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周冠宇
作品数:
2
被引量:1
H指数:1
供职机构:
华中科技大学同济医学院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
钱伟
华中科技大学同济医学院
李琪
华中科技大学同济医学院
邓亮
华中科技大学同济医学院
黄金明
华中科技大学同济医学院
徐可树
华中科技大学同济医学院
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环磷酸腺苷反应元件结合蛋白-1对肝星状细胞转化生长因子3的mRNA表达及启动子活性的影响
2012年
目的探讨大鼠肝星状细胞(HSC)中,环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白-1(CREB-1)对转化生长因子β3(TGFβ3)的mRNA表达及启动子活I生的影响。方法将HSC分为CREB-1表达质粒转染组(C质粒组)、s氓NA—cREB-1转染组(s质粒组)、阴性对照质粒组(N质粒组)、Forskolin处理组(FSK组)、H-89处理组(H-89组)及空白对照组,并根据加或不加入外源性TGFD3重组蛋白将以上各组再分为(TGFD3+)组和(TGFD3-)组,实时荧光定量PCR法检测TGFβ3mRNA的表达。上述各组共转染PGL3妇sjc-TGFp3P(W质粒)或PGL3-basic-TGFB3P—mCRE(M质粒),以pRL-SV40为空白对照,荧光素酶报告基因分析法检测各组TGFD3启动子活性。双侧t检验进行组间数据比较。结果TGFD3mRNA表达结果显示,与N质粒(TGFp3-)组比较,s质粒(TGFp3-)组mRNA相对表达量降低至0.69fl:0.15(t=3.702,P〈0.05);与空白对照(TGFD3-)组比较,H-89(TGFD3-)组降低至0.57±0.08(t=9.490,P〈0.05);N质粒(TGFD3+)组与N质粒(TGFD3-)组、s质粒(TGFB3+)组与s质粒(TGFD3-)组、空白对照(TGFB3+)组与空白对照(TGFβ3-)组、H-89(TGFB3+)组与H-89(TGFD3-)组分别比较,差异均有统计学意义(t值分别为-7.404、-3.480、-2.831和-7.875,尸值均〈0.05)。荧光素酶报告基因分析结果显示,s+w质粒组、N+W质粒组、C+W质粒组的TGFB3启动子活性分别为0.062±0.013、0.122±0.011、0.165±0.016,C+W质粒组TGFB3活性较N+w质粒组组明显升高(t=-3.823,P〈0.05),s+w质粒组较N+w质粒组明显降低(t=5.853,P〈0.01)lH-89+W质粒组、空白对照+w质粒组、FSK+W质粒组TGFp3启动子活性分别为0.154士0.010、0.188士0.016、0.276±0.031,FSK+W质粒组的TGFB3启动子活性较空白对照+W质粒组明显升高(t=-4.419,P〈0.05),H-89+W质�
周冠宇
黄金明
邓亮
刘卡花
李琪
钱伟
徐可树
关键词:
CAMP反应元件结合蛋白质
转化生长因子Β3
肝星状细胞
外源性TGF-β3对大鼠肝星状细胞TGF-β3启动子活性和CREB-1的影响
被引量:1
2011年
目的观察转化生长因子β3(TGF—β3)自反馈调节信号通路中正向调节因子的作用。方法用外源性TGF—β3诱导大鼠肝星状细胞系(HSC—T6),在不同时间点用荧光素酶报告基因分析法检测TGF.83的启动子活性,Western印迹法检测cAMP反应元件(CRE)结合蛋白1(CREB-1)和磷酸化CREB-1的表达,实时荧光定量PCR法检测CREB-1mRNA的表达情况。结果外源性TGF—β3处理HSC—T6后,TGF—β3启动子活性表现出时间依赖性增高,并于诱导后24h达峰值[10.68±0.57,2.2倍于对照组(4.83±0.56)]。TGF-β3启动子的基础活性下降了85%(0.73±0.03,P〈0.05)。外源性TGF-β3可在短时问内上调磷酸化CREB-1的表达,与对照组(比值为1)相比,15min即可见明显增加(1.5倍于对照组),1h时其表达量达到最大值(2.0倍于对照组),12h略见下降(1.9倍于对照组,均P〈0.05)。外源性TGF-β3对HSC—T6中CREB-1 mRNA和CREB-1蛋白的表达均无影响(均P〉0.05)。结论外源性TGF—β3可促进TGF—β3启动子活性增强,且CRE位点在外源性TGF—β3介导的TGF—β3启动子活性中发挥重要作用;外源性TGF—β3可活化CREB-1,但不能促进CREB-1蛋白及mRNA的表达。
邓亮
李莹
黄金明
周冠宇
李琪
钱伟
徐可树
关键词:
转化生长因子Β3
CAMP反应元件结合蛋白质
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