吴洪丽
- 作品数：120 被引量：92H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家科技部农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定
- 为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备,以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板,用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白...
- 张龙刘建波黄立平郭龙军危艳武唐青海吴洪丽刘长明
- 关键词：重组CAP蛋白单克隆抗体
- 文献传递
- 高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究被引量：9
- 2012年
- 【目的】为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。【方法】选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。【结果】HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60%;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子(尤以TNF-α)变化也最为明显。【结论】HP-PRRSV和PCV2之间存在协同致病作用,且猪群先感染HP-PRRSV后感染PCV2可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。
- 范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染
- 重组猪圆环病毒2型表达V5表位标签的构建及其拯救毒株的体外生物学特性
- 猪圆环病毒2型(PCV2)是引发PMWS的主要病原.为了研究PCV2作为表达载体的可行性，构建了以PCV2基因组为骨架，在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签，用构建...
- 黄立平陆月华郭龙军危艳武吴洪丽刘长明
- 关键词：猪圆环病毒2型生物学特性
- 抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定
- 张龙刘建波黄立平郭龙军危艳武唐青海吴洪丽刘长明
- 关键词：重组CAP蛋白单克隆抗体
- 猪伪狂犬病病毒流行毒株gC基因的分子特征及其对小鼠的毒力试验被引量：8
- 2017年
- 为了阐明猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株gC基因的分子特征及其对小鼠的毒力,对来自不同年代分离的6株PRV流行毒株进行了gC基因分子变异特征分析,通过接种BALB/c小鼠检验毒株的毒力。对临床病例分离的6株PRV和30个Gen Bank下载的gC基因序列进行分析表明,这6株PRV与2012年以后流行的毒力增强的变异毒株处于同一分支;这些毒株的氨基酸同源性为98.7%~100%,而与经典的PRV-SC毒株的氨基酸同源性仅为93.2%~94.0%。PRV毒株g C蛋白第52~70位氨基酸为高变区,尤其第64~70位出现7个氨基酸(AAASTPA)插入。对gC蛋白糖基化位点分析表明,PRV变异毒株较经典毒株增加了6个O-连接糖基化位点,且gC蛋白B细胞表位出现3处突变,分别为P69R、P80Q和N83G。gC蛋白上硫酸乙酰肝素结合域(HBD)出现2处突变,分别为HBD1第5位氨基酸由经典毒株的P突变为Q,HBD3的第3位氨基酸由Y突变为C。用分离的6株PRV接种BALB/c小鼠试验显示,PRV-HRB和PRV-SH毒株半数致死量(LD50)均为1×10^(3.21)/mL,PRV-DL、PRV-JL及PRV-GZL的LD50为1×10^(3.75)/mL,PRV-JF的LD50为1×10^(4.32)/mL。上述结果阐明了PRV流行毒株g C基因的分子特征及其对小鼠的毒力,为该病毒的致病机制研究提供了科学依据。
- 夏德利黄立平危艳武王一平杜文娟谢永兴吴洪丽冯力刘长明
- 关键词：伪狂犬病病毒流行毒株毒力
- 猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染的检测及TTV遗传变异分析
- 为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,采用PCR法对来自14个省份280份送检病料进行了检测,TTV1与TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1和TTV2混合感染阳性...
- 刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明
- 关键词：TTVPCV遗传变异分析
- 文献传递
- 表达PCV-2 Cap和PPV-1 VP2蛋白的重组PRV的构建及鉴定被引量：1
- 2019年
- 为了构建表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白和猪细小病毒1型(PPV-1)VP2蛋白的重组伪狂犬病病毒(PRV)及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基因(VP2_(opti))和含PRV gG蛋白信号肽序列的VP2_(opti)基因分别构建重组质粒pMD18T-LR(TK)-VP2_(opti)和pMD18T-LR(TK)-VP2_(opti)(SP)。用已构建的重组病毒rPRV-TK^-/gE^-/gG^-/3Cap^+为骨架,以EGFP为标签经同源重组获得重组病毒。采用IPMA法鉴定Cap蛋白和VP2蛋白抗原在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达,采用IFA法鉴定VP2蛋白在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达与定位。用这2株重组病毒免疫小鼠,通过检测血清中PRV、PCV-2和PPV-1抗体水平对构建的重组病毒在小鼠体内的免疫原性进行评价。结果表明:经同源重组获得重组病毒rPRV-TK^-/VP2^+/gE^-/gG^-/2Cap^+和rPRV-TK^-/VP2^+(SP)/gE^-/gG^-/2Cap^+;在重组病毒感染的PK-15细胞中均能检测到阳性Cap蛋白和VP2蛋白抗原;重组病毒rPRV-TK^-/VP2^+/gE^-/gG^-/2Cap^+表达的VP2蛋白定位于细胞浆和细胞核,而重组病毒rPRV-TK^-/VP2^+(SP)/gE^-/gG^-/2Cap^+表达的VP2蛋白定位于细胞浆;用这2株重组病毒免疫小鼠能够检测到PRV中和抗体;用灭活的重组病毒免疫小鼠后可产生低水平的Cap和VP2抗体,而重组病毒活毒免疫的小鼠未检测到相应抗体。说明这2株重组病毒在体外能够表达Cap蛋白和VP2蛋白,PRV gG蛋白信号肽序列的加入促进了VP2蛋白从细胞核的释放。
- 谢永兴夏德利黄立平危艳武吴洪丽朱红振冯力刘长明
- 关键词：CAP蛋白VP2蛋白重组伪狂犬病病毒
- 猪输血传播病毒2型(PTTV2)Cap蛋白在杆状病毒中的表达及活性测定
- PTTV1和PTTV2基因组结构相似,有3个大的开放阅读框(Open reading frames,ORFs)(ORF1、ORF2和ORF3),其中ORF1被认为是编码病毒壳体蛋白(Cap)的基因,ORF2编码可能病毒复...
- 刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明
- 关键词：重组CAP蛋白杆状病毒表达
- 高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究
- 为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRR...
- 范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染
- 文献传递
- 猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验被引量：5
- 2012年
- 为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒。攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1∶200～1∶800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护。以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株。病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护。
- 付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明
- 关键词：交互免疫
