孙毅
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：宁夏大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 滩羊胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究被引量：4
- 2014年
- 【目的】以滩羊胎儿皮肤组织为材料,获得符合体细胞克隆转基因基本要求的供体细胞系。【方法】取滩羊胎儿皮肤组织,采用组织块法分离培养获得滩羊胎儿成纤维细胞,观测其形态和生长情况,鉴定其性别,并对其染色体核型和红色荧光报告基因质粒(pmCherry-N1)转染等生物学特性进行研究。【结果】采用组织块法成功获得了滩羊胎儿成纤维细胞,其细胞群体倍增时间(PDT)约为48h;5代、15代、25代滩羊胎儿成纤维细胞核型分析表明,各代细胞染色体均为2n=54,未见异常;滩羊胎儿成纤维细胞的转染效率较高,约为50%,对最终获得的稳定表达红色荧光蛋白的胎儿成纤维细胞进行核型分析,结果证明遗传物质没有发生变化。【结论】建立了滩羊胎儿成纤维细胞系,为滩羊分子育种奠定了基础。
- 王娟孙毅程龙宋孚阳李敏刘晓明李勇
- 关键词：滩羊成纤维细胞生物学特性体外培养
- 不同方法对滩羊卵母细胞孤雌激活及重构胚发育影响的研究
- 2015年
- 旨在探索宁夏滩羊卵母细胞孤雌激活及胚胎培养条件,并建立转Cherry基因滩羊体细胞重构胚的融合与体外培养体系。试验分析了3种激活方法即电激活、Ionomycin结合6-DMAP与电激活结合6-DMAP对成熟的滩羊卵母细胞激活的影响,以及3种胚胎培养液mSOFaa、M16和KSOM的培养筛选,并优化了滩羊体细胞重构胚的融合与体外培养条件。结果表明:在卵母细胞孤雌激活中,最适电压为1 600V/cm,获得卵裂率和囊胚率分别为58.5%和19.5%;5μmol离子霉素结合2 mmol 6-DMAP能有效地激活成熟的滩羊卵母细胞,卵裂率为81.0%,囊胚率为26.2%;并发现mSOFaa胚胎培养液的卵裂率和囊胚显著优于M16和KSOM培养液;在转基因重构胚融合中发现在电压1 800V/cm、脉冲时间10μs、脉冲次数2次和间隔时间为1s的条件下,卵裂率和囊胚率为40.0%、21.4%。本试验建立的滩羊孤雌激活和转基因重构胚融合与体外培养体系为宁夏滩羊的分子育种奠定了基础。
- 李勇李勇程龙孙毅杨易杨易
- 关键词：滩羊孤雌激活转基因电融合重构胚
- 转Cherry基因宁夏滩羊体细胞核移植的研究
- 滩羊是宁夏特色肉毛兼用绵羊品种，但是，近年来由于宁夏种质资源保护工作相对滞后，滩羊存在产羔率低、纯种滩羊数量不断锐减和等现象。本研究拟利用屠宰场获取滩羊卵巢，对滩羊卵母细胞的体外成熟、孤雌激活、孤雌激活胚胎及重构胚的体外...
- 孙毅
- 关键词：良种培育胚胎移植细胞融合
- 三种生殖激素对滩羊卵母细胞体外成熟的影响被引量：5
- 2013年
- 卵母细胞体外成熟系统的建立是进行核移植和转基因动物研究的基础,本试验旨在研究不同浓度促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)和人绝经期促性腺激素(HMG)对滩羊卵母细胞体外成熟的影响。应用切割法分离获得滩羊卵母细胞,分别在以TCM199为基础成熟培养液的成熟液Ⅰ(OMⅠ,添加100μg/mLFSH和20μg/mL LH),OMⅡ(添加200μg/mL FSH和40μg/mL LH),OMⅢ(添加300μg/mL FSH和60μg/mL LH),OMⅣ(添加0.05IU/mLHMG),OMⅤ(添加0.1IU/mL HMG),OMⅥ(添加0.15IU/mL HMG)和OMⅦ(添加0.2IU/mL HMG)中,体外成熟培养22h,检查核成熟率。结果显示,在成熟培养后,卵母细胞在OMⅡ和OMⅤ中成熟率高,分别为68.8%和69.6%。说明在以TCM199为基础培养液的卵母细胞成熟培养液中添加200μg/mL FSH和40μg/mL LH或添0.1IU/mL HMG所组成的成熟培养体系,在滩羊卵母细胞体外成熟中效果良好,为下一步宁夏滩羊体细胞核移植试验奠定了基础。
- 王娟孙毅程龙杨佳丽石娟刘晓明李勇
- 关键词：卵母细胞体外成熟滩羊
- 小鼠胰腺干细胞的分离、培养与鉴定
- 2012年
- 目的从新生小鼠中分离培养并鉴定胰腺干细胞。方法利用组织块法分离新生小鼠胰腺源性干细胞,经RPMI1640+5%胎牛血清+双抗+1 mmol/L丙酮酸钠+1 mmol/L非必需氨基酸+10 ng/mL表皮生长因子+10 ng/mL成纤维生长因子+2 mmol/L谷氨酰胺的溶液培养,利用免疫组化分析胰腺源性干细胞的兔抗巢蛋白抗体(Nestin)、胰肠同源域因子(PDX-1)和葡葡糖转运子(GLUT-2)抗原表达;经10 mmol/L尼克酰胺诱导产生胰岛样细胞团并利用双硫腙(DTZ)染色分析其胰岛素分泌情况。结果分离培养的胰腺源性干细胞呈Nestin、PDX-1和GLUT-2阳性;诱导的胰岛样细胞团呈DTZ染色阳性。结论分离获得的新生小鼠胰腺源性干细胞在体外可分化为类胰岛,并具有胰岛素分泌功能。
- 李军孙毅马荣李勇
- 关键词：胰腺干细胞小鼠
