刘思杨
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 用M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达HIV-1 gp41抗原表位被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达融合蛋白的可行性。方法:以纯化的HIV-1感染者血清多克隆抗体为配体,在噬菌体展示随机十二肽库中进行生物淘洗,经ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序,确定优势表位。将优势表位及两个优势表位的串联体分别与M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域连接,克隆入PQE30载体进行蛋白表达,再以表达蛋白为抗原检测HIV-1感染者血清中的抗体。结果:成功筛选到位于HIV-1 gp41蛋白上的3组优势抗原表位(HGPKDAETTAIW;AAFKDNQLLRIW;AAFKDNQLTRIW),3组优势表位及表位串联体(YGPKDAETTAIW-GGGS-SCSAKFTCTTQI)在PQE30载体中实现可溶性融合表达。重组蛋白具有良好的抗原性,能与不同的HIV-1抗体阳性血清呈特异反应。结论:用M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达HIV-1 gp41抗原表位是可行的。
- 冯福民李敬云鲍作义刘思杨李林庄道民
- 关键词：HIV-1GP41表位
- 我国中部HIV-1B′亚型分离株基因组结构特征及系统发育分析被引量：4
- 2004年
- 为了分析河南省Humanimmunodeficiencyvirus-1(HIV-1)流行株的基因特征和传染来源,我们从一位HIV-1感染的有偿献血员体内分离HIV-1毒株。提取感染细胞的全基因组DNA,扩增病毒全基因组,Walking法测得全长序列。与HIV-1RL42和HIV-1HXB2株比较,分析基因特征。用Anthewin软件比较分析CNHN24株和RL42株env蛋白的二级结构。用Clustal软件对国内HIV-1分离株和国际参考株的全基因组、env基因和V3环基因分别进行了系统发育分析。结果发现,CNHN24株为HIV-1B′亚型,富含嘌呤,含量达到60.26%。与RL42株及HXB2株比较,pol基因和gag基因变异度较小,env基因及非结构基因变异度较大。与RL42株相比,env蛋白二级结构变异不大,但env保守区C4的氨基酸呈高度变异。系统发育分析显示,CNHN24株与RL42株遗传距离最近,HIV-1Lai株和HXB2株次之,与国内的HIV-1B/C及AE/BC重组毒株的遗传距离较远;从V3序列的比较可以发现,CNHN24株与来自云南省的毒株HIV-1CR206及RL42遗传距离最近。认为HIV-1CNHN24株可能由云南传入。
- 冯福民李敬云鲍作义庄道民刘思杨李林
- 关键词：系统发育分析
- 5株不同亚型HIV-1毒株gp120序列特征分析及其蛋白的表达
- 2009年
- 目的分析我国HIV-1主要亚型毒株的gp120区域的序列特征，并表达出gp120糖基化蛋白，为研究gp120的致病机制和设计疫苗奠定基础。方法利用巢式PCR从来自于不同省份的5名HIV-1感染者外周血单个核细胞DNA中扩增全长gp120基因并测序，对序列特征进行分析，并将获得的gp120基因克隆入真核表达载体，体外表达获得gp120糖基化蛋白。结果序列分析显示，此5条gp120序列分属HIV-1 Thai-B、BC重组和AE重组亚型，虽然亚型不同，但这些gp120序列在相同的位置都存在着一些保守的糖基化位点，且都具备相同的Furin蛋白酶第一切割位点，与参考序列比较发现，不同的HIV亚型序列中，除V3序列长度较为保守外，V1、V2、V4、V5各区域都有不同程度的缺失现象，与BC重组和AE重组亚型相比，Thai-B亚型V3的顶端环呈现出多种组合。最终将这5条gp120序列都克隆入真核表达载体并表达出糖基化的gp120蛋白。结论在设计疫苗和检测试剂时应考虑到膜区的高变性，gp120糖蛋白的体外表达有利于进一步开展针对我国主要HIV流行毒株膜蛋白致病机制和疫苗学的研究。
- 王铮李敬云鲍作义李韩平庄道民刘思杨李林
- 关键词：HIV-1GP120
