吴玉
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：广州医学院第一临床学院医学检验系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 凋亡素选择性抗肿瘤的分子机制被引量：1
- 2012年
- 凋亡素（apoptin）是一种来源于鸡贫血病毒（chicken anemia virus，CAV）的小分子量蛋白。CAV是一种无囊膜的DNA病毒，其基因组为2300bp的单链环状DNA分子，含有3个完全或部分重叠的开放读码框，分别编码3个蛋白质：VP1、VP2和VP3E。
- 吴玉杜晶春徐霞
- 关键词：凋亡素分子机制抗肿瘤鸡贫血病毒DNA病毒开放读码框
- 携带跨膜信号的凋亡蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 目的构建携带跨膜信号序列的凋亡蛋白(apoptin)的原核表达载体PET-28a(+)-apoptin,诱导表达并纯化重组apoptin蛋白,制备多克隆抗体。方法用多重PCR的方法扩增跨膜信号序列(PTD)及apoptin的编码序列,构建原核表达载体PET-28a(+)-PTD-apoptin,转化大肠杆菌BL21(DE3),低温条件下IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法鉴定蛋白表达,经镍亲和层析方法纯化目的蛋白后,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。结果 DNA测序鉴定表明成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-PTD-apoptin,该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经低温和IPTG诱导后,获得重组apoptin蛋白,制备的多克隆抗体经ELISA方法和免疫印迹法证实能特异性地识别apoptin。结论成功获得了携带跨膜信号序列的重组蛋白apoptin及其多克隆抗体,为进一步研究其特异性诱导肿瘤细胞凋亡功能及相关机制奠定了基础。
- 杜晶春吴玉李雪燕
- 关键词：凋亡蛋白原核表达多克隆抗体
- CD73在人骨髓间充质干细胞免疫调节功能中的作用被引量：2
- 2012年
- 目的探讨CD73在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)免疫调节功能中的作用。方法分离、培养hBMSCs,利用流式细胞分析技术检测hBMSCs上CD73分子的表达情况,同时检测CD73水解腺苷一磷酸(AMP)的能力。利用体外植物凝集素(PHA)刺激淋巴细胞增殖的方法检测CD73是否参与hBMSCs的免疫调节功能。结果 hBMSCs高表达CD73分子,并具有水解AMP的活力,特异性抑制剂APCP能够阻断CD73的水解酶活性并降低hBMSCs的免疫调节活性。体外混合培养实验结果显示CD73参与hBMSCs介导的抑制淋巴细胞增殖作用。结论 hBMSCs表达的CD73分子具有水解酶活性并参与hBMSCs的免疫调节功能。
- 杜晶春吴玉李雪燕
- 关键词：人骨髓间充质干细胞免疫调节
- 活化的淋巴细胞对人骨髓间质干细胞的细胞毒性研究
- 2012年
- 目的利用体外混合培养方法深入研究间质干细胞和免疫细胞的相互作用,为间质干细胞的合理应用提供理论依据。方法分别利用贴壁培养和密度梯度离心的方法获得人骨髓间质干细胞和外周血单核细胞,利用体外混合培养的方法研究间质干细胞和淋巴细胞的相互作用。结果人骨髓来源的间质干细胞能够抑制淋巴细胞的增殖,但是也很容易遭到活化淋巴细胞的毒性攻击。活化淋巴细胞分泌的炎症因子能够驱使淋巴细胞向间质干细胞周围移动从而加强彼此间的相互作用。作为一种反应机制,间质干细胞在炎症因子刺激后能够获得一定程度上的对活化淋巴细胞的细胞毒性抗性。间质干细胞最终能否发挥免疫调节作用将取决于双方力量的平衡。结论体外研究结果提示人骨髓间质干细胞对活化淋巴细胞的细胞毒性敏感,该结果可能反映了间质干细胞输入体内后的情况,为间质干细胞的临床应用提供了新的思考和借鉴。
- 杜晶春李雪燕吴玉徐霞
- 关键词：淋巴细胞免疫调节细胞毒性
- 人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73多克隆抗体的制备及免疫学鉴定
- 2013年
- 目的制备人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73(Golgi protein 73,GP73)的多克隆抗体,为进一步研究GP73的功能奠定基础。方法利用重组原核表达载体PET-32a-GP73在大肠杆菌BL21中诱导表达,利用切胶方法回收纯化蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体。制备的抗体经硫酸铵沉淀纯化后,用ELISA法和Western blot对多克隆抗体进行效价和特异性检测,用免疫组织化学法(IHC)检测纯化抗体在不同肝组织中识别GP73的能力。结果 GP73蛋白表达成功,并成功获得纯化的GP73蛋白及兔抗GP73多克隆抗体;ELISA法测定多克隆抗体效价>16 000;Western blot证明多克隆抗体的特异性良好;IHC显示GP73蛋白在正常肝组织中仅表达于胆管上皮细胞,而在肝癌组织中表达于肝癌细胞和胆管上皮细胞。结论成功获得了纯化的GP73蛋白及高效价的多克隆抗体,肝脏组织的IHC验证了其良好的特异性。
- 吴玉蔡媛媛徐霞林云恩
- 关键词：肝癌多克隆抗体
- 重组Trail蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化条件的优化被引量：2
- 2012年
- 目的:构建肿瘤坏死因子相关凋亡配体胞外功能区的原核表达质粒,优化诱导蛋白表达的相关条件,检测切胶纯化所得蛋白的抗原结合活性,以及亲和层析纯化蛋白的促凋亡功能。方法:扩增Trail胞外功能区第114-281个氨基酸基因序列,插入融合表达载体pET-28α(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28α(+)-Trial114-281。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组子,调整诱导前菌群的密度(A600)值,诱导时IPTG的浓度、温度及诱导时间,确定最佳诱导条件,同时比较超声、渗透冲击和IP裂解三种破碎细菌方法以及切胶回收和Ni-NTA亲和层析方法对纯化目的蛋白的影响。Western blot鉴定切胶纯化蛋白的抗原结合活性,用Ni-NTA亲和层析方法得到的蛋白作用于A549细胞,采用流式细胞术检测检测该细胞的凋亡率。结果:成功扩增了Trail胞外区基因序列,经测序证实其正确插入到表达载体pET-28α(+)中,经IPTG诱导,在37℃时呈包涵体表达,25℃时为可溶性表达,经软件分析确定A600=0.6,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导4 h为包涵体表达的最佳条件;A600=1.0,IPTG 1.0 mmol/L,诱导4 h为可溶性目的蛋白表达的最佳诱导条件。三种破菌方法的比较,超声法获得的蛋白最多。切胶和Ni-NTA亲和柱纯化的方法都得到了目的蛋白,Westernblot分析显示,切胶纯化的蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析得到的可溶性蛋白可以促使A549细胞发生凋亡。结论:成功构建了重组表达载体pET28α-Trial114-281,在A600值、IPTG以及诱导时间都相同的情况下,37℃出现包涵体表达,而25℃则出现了可溶性表达。切胶纯化获得蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析纯化的可溶性蛋白能保持其原有的功能不被破坏,促使肿瘤细胞A549的凋亡。
- 蔡媛媛李雪燕吴玉杜晶春徐霞
- 关键词：目的蛋白纯化
