周鹤峰
- 作品数：47 被引量：138H指数：6
- 供职机构：遵义医学院珠海校区生物工程系更多>>
- 发文基金：贵州省科技厅社会发展攻关项目贵州省省长基金贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 人蔗糖酶卵黄抗体三种不同提取方法的比较
- 2016年
- 目的应用三种不同方法分离提取特异性抗人蔗糖酶卵黄抗体,比较总蛋白浓度、蛋白纯度及生物活性。方法以人蔗糖酶蛋白作为抗原免疫蛋鸡,分别采用硫酸钠水提取法、聚乙二醇法和冷乙醇法分离提取卵黄抗体,BCA法测定总蛋白质含量;聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测抗体纯度;间接酶联免疫吸附测定法检测抗体效价。结果经典的硫酸钠水提取法相对其他两种方法提取的卵黄抗体在总蛋白含量和纯度都较高,杂带相应较少,聚乙二醇法提取的抗体效价较低,硫酸钠水提取法和冷乙醇法提取的抗体效价基本没有区别。结论三种提取方法中,硫酸钠水提取法操作简单、纯度较高、对蛋白影响较小,为后续有效分离提取卵黄抗体打下实验基础。
- 邵敏王新颖杜凤霞冯昆田忠周鹤峰
- 关键词：蔗糖酶卵黄抗体生物活性
- 天麻DNA导入马铃薯实现遗传转化的研究
- 目的:天麻是一种名贵的传统中药,有着非常广泛的药用价值,近年来随着过度的采伐以及病虫害等原因,其资源已受到严重威胁,因此对珍稀濒危的天麻进行可持续利用的研究已迫在眉睫.该课题的研究旨在探索是否可以利用转基因技术对其进行品...
- 周鹤峰
- 关键词：天麻天麻素转基因
- 文献传递
- 人白介素12亚基p40和p35基因串联在毕赤酵母中的表达及表达产物活性分析
- 2008年
- 利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导,hscIL-12在酵母中获得分泌表达,表达产物经Western blot检测,显示该蛋白相对分子质量为70kDa,可与鼠抗人IL-12单克隆抗体特异性结合;定量分析结果表明,重组酵母培养上清中hscIL-12约占总蛋白的26%,表达量约为60mg/L;生物学活性实验表明,重组蛋白能促进人外周血淋巴细胞增殖。为利用rhscIL-12进行基因治疗奠定了基础。
- 周鹤峰邵敏孙伟刘银花李官成葛正龙
- 关键词：人白细胞介素12毕赤酵母活性分析
- 甘肃省不同区域当归种子的RAPD分析被引量：5
- 2010年
- [目的]探讨RAPD技术应用于甘肃省当归[Angelicae sinensis(Oliv.)Diels)品种鉴别的可行性。[方法]采用改良CTAB法提取甘肃省不同地区的当归种子基因组DNA,利用筛选的引物S61分别对其进行RAPD分析。[结果]获得了质量较高的当归种子基因组DNA,引物S61扩增的图谱显示出良好的多态性,且比较稳定,重复性好。[结论]该法可为从分子生物学角度鉴别当归提供科学依据。
- 周鹤峰邵敏姬可平李啸红李应东晋玲
- 关键词：DNA提取改良CTAB法RAPD
- 检测阪崎肠杆菌间接ELISA方法的建立被引量：5
- 2013年
- 建立阪崎肠杆菌(Enterobacter Sakazakii,ES)特异性抗体间接ELISA检测方法,以期作为融合后杂交瘤细胞株的筛选体系。应用灭活的阪崎肠杆菌菌体为抗原,筛选最佳反应条件,建立检测该病原菌的酶联免疫吸附检测方法。通过对ELISA反应条件优化,确定菌体抗原包被的最适工作浓度为2×105mL-1,4℃包被过夜;5%脱脂奶粉进行封闭;血清最佳稀释比为1∶2 000;酶标抗体最适稀释度为1∶1 000倍;最后确定37℃显色10 min,检测灵敏度达到103mL-1。该方法的建立为阪崎肠杆菌单克隆抗体制备过程中阳性杂交瘤细胞株的筛选提供有效手段和奠定实验基础。
- 周鹤峰邵敏李长福葛正龙
- 关键词：阪崎肠杆菌间接ELISA
- 含笑属RAPD反应条件优化及遗传多态性分析
- 2009年
- [目的]确立含笑属植物RAPD反应的最优条件,确定7种含笑属植物的亲缘关系。[方法]采用改进的CTAB法提取木兰科含笑属7种植物叶总DNA,进行RAPD分析,分别研究了模板DNA、引物、dNTP、Mg2+和TaqDNA聚合酶用量对RAPD反应的影响。[结果]RAPD最优反应体系为:反应体积20μl,内含125 ng模板DNA,0.3μmol/L引物,0.5 UTaq聚合酶,1.5 mmol/LMgCl2,0.1 mmol/L dNTP,2μl10×buffer。应用Nei距离法计算各种间的相似系数,采用UPGMA法进行聚类分析,7种含笑种可分为3大类。[结论]筛选的最佳RAPD反应条件可为含笑属植物的分类和遗传多样性分析提供理论依据。
- 唐历波周鹤峰陈东
- 关键词：含笑属RAPD聚类分析
- 根癌农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化条件的研究被引量：16
- 2008年
- 以马铃薯茎段作为受体转化材料,通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,对影响马铃薯遗传转化的多种因素(抗生素质量浓度、农杆菌质量浓度、共培养时间等)进行研究.结果表明,卡那霉素(kanamycin,Kan)梯度在抗性愈伤组织诱导、芽分化过程中以100 mg.L-1为宜,但在生根过程中以50 mg.L-1为宜,菌液质量浓度以OD600为0.5,共培养时间为3 d,抑菌剂的选择以羧苄霉素(carbenicillin,Cb)更适合.对转基因植株进行PCR检测表明,目的基因已整合到马铃薯基因组中.
- 周鹤峰邵敏葛正龙
- 关键词：马铃薯根癌农杆菌茎段
- 阪崎肠杆菌胶体金试纸条的制备及初步应用被引量：6
- 2013年
- 制备阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)胶体金快速检测试纸并对其性能进行评价。通过柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记抗阪崎肠杆菌特异性的单克隆抗体,采用双抗夹心法,将标记的胶体金复合物喷涂于试纸的结合垫,另一单抗和二抗(羊抗鼠IgG抗体)分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)和控制线(C)上,制备出检测阪崎肠杆菌胶体金试纸条,进行敏感性、特异性、稳定性、重复性试验,借助于简单的增菌过程,在6 h内即可检测出样品中阪崎肠杆菌的含量,灵敏度达到1×104CFU/mL,与常见的食源性致病菌无交叉反应。结果显示该试纸具有简单、灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于ES的检测。
- 周鹤峰邵敏李长福葛正龙
- 关键词：阪崎肠杆菌单克隆抗体胶体金
- 人蔗糖酶蛋白在大肠杆菌的诱导表达与纯化被引量：3
- 2015年
- 目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果克隆得到1482 bp目的基因,酶切和测序证实h SUC基因片段成功插入到p ET-28a(+)表达载体。表达的融合蛋白质相对分子质量(Mr)为61 240,Western blot结果显示融合蛋白可以与h SUC抗体特异性结合。结论成功在大肠杆菌中表达和纯化h SUC融合蛋白。
- 邵敏王新颖张青峰牛宪立王燕周鹤峰葛正龙
- 关键词：蔗糖酶Α-葡萄糖苷酶大肠杆菌蛋白纯化
- 甘肃本地产当归、黄芪和大黄的rDNA ITS序列分析被引量：7
- 2010年
- 本研究采用改良CTAB法分别提取18份甘肃本地产当归、黄芪和大黄基因组DNA,并用PCR分别扩增其ITS1-5.8S-ITS2序列、直接测序并作序列同源性比对分析。双向测序分析结果表明,甘肃6个不同产地当归rDNA的ITS1、5.8S和ITS2序列一致,片段长度分别为215bp、162bp和223bp;供试的黄芪ITS1、5.8S和ITS2序列分别为228bp、164bp和210bp;大黄ITS1、5.8S和ITS2序列分别为160bp、159bp和164bp。供试材料的ITS1-5.8S-ITS2核苷酸序列已提交GenBank。本研究为提供甘肃当归、黄芪和大黄指纹图谱鉴别的分子标记、其道地性药材的分子鉴定和品质评价提供参考。
- 周鹤峰邵敏姬可平李啸红李应东晋玲
- 关键词：当归ITS序列
