吕晓丽
- 作品数：24 被引量：94H指数：5
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项河南省杰出人才创新基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 实时荧光定量PCR检测伪狂犬病病毒方法的建立与初步应用被引量：9
- 2009年
- 根据GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列(EF552427),利用Premier express设计并合成1对引物和相应的TaqMan探针,从猪伪狂犬病病毒(PRV)感染的细胞中提取DNA,进行PCR扩增。将鉴定正确的gE基因片段克隆入pGEM-T Easy载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒。以该阳性重组质粒为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线。对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序。经临床应用表明,该荧光定量PCR方法的建立为猪伪狂犬病病毒的早期诊断并定量分析猪伪狂犬病病毒感染程度奠定了基础。
- 赵丽崔保安陈红英魏战勇郑兰兰吕晓丽文英会
- 关键词：伪狂犬病病毒荧光定量PCR
- 猪圆环病毒2型SYBR-Green 1实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2009年
- 【目的】建立一种能够快速、灵敏地检测猪圆环病毒2型(PCV2)的SYBR-Green 1实时荧光定量PCR方法。【方法】根据已报道的PCV2ORF2基因组序列,设计并合成1对引物。通过常规PCR扩增PCV2ORF2基因,将鉴定正确的ORF2基因片段克隆入pTG19-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR-Green 1荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验。【结果】PCV2荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为0.9988,最低检测的拷贝数为1拷贝/25μL,特异性和重复性较好。【结论】建立了检测PCV2的SYBR-Green 1荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析PCV2感染程度奠定了基础。
- 贾艳艳李明凤王东方崔保安陈红英魏战勇吕晓丽郭显坡
- 关键词：SYBR实时定量PCRPCR检测方法
- 复合RT-PCR检测猪乙脑病毒和猪流感病毒方法的建立被引量：10
- 2008年
- 根据GenBank上已发表的猪乙脑病毒(JEV)的E基因序列和猪流感病毒(SIV)的NP基因序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了JEV和SIV的单项RT-PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了JEV和SIV的复合RT-PCR诊断方法,利用一次RT-PCR反应,即可同时扩增JEV的349 bp和SIV 155 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(HCV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)核酸扩增结果为阴性,对JEV和SIV的最低检出量分别为100和10 pg的cDNA.该方法适合对JEV和SIV的联合检测和鉴别诊断.
- 吕晓丽崔保安陈红英魏战勇王东方郭小参
- 关键词：复合RT-PCR猪流感病毒
- 一例鸡鼻气管炎的诊断与治疗
- 2008年
- 贾艳艳崔保安陈红英郭显坡郭小参吕晓丽冯利霞
- 关键词：鼻气管炎鸡群呼吸道疾病产蛋率下降鼻气管鸟杆菌
- 猪乙脑病毒RT-PCR、荧光定量PCR及多重RT-PCR诊断方法的建立
- 猪乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus，JEW)是二十世纪二十年代被发现并能引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一，其特征是孕前期受到感染后，经胎盘使胚胎或胎儿受到侵袭，引起母猪流产、胚胎死亡、...
- 吕晓丽
- 关键词：乙脑病毒
- 文献传递
- 固始鸡α干扰素基因克隆与序列分析被引量：1
- 2007年
- 参照GenBank上登陆的鸡α干扰素基因序列设计一对引物,应用PCR技术直接从固始鸡肝组织基因组DNA中扩增鸡α干扰素基因.将特异性片段克隆入pGEM-T Easy载体中,转化JM109感受态细胞,经质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性菌株送往大连宝生物公司测序.测序结果表明,固始鸡α干扰素基因为582 bp.用DNAStar软件对克隆的固始鸡α干扰素基因与GenBank发表的其它品种鸡α干扰素基因序列进行同源性分析,核苷酸同源性在97.9%以上,氨基酸同源性在96.9%以上.
- 宋凌云崔保安陈红英方忠意赵丽管倩吕晓丽
- 关键词：固始鸡IFN-Α基因克隆
- 河南良杂猪白细胞介素-18成熟蛋白基因的克隆及表达载体的构建被引量：3
- 2007年
- 采集6月龄河南良杂猪的脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18基因成熟蛋白序列.序列测定表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pQE30,构建重组质粒pQE-IL18,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确.
- 郑兰兰崔保安贾云飞陈瑞亮陈红英吕晓丽
- 关键词：克隆成熟蛋白
- 地方品种固始鸭与樱桃谷鸭α-干扰素基因的克隆与遗传进化分析被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank发表的鸭α-干扰素(interferon-alpha,IFN-α)基因序列(AY879230),设计并合成了1对引物,提取固始鸭和樱桃谷鸭基因组DNA,应用PCR技术扩增地方品种固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因,并克隆、测序.测序结果表明获得了固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因,大小均为584 bp,包含1个IFN-α基因完整的开放阅读框,编码191个氨基酸的多肽.推导的氨基酸有2个潜在的N-糖基化位点,有7个与二硫键形成有关的半胱氨酸.克隆的固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因与北京鸭IFN-α基因的氨基酸序列比较,仅固始鸭IFN-α基因发生突变D38N.固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因与其他IFN-α基因的氨基酸序列遗传进化树分析表明樱桃谷鸭与北京鸭有很近的亲缘关系,固始鸭次之.地方品种固始鸭在非常保守的38位发生了氨基酸突变,推测这可能与该品种鸭具有很强的抗病能力有关.
- 管倩崔保安陈红英杨明凡郭小参吕晓丽王东方
- 关键词：Α-干扰素克隆遗传进化分析
- 猪IL-2基因的克隆、序列分析及其杆状病毒表达载体的构建被引量：2
- 2009年
- 参照GenBank发表的猪IL-2 cDNA基因序列设计1对引物,将猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-TEasy载体上并测序。测序结果显示,克隆的猪IL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465 bp,编码154个氨基酸,相对分子质量为17 400,等电点为5.27,此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%,与猫、牛、鸡、犬、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%和61.5%。将此IL-2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual后获得了重组质粒pFBD-IL2,进而转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含猪IL-2基因的重组DNA,将其命名为Bacmid-IL2。本试验为进一步在昆虫细胞中表达猪IL-2基因、开发研制新型免疫佐剂奠定了基础。
- 郭小参崔保安陈红英王彦彬方剑玉吕晓丽王东方
- 关键词：克隆杆状病毒
- 猪圆环病毒PCR检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 本研究建立了检测猪圆环病毒的PCR方法,并对该方法进行了标准化研究。该方法具有快速、敏感、特异性强等特点,从PCV2感染的细胞中可最低扩增到0.1 ng的DNA,且对其它病原微生物如PRV、PPV不能检出。可对病料、血清提取DNA进行检测,所有程序在5 h内得出结果。该方法可用于PCV2感染猪的快速诊断,引种检疫,分子流行病学调查。
- 王东方魏战勇崔保安陈红英郭小参吕晓丽管倩
- 关键词：PCR猪圆环病毒
