张丽芳
- 作品数：225 被引量：416H指数：10
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金温州市科技局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- HPV11 E7蛋白在原核细胞的表达及其作为特异性诊断抗原的初步研究
- 目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)11型E7蛋白基因在原核细胞的表达及其作为特异性诊断抗原在尖锐湿疣(CA)血清学诊断中的应用价值。方法:从CA组织中提取HPV11 DNA,并用聚合酶链反应(PCR)扩增HPV11 E7全...
- 郑丹张丽芳
- 关键词：尖锐湿疣人乳头瘤病毒血清学诊断
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒16 L1/CEA CTL表位融合蛋白的原核表达研究
- 2008年
- 目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)16型衣壳蛋白L1与癌胚抗原(CEA)细胞毒T细胞(CTL)表位嵌合基因,探讨其在原核表达系统中的表达情况。方法:选择CEA CTL表位(CEA691 IMIGVLVGV),以HPV16阳性宫颈癌组织提取的DNA为模板,通过PCR方法扩增出HPV16 L1/CEA CTL表位嵌合基因,克隆入pET32a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化,进一步采用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果:pET32a(+)/HPV16 L1/CEA CTL表位重组质粒构建成功,并在大肠杆菌中得到表达。SDS-PAGE分析表明表达产物分子质量(Mr)约为83×103,与预期相符,Western-blot方法进一步证实其为目的蛋白。结论:利用pET32a(+)表达载体能表达HPV16 L1/CEA CTL表位重组蛋白,为其进一步的免疫效应研究打下了基础。
- 张德意朱冠保张丽芳朱珊丽陈俊
- 关键词：乳头状瘤病毒
- 热休克蛋白70、NF-κB和Bcl-2的表达与人乳头瘤病毒感染的关系
- 2006年
- 目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)、核转录因子NF-κB和癌基因Bcl-2分别在宫颈癌组织和尖锐湿疣组织中的表达,以及与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:采用免疫组织化学SP法对46例宫颈癌组织、24例尖锐湿疣组织和26例正常宫颈组织进行HSP70、NF-κB和Bcl-2基因蛋白检测;用PCR技术对各组织标本的HPV-DNA进行了检测。结果:HSP70、NF-κB、Bcl-2基因蛋白在宫颈癌组织和尖锐湿疣组织中的表达率显著高于正常对照组(P<0.05);宫颈癌组HPV和HPV16/18的检出率显著高于正常对照组,尖锐湿疣组HPV和HPV6/11的检出率显著高于正常对照组(P<0.05);HSP70、NF-κB、Bcl-2基因蛋白在HPV阳性组中的表达率显著高于阴性组(P<0.05),但它们的表达率在高危型和低危型的HPV感染组间差异无显著性(P>0.05)。结论:HSP70、NF-κB、Bcl-2的表达与宫颈癌、尖锐湿疣的发病及HPV的感染有密切关系,但与HPV的高、低危型无显著关系。
- 王乐丹夏克栋陈向敏林巧爱张丽芳
- 关键词：热休克蛋白70人乳头瘤病毒
- 人乳头瘤病毒-黑色素瘤抗原细胞毒T淋巴细胞表位嵌合基因克隆及其表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建人乳头瘤病毒(HPV)6b型结构蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位嵌合基因并表达目的蛋白,为下一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。方法将MAGE-A3 CTL表位基因插入到UPV6bL1的羧基端序列中,将目的基因连入真核表达转移载体pFastBac^(TM)1,构建重组质粒pFastBac^(TM)1/HPV6bL1/MAGE- A3-CTL,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL;将重组杆状病毒转染sf-9昆虫细胞表达嵌合目的蛋白,并经SDS-Page电泳、考马斯亮蓝染色及Western blot分析鉴定。结果成功构建了重组质粒pFastBac^(TM)1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,获得了重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,并在真核细胞sf-9昆虫细胞中成功表达了嵌合目的蛋白。结论通过基因克隆方法能成功的将MAGE-A3 CTL表位基因插入到HPV6bL1基因中,并能在真核细胞表达系统中表达出嵌合目的蛋白,为进一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。
- 许晓东张德意朱冠保张丽芳
- 关键词：黑色素瘤抗原表位疫苗
- 一种对人黑色素瘤抗原A3蛋白具有结合亲和力的多肽及其用途
- 本发明涉及一种对人黑色素瘤抗原MAGE‑A3具有结合亲和力的多肽及其用途。首次揭示了一种对MAGE‑A3蛋白具有结合亲和力的多肽；本发明还提供了该多肽的在诊断检测中的应用，并作为靶向载体在药物或分子靶向试剂的诊断或治疗用...
- 张丽芳朱珊丽薛向阳蒋朋飞陈俊
- 文献传递
- EB病毒潜伏膜蛋白2的二级结构分析和B细胞表位预测被引量：14
- 2007年
- 目的:预测EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)的二级结构和B细胞表位。方法:以EBV标准株(B95.8)LMP2的完整氨基酸序列为基础,采用SOPMA、GOR、nnPredict和HNN四种方法分别预测LMP2的二级结构;并结合其跨膜区域、亲水性、表面可及性、抗原性、极性和柔韧性等进行综合分析,预测EBV LMP2的B细胞优势表位。结果:四种方法对EBVLMP2二级结构的预测均表明,其二级结构中柔性区域以无规卷曲为主,少见转角。B细胞优势表位可能位于其N端199～209、318～322和381～391区段。结论:用多参数预测EBV LMP2的二级结构和B细胞优势表位,可为其单克隆抗体的制备和表位疫苗设计等研究提供理论依据。
- 欧琴朱珊丽张丽芳
- 关键词：EBV潜伏膜蛋白2B细胞表位
- NF-κB、COX-2在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16感染的关系被引量：11
- 2007年
- 背景与目的:探讨宫颈癌组织中NF-κB、COX-2的表达及其与HPV16感染的关系。材料与方法:采用免疫组织化学PowerVisionTM二步法对46例宫颈癌和31例正常宫颈组织进行NF-κB、COX-2蛋白检测,用PCR技术对组织标本的HPV16 DNA进行检测。结果:NF-κB、COX-2在宫颈癌组织中的表达率显著高于正常对照组(P<0.01),NF-κB、COX-2的表达与HPV16型的感染具有相关性(P<0.05)。结论:宫颈癌组织中NF-κB、COX-2呈高表达。NF-κB的活化及COX-2的高表达可能与HPV16感染有关。
- 林巧爱陈向敏夏克栋董海燕陈韶张丽芳
- 关键词：宫颈癌细胞核因子ΚB环氧合酶-2人乳头瘤病毒16型
- Dicer干预对HPV18 E6/E7基因表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响。方法:设计并合成三条Dicer基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dicer被干预后对HPV18 E6、E7及miR-16基因表达的影响。结果:本研究建立的定量PCR能特异地检测Dicer、HPV18 E6、E7及miR-16基因的表达。设计的三种siRNA均明显下调Dicer基因表达,40 nmol/L的siRNA干预24 h即可获得明显效果。在此基础上分析对miR-16及高危型HPV18 E6、E7表达的影响,结果显示,40 nmol/L的Dicer siRNA干预可明显下调HPV18 E6、E7及miR-16基因表达(P<0.05)。生物信息学分析提示,HPV18 E6、E7基因编码区存在miR-16的结合位点。结论:Dicer siRNA干预能明显下调高危型HPV18E6、E7基因表达,miR-16可能参与HPV18E6、E7基因表达调控。
- 林茂卢徐涟胡飞红胡芝吕艳冯娟张丽芳薛向阳
- 关键词：宫颈肿瘤早期基因微RNA
- 人宫颈癌SiHa细胞荷瘤裸鼠模型的建立及鉴定被引量：5
- 2016年
- 目的:建立人宫颈癌SiHa细胞裸小鼠体表荷瘤模型,并对其成瘤特性进行分析和鉴定。方法:将5×10~6/mL、1×10~7/mL及5×10~7/mL 3个浓度的SiHa细胞悬液分别在3组裸小鼠背部右腋近上肢皮下接种,建立人宫颈癌裸小鼠体表荷瘤模型,观察荷瘤裸鼠的成瘤率并测量肿瘤的大小,5周后取肿瘤组织经病理学方法观察其组织学特性,并采用PCR及免疫组织化学方法对肿瘤组织的HPV16E7 DNA表达进行检测。结果:3组裸小鼠接种SiHa细胞的成瘤率均为100%,5周后肿瘤大小分别达到(77.29±28.34)mm^3、(178.91±61.55)mm^3和(305.11±12.62)mm^3。3个浓度组间肿瘤体积大小差异有统计学意义(P<0.001)。病理学大体观察可见SiHa肿瘤的生长均以局部浸润为主;组织切片观察新生肿瘤细胞特点呈现体积大、核大深染及易见核分裂相的病理性特征;SiHa新生肿瘤组织经PCR检测证实了HPV16E7 DNA阳性,并经免疫组织化学检测证实了HPV16E7蛋白表达阳性。结论:成功建立了SiHa细胞荷瘤裸鼠模型,为人宫颈癌肿瘤靶向治疗及生物学特性研究提供了理想的动物模型。
- 侯柏龙杜王琪熊一融蔡一奇宋易玲林晓云薛向阳张丽芳
- 关键词：SIHA细胞
- 一种对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽及其应用
- 本发明提供一种对HPV18E6蛋白具有结合亲和力的多肽，以葡萄球菌A蛋白的Z结构域作为支架，将其表面氨基酸残基模拟抗体结合位点进行随机突变，通过噬菌体展示技术构建突变文库，以HPV18E6作为靶抗原对该文库进行亲和筛选，...
- 张丽芳朱珊丽陈俊李文姝张静
