有良好的抗原活性 。
- 邢培清刘利民张淑琴周育森王海涛
- 关键词：TT病毒聚合酶链式反应肝炎大肠杆菌免疫学检验
- TTV蛋白抗原在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 :用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原 ,建立诊断TTV感染的特异性方法。方法 :采用PCR方法扩增TTVORF2 基因 ,将之插入到测序质粒载体中进行测序 ,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30 ,并转化大肠杆菌M15菌株 ,进行诱导表达。用SDS PAGE分析表达产物。表达产物经Ni NTA柱层析纯化后 ,得到纯度为90 %的ORF蛋白抗原。用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western BlotBlotting分析。结果 :经IPTG诱导后 ,筛选出 2株高表达株。结论
- 刘利民邢培清李建斌胡军陈宗德周育森王海涛
- 关键词：TTV原核表达肝炎大肠杆菌
- 献血员庚型肝炎病毒感染情况和部分基因序列分析
- 1999年
- 为探讨河南省献血员中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染情况和病毒基因的变异特征。方法：利 用逆转录－巢式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ）检测 ＨＧＶ ＲＮＡ；克隆人 Ｔ载体并测序。结果：在 ３００名义务献血员 中发现１例庚型肝炎病毒ＲＮＡ阳性；２００例初检合格献血员标本中无１例阳性。河南株ＨＧＶ与ＧｅｎＢａｎｋ中ＨＧＶ 对应位置序列的同源性为９０.９％～９８．８％。结论：河南省义务献血员中有ＨＧＶ携带者；河南株ＨＧＶ与国内（河 北株ＨＧＵ７５３５６）分离株的同源性为９８．８％，其同源性高于国外分离株（９０．９％～９５．２％）；建议对献血员增加 ＨＧＶ 检测。
- 赵国强邢培清苏堤胡志荣刘利民马宏伟王凯
- 关键词：献血员庚型肝炎病毒PCR
- 河南TT病毒全基因序列测定及TTV感染检测方法的研究被引量：2
- 2002年
- 目的 :为了分析河南省TTV的基因结构、特征及基因变异 ,建立适合我国人群的诊断方法。方法 :采用巢式聚合酶链式反应 (PCR)技术从河南省血液中心献血员TTV阳性血清中扩增TTV全基因 ;用PCR方法扩增ORF2片段 ,进行原核表达 ,并转化大肠杆菌 ,进行诱导表达。用SDS PAGE分析表达产物。结果 :在国内较早地克隆测定了一株TTV河南分离株的基因序列 ;建立了检测TTV感染的PCR检测方法 ;在国内较早地表达出TTV重组蛋白抗原 ,抗原具有良好的活性。结论 :用表达的抗原初步建立了检测血清抗 TTVIgG抗体的间接ELISA方法 ,可有效地应用于TTV感染的检测。
- 邢培清刘利民赵作平王凯张淑琴李建斌陈劲
- 关键词：TT病毒聚合酶链式反应肝炎
- 造血干细胞移植前后血小板输注阈值探讨被引量：2
- 2001年
- 邢培清李建斌刘利民宋永平
- 关键词：造血干细胞移植血小板输注阈值
- 中国河南TTV分离株部分基因的克隆及序列测定
- 1999年
- TTV是1997年底由日本学者首先发现的一种单链DNA病毒。随后的研究表明它与转氨酶异常有密切关系,并认为是一种与输血后肝炎有关的病毒。今年2月军事医学科学院的研究者首先证实我国人群中存在这种病毒的广泛感染。河南省历来是肝炎高发的地区之一,以往的研究表明存在大量的非甲非戊型肝炎病人和病原不明的输血后肝炎病例。为了证实我省是否存在TTV的感染以及了解TTV的感染状况。
- 刘利民邢培清方建华周育森
- 关键词：肝炎TTV单链DNA病毒克隆
- 河南省庚型肝炎病毒感染情况和基因变异的研究
- 2000年
- 目的：为了探讨河南省庚型肝炎病毒的感染情况和河南株庚型肝炎病毒基因的变异特征。方法：利用逆转录——巢式——聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒ＲＮＡ。将扩增产物克隆入Ｔ载体，进行测序和分析。结果：非甲－非成型肝炎中庚型肝炎病毒ＲＮＡ阳性率为３．３３％（１／３０），在丙型肝炎患者中阳性率为６％（３／５０），献血员中阳性率为０．５％（１／２００），对河南株庚型肝炎病毒ＲＮＡ阳性扩增、克隆、测序，与ＧｅｎＢａｎｋ中ＨＧＶ对应位置序列的同源性为９０％～９８．８％。结论：河南省存在反型肝炎病毒的感染者，ＨＧＶ与ＨＣＶ有重叠感染的现象，献血员中有ＨＧＶ携带者。河南株庚型肝炎病毒部分基因序列与已报道的序列均不完全一致，与国内分离株的同源性高于国外分离株。
- 邢培清赵国强刘利民张淑琴
- 关键词：庚型肝炎病毒聚合酶链反应
