- 一种重组抗肿瘤侵袭转移的融合蛋白
- 本发明属生物技术领域，涉及基因重组抗肿瘤侵袭转移新药，具体涉及重组尿激酶片段与纤溶酶原激活物抑制物-2型突变体融合蛋白。本发明应用PCR方法扩增融合蛋白基因cDNA，将其克隆到表达载体获得融合基因表达质粒后转化宿主菌，甲...
- 朱运松王霞李平谭理张宇清孙兴会侯敏
- 文献传递
- ATF-PAI2CD融合蛋白基因在毕赤酵母中克隆、表达和鉴定被引量：4
- 2004年
- 为了克隆尿激酶型纤溶酶原激活物 (uPA)的氨基末端片段与纤溶酶原激活剂抑制物 2型(PAI 2 )突变体所构成的融合蛋白基因 ,并在Pichiapastoris中表达 ,应用PCR获得了人ATF PAI2CD融合蛋白基因cDNA(简称ATF PAI2CD) ,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K ,获得融合基因表达质粒pZWY ATF PAI2CD .该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G4 18 YPD平板筛选高拷贝转化子 ,然后用甲醇诱导表达 .工程菌用摇瓶发酵 ,表达产物ATF PAI2CD占培养液中总蛋白 5 0 %以上 .经硫酸铵沉淀、分子筛和离子交换层析纯化得到的目标表达产物纯度达 95 % .Western印迹检测具有PAI 2与uPA的免疫原性 ,经牛奶板法检测具有纤溶抑制活性 .经流式细胞仪 (FCM )检测 ,能与肿瘤细胞特异性结合 .结果表明 ,ATF PAI2CD融合蛋白成功地在毕赤酵母中表达 ,且具有抑制uPA及与肿瘤细胞表面uPAR特异性结合的双重功能 .提示该融合蛋白可能具有良好的应用前景 .
- 王霞侯敏孙兴会张宇清李平谭理朱运松
- 关键词：融合蛋白基因毕赤酵母克隆尿激酶型纤溶酶原激活物
- HA20-lys10在大肠埃希菌中的融合表达纯化和凝胶阻滞试验
- 2004年
- 目的 表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力。方法 用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lys10,并克隆于pET32a(+)原核表达载体。将重组表达质粒pET-HA-K转化大肠埃希菌BL21(DE3),当A(Abs)_(600nm)达到0.6时,加入终浓度为1mmol/L IPTG诱导目的蛋白的表达。表达产物用亲和层析一步法进行纯化,然后用凝胶阻滞试验观察重组蛋白结合质粒的能力。结果 IPTG诱导后可获得相对分子质量约为27 000的目的蛋白,表达蛋白以可溶形式存在,占菌体蛋白20％以上。表达菌超声后,表达产物经亲和层析一步纯化后可获得纯度达85％以上目的蛋白。凝胶阻滞试验发现,纯化的重组蛋白在一定条件下可以与质粒结合,使质粒的迁移率明显改变。结论 融合蛋白HA20—lys10有望用于受体介导基因转移,以提高基因转移的效率。
- 孙兴会张宇清王霞侯敏谭理李平朱运松
- 关键词：大肠埃希菌融合基因基因表达
- 血清诱导95D细胞中Nm23H1从细胞质转位至细胞膜板状伪足
- 2005年
- 目的 探索Nm2 3H1(肿瘤转移抑制因子之一)在细胞内的定位与其功能关系。方法 以人肺巨细胞癌95D细胞为模型,在血清饥饿2 4h后加入血清,观察细胞形态变化及Nm2 3H1在细胞内的分布变化。结果 血清刺激可以诱导95D细胞形成板状伪足,细胞免疫荧光实验发现Nm2 3H1主要分布于细胞质,但在血清诱导形成的细胞板状伪足部位出现显著的Nm2 3H1分布。亚细胞组分分离及免疫印迹的实验结果也证实Nm2 3H1在血清刺激下可以转位到细胞膜,并且这种诱导作用是迅速的,在30min左右达到高峰,8h后降至仍然略高于血清诱导前的水平。结论 Nm2 3H1这种特殊的定位可能涉及细胞的运动,为进一步研究Nm2 3H1的功能与作用机制提供了基础。
- 谭理李平孙兴会李春阳童畅樊静朱运松
- 关键词：NM23H1血清诱导细胞膜细胞质转位人肺巨细胞癌
- 一种重组抗肿瘤侵袭转移的融合蛋白
- 本发明属生物技术领域，涉及基因重组抗肿瘤侵袭转移新药，具体涉及重组尿激酶片段与纤溶酶原激活物抑制物－2型突变体融合蛋白。本发明应用PCR方法扩增融合蛋白基因cDNA，将其克隆到表达载体获得融合基因表达质粒后转化宿主菌，甲...
- 朱运松王霞李平谭理张宇清孙兴会侯敏
- 文献传递
- Rac的研究进展被引量：9
- 2002年
- 孙兴会朱运松
- 关键词：RAC
- 受体介导基因治疗存在的主要问题和可能的解决办法被引量：2
- 2001年
- 孙兴会朱运松
- 关键词：受体介导基因治疗血凝素
- Lys_(10)-PAI-1融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化和凝胶阻滞实验被引量：5
- 2003年
- 用PCR方法构建 10个赖氨酸与纤溶酶原激活剂抑制物 1的融合基因Lys10 PAI 1,并克隆于pET2 8a(+ )和pET32a(+ )原核表达载体 .将重组表达质粒pET32 PAI和pET2 8 PAI转化大肠杆菌BL2 1(DE3) .IPTG诱导后可获得分子量分别为 6 3kD和 4 3kD的目的蛋白 ,表达蛋白占菌体蛋白2 0 %以上 ,大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物经变性、复性、超滤、透析和亲和层析等步骤 ,可以得到纯化的Trx·PAI 1和rPAI 1重组蛋白 .Western印迹结果表明 ,目的蛋白具有人PAI 1的抗原性 .凝胶阻滞实验发现 ,纯化的重组蛋白在一定条件下 ,可以与质粒结合 ,使质粒的迁移率明显改变 .研究结果表明 ,Trx·PAI 1和rPAI
- 孙兴会李平张宇清谭理王霞侯敏陈怡韵朱运松
- 关键词：纤溶酶原激活剂抑制物-1融合基因纯化
- PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性
- 2003年
- 目的 为了进一步了解纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在细胞内的定位对其抗凋亡活性的影响。方法 构建绿色荧光蛋白质(EGFP)与PAI-2入核突变体融合蛋白质的表达质粒;转染HeLa细胞,荧光显微镜下比较野生型PAI-2与PAI-2的入核突变体在HeLa细胞内分布的差异;用MTT法检测PAI-2入核突变体抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导细胞凋亡的活性。结果 在核定位序列的引导下,几乎所有的PAI-2都进入了细胞核,而野生型PAI-2则弥散分布于HeLa细胞内。MTT法检测发现,当PAI-2被定位于细胞核内时,丧失其抗凋亡的功能。结论 PAI-2在细胞内的定位能影响其抗凋亡的活性,并且当用TNF-α诱导HeLa细胞凋亡时,野生型PAI-2在细胞内的分布没有发生明显的改变。
- 张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松
- 关键词：PAI-2肿瘤坏死因子-Α细胞凋亡
- 尿激酶受体介导的基因转移研究
- 为了观察尿激酶受体反义核酸对肿瘤细胞的作用以及探讨尿激酶受体介导的基因转移的可能性,我们先利用重组腺病毒技术,在人肺巨细胞癌高转移株95D细胞中表达了尿激酶受体的反义基因,并观察其作用;同时表达纯化了尿激酶氨基末端的突变...
- 孙兴会
- 关键词：腺病毒尿激酶受体基因转移肿瘤
