张凤萍
- 作品数：4 被引量：33H指数：3
- 供职机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所更多>>
- 发文基金：山东省农业良种工程项目山东省科技发展计划项目农业部农业结构调整重大技术研究专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 养殖刺参（Apostichopus japonicus）“腐皮综合症”重要病原的核酸检测技术
- 对本实验室鉴定的成参“腐皮综合症”主要致病菌--灿烂弧菌(Vibrio splendidus)的16s-23s间区(Intergenic spacer,IGS)进行了PCR扩增、克隆、测序和分析，设计出针对灿烂弧菌的特异...
- 张凤萍
- 关键词：刺参腐皮综合症灿烂弧菌
- 文献传递
- 养殖刺参“腐皮综合征”致病菌--灿烂弧菌的原位杂交检测方法的建立与应用被引量：7
- 2013年
- 以养殖刺参"腐皮综合征"的重要致病菌——灿烂弧菌Vibrio splendidus的16S～23S间隔区序列,设计特异性引物,用PCR方法制备地高辛(DIG)标记探针,建立了原位杂交技术检测感染刺参体内灿烂弧菌的技术方法,并利用该方法对人工感染刺参和健康刺参各组织进行检测。结果显示,感染刺参的体壁结缔组织、肌肉组织、肠粘膜上皮、辐水管等组织的原位杂交检测呈阳性,而与健康刺参组织无交叉反应。在感染组织中,阳性信号(显色)强弱清晰,能准确反映出灿烂弧菌的侵染部位及感染程度,这为探明灿烂弧菌的感染途径、感染病程等致病机理研究奠定了基础,也为养殖刺参疾病预防和健康管理提供了技术支撑。
- 王印庚荣小军张凤萍王岚廖梅杰邹安革
- 关键词：刺参腐皮综合征原位杂交
- 应用PCR方法检测刺参腐皮综合征病原--灿烂弧菌被引量：19
- 2008年
- 腐皮综合征是近年来刺参养殖最主要的疾病,导致刺参大批死亡和惨重的经济损失。根据其主要致病原灿烂弧菌(Vibrio splendidus)的16S^23S间隔区序列,设计特异性引物,利用PCR技术,从纯化的V.splendidus DNA中成功地扩增出产物大小为177bp的DNA片断,并对此方法的灵敏度和特异性进行了研究。结果表明,PCR技术对V.splendidus DNA的检测灵敏度为0.5pg,并且对灿烂弧菌的DNA呈现特异性,而与其他细菌V.fluvialis、V.anguillarum、V.alginolyticus、Aeromonas hydrophila、V.harveyi、V.parahaemolyticus、V.vulnificus的DNA均无交叉反应。应用PCR技术对人工感染的以及取自青岛、烟台和威海的腐皮综合征发病海参进行检测,其检出率均为100%。研究结果表明,PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可成功用于快速检测养殖刺参腐皮综合征原灿烂弧菌。在国内,该方法应用于刺参腐皮综合征的检测尚属首次,它将为刺参腐皮综合征的快速诊断及防治提供又一新的方法。
- 张凤萍王印庚李胜忠荣小军廖梅杰张正
- 关键词：刺参腐皮综合征灿烂弧菌PCR
- 刺参腐皮综合征病原灿烂弧菌检测探针的制备及应用被引量：17
- 2009年
- 腐皮综合征是近年来养殖刺参发生的严重疾病。发病时,刺参大批死亡,经济损失惨重。以其主要致病原灿烂弧菌(Vibrio splendidus)DNA为模板,PCR扩增出16S-23S核糖体RNA基因间隔区序列,插入pMD19-T,转化大肠杆菌DH5α并测序。根据该间隔区序列,设计引物扩增177 bp的地高辛标记的探针。该探针对灿烂弧菌呈现特异性,而对其它细菌V.fluvialis,V.anguillarum,V.alginolyticus,Aeromonas hydrophila,V.harveyi,V.parahaemolyticus,V.vulnificus均呈阴性。探针对灿烂弧菌DNA的检出限为6.25 pg,具有较高敏感度。用该探针对人工感染以及从青岛、烟台、威海获取的腐皮综合征发病海参和养殖水体进行斑点杂交,灿烂弧菌检出率达100%。结果表明,该探针具有良好的特异性和敏感性,可用于快速检测养殖刺参腐皮综合征的病原灿烂弧菌。用该方法检测刺参腐皮综合征尚属首次,为刺参腐皮综合征的快速诊断和防治提供技术支撑。
- 王印庚张凤萍李胜忠陈霞崔玉龙
- 关键词：刺参腐皮综合征灿烂弧菌聚合酶链式反应斑点杂交
