匡达人
- 作品数：11 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院细胞生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 用丰富培基作为选择压力在酿酒酵母PRO^+转化子中稳定遗传的分泌型表达载体
- 2000年
- 构建了一个含酿酒酵母ＰＲＯ３基因的分泌型表达载体ｐＣＢｙ３１０，在ｐＣＢｙ３１０上插入 βＨＣＧ（人绒毛膜促性腺激素β亚基）－ｃＤＮＡ以形成一个重组质粒ｐＣＢｙ３１４。利用酿酒酵母脯 氨酸合成酶基因缺陷株的独特属性，即它们不能在丰富培基中生长，ｐＣＢｙ３１４在酿酒酵母 Ｐｒｏ３~－缺陷株（ＭＢ２９９－Ａ）的转化子可以在丰富培基中生长，而且保持有丝分裂稳定性。在优 化条件（但尚非最佳条件）下，βＨＣＧ在培液中的产量是６５０μｇ／Ｌ。说明ＹＰＤ可以用为选择培 基，而且酿酒酵母在ＹＰＤ中比在选择培基中生长更旺盛，可以提高表达产物的产量，加之 ＹＰＤ的成分简单又便宜。因此得出结论，ＰＲＯ基因可以广泛地用于构建在酿酒酵母中克隆和 表达外源基因的载体，以便用丰富培基作为选择压力直接筛选。
- 谢恒月唐鹰姜伟东贺恒益刘明匡达人
- 关键词：酿酒酵母基因表达载体
- 人表皮生长因子受体cDNA在酵母(Saccharomyces cerevisiae)中表达
- 1993年
- 人表皮生长因子受体(human epidermal growth factor receptor,简称hEGFR)是一个170kD的穿膜糖蛋白。利用酵母诱导型Gall启动子,hEGFR cDNA被成功地在酵母细胞中表达,其转录产物(mRNA)大小约为3.5kb。免疫荧光显微实验显示该mRNA的翻译产物(hEGFRy)是位于酵母细胞质膜上,并且hEGFRy具有与EGF结合的功能。本文还进一步证明了酵母2μm质粒的2kb的片段的确具有转录终止的功能。
- 胡玉龙匡达人
- 关键词：CDNA表皮生长因子酵母基因表达
- 首次完成第一条完整染色体(酵母三号染色体)315357bp的制图与测序
- 1992年
- 国际遗传学界的这项重大成果是1989年欧洲共同体(EC)生物技术部组织并协调17个国家的35个实验室的147位科学家(包括我的硕士毕业生,徐岗)完成的。 1979年Strathern,Nowlon,Herskowitz7和Hicks通过啤酒酵母(Saccharomyces cerevisia)xJ 24-24a三号染色体左臂端的HML与右臂中央的MAT二者重组而成的63μm(～200kb)环形染色体。
- 匡达人
- 关键词：染色体酵母
- kar交配法转移YACs至新宿主的研究
- 1996年
- 利用改进的kar交配法,将一个含有340kb人基因组DNA的YAC片段的供体酵母菌株YAC23与受体菌株YLB504进行交配,以选择平板对所形成的候选YAC导入菌进行筛选。经PCR分析,候选YAC导入菌在404bp处有一个扩增带,即具有受体菌株的交配型(MAT α)。进一步用脉冲电泳进行核型鉴定,证实YACs己成功地进入受体,实现了YACs从一个宿主到另一个宿主之间的转移。
- 杨智勇匡达人
- 关键词：酵母人工染色体
- 在烟草中酵母脯氨酸基因B的转化(英文)被引量：4
- 1993年
- 重组质粒PYP22带有一从酵母基因文库分离到的4.6 kb DNA片段,此片段含有脯氨酸(Pro)合成途径必须的基因B(ProB)。用BamHⅠ酶解PYP22,回收ProB基因,重组入pGA471的Bg Ⅲ切口,形成含有ProB的双质粒载体PBYU4。pBYU4含有能在植物中表达的新霉素磷酸转移酶基因Ⅱ(NPT—Ⅱ),可做转基因植株的筛选标记。借助于辅助质粒pRK2013,pBYU4经过三亲结合转移到农杆菌LAB4404,在含有四环素12.5μg/ml、链霉素100μg/ml和利福平50μ/ml加的AB培养基上筛选出转接合子。提取筛选得到的农杆菌总DNA,用ECoR 1酶解,1％琼脂糖电泳,Southern转移DNA到硝酸纤维素膜上。用α—^(32)P-dCTP标记的ProB片段,与转移好的硝酸纤维素进行Southern杂交。Southern杂交证明含有ProB基因的农杆菌,在加有乙酸丁香酮(acetosyringone)125μg/ml和章鱼碱(octopine)125μg/ml的MS液体培养基中,诱导过夜。用叶圆片法转化革新1号烟草(Nicotana tabacum var.Gexin No.1),叶片与菌液共培养2～5d。从叶片分化再生出的芽转移到含有卡那霉素(K_m)80μg/ml、6—苄基腺嘌呤(6BA)1μg/ml和头孢氨噻腭钠(Cef)500μg/ml的MS培养基,筛选3周,将绿色的芽转移到含l％NaCl,6BA 1μg/ml和Cef 500μg/ml的MS培养基,进行复筛。测定经过这样筛选的再生芽的NPT—Ⅱ活性。
- 袁朝兴白永延匡达人
- 关键词：烟草酵母
- 在ADH1转录终止子区存在逆向复制叉移动的阻抑点
- 1996年
- 双向电泳定位复制叉技术是定位复制起点及分析复制叉移动过程的有力手段.用该技术分析了从酵母V号染色体克隆的pBY8-ARS在质粒上的复制起始功能 同时,构建了一个质粒模型包含ADH1启动子,终止子及βhCG-cDNA的转录单位,用双向电泳分析该转录单位逆向复制叉移动的情况. 首次证明,除rDNA以外,结构基因的终止区也存在逆向移动的复制叉的阻抑点,这为转录对逆向复制叉的移动具有阻抑作用的普遍性提供了证据.
- 钱志坚王妙珠谢恒月匡达人
- 关键词：酵母复制叉
- 酿酒酵母5号染色体精细物理图谱绘制
- 1997年
- 利用脉冲电泳（ＰｕｌｓｅｄＦｉｅｌｄＧｅｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＰＦＧＥ）分析了酵母菌Ａ３６４ａ的电泳核型，以５号染色体专一探针确定了该染色体在电泳核型中的位置，以内切酶ＢａｍＨＩ对该染色体ＤＮＡ进行部分酶切后，与整合型载体ＹＩｐ５连接获得了一个染色体专一的基因文库，其转化子数目超过了理论要求值。从文库中筛选与已知探针有同源性的片段并用内切酶ＢａｍＨＩ，ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄＩＩ，ＰｓｔＩ和ＳａｌＩ分析这些插入片段，获得了一个覆盖Ａ３６４ａ５号染色体（其长度估计为６２０ｋｂ）９．４％的精细物理图谱。利用边界克隆和菌落杂交将使我们能够对整条染色体进行进一步的“步查”
- 杨智勇朱怡文余允华匡达人
- 关键词：酵母酿酒酵母5号染色体
- 利用Ty片段构建高稳定的整合型酵母菌表达载体
- 1991年
- 本文提出了一种利用酵母转座子Ty因子的新战略.本文中构建的酵母整合型质粒含有TyH25片段,利用这一片段与染色体之间的同源重组,可把质粒上的目的基因带入染色体,并可获得相当稳定的表达.本文还报道了GAL4基因和CUP1基因的稳定表达.脉冲梯度电场电泳(PFGE)揭示,质粒上的同一基因可以整合到不同的染色体上.Southern杂交分析表明,质粒整合的靶位点具有较高的结构相似性;整合后的质粒可以以单拷贝形式,也可以成串排列的多拷贝形式存在.我们还发现,随着整合情况的不同,质粒中同一目的基因在不同转化子中表达的情况也不尽相同.
- 徐岗朱怡文朱心良匡达人
- 关键词：整合型酵母菌
- 酿酒酵母Ⅴ号染色体上二个强ARSs的结构及功能研究
- 1996年
- 对在酿酒酵母S. cerevisiae Ⅴ号染色体上克隆的强ARS: PYA8-ARS及PYA34-ARS进行了定向缺失分析,最后定位了两ARSs的功能区并作了序列分析比较.在实验过程中,发现一段特殊的载体序列与周围载体DNA环境协同作用产生了微弱的ARS活性,提出没有活性的ARS核心序列类似区能形成新的ARS活性区的观点,并作了理论上的分析.
- 钱志坚匡达人
- 关键词：酿酒酵母5号染色体
- 酿酒酵母A364a第Ⅴ号染色体基因库的构建及ARS的克隆被引量：2
- 1996年
- 利用脉冲梯度电泳(PFGE)分离酿酒酵母A364aV号染色体DNA,克隆在酵母的整合型载体YIp5中,得到染色体专一的基因库。从该基因库克隆的16类ARS,接近估计的酵母Ⅴ号染色体复制子数目,基本覆盖Ⅴ号染色体。同源性分析发现酵母Ⅴ号染色体的绝大部分ARS之间不具同源性或存在极低的同源性。
- 钱志坚朱怡文匡达人
- 关键词：酵母菌酿酒酵母基因库
