张志刚
- 作品数：8 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国科学院成都生物研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院“百人计划”四川省青年科技基金中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：生物学经济管理更多>>
- 扩展细胞色素P4502A6对大位阻底物的适应性被引量：2
- 2009年
- 细胞色素P450酶(P450)的分子改造及其催化的生物转化是当前的两个研究热点.本研究以扩展P4502A6的底物适应性为目标,通过尝试对P4502A6酶进行N-端修饰提高表达量、筛选随机突变库以及点突变改变活性位点重要氨基酸残基等手段,在两个随机突变体中未筛选到功能突变体,但通过点突变重要氨基酸残基获得了新的突变体P4502A6(N297Q/I300A).该突变体具有比野生型和已报道的其它突变体更广泛的底物适应性,能够催化氧化大位阻底物6-苄氧基吲哚(6-OBzl-indole)生成蓝绿色物质.该物质经质谱测定为靛蓝类二聚体化合物.实验表明,其中两个氨基酸残基的变化都是关键突变,此结果与最新的P4502A6突变体晶体结构研究相符.计算机模拟显示,I300A突变导致活性口袋在铁卟啉环的垂直和水平方向都增大,使其能接纳在两个方向都有位阻的底物;而297位的天冬酰胺是一个功能保守的残基,N297Q的变化可能与氢键等弱作用有关.
- 唐德芳张志刚裴小琼袁帅胡承吴中柳
- 关键词：细胞色素P450CYP2A6点突变生物转化
- 一种快速筛选加氧酶微生物或加氧酶基因的方法
- 本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种快速筛选加氧酶微生物或者加氧酶基因的方法。本发明快速筛选加氧酶微生物的方法包含用唯一碳源富集环境样品和将富集环境样品涂布于培养基上，进行培养、分离和纯化，获得产目标加氧酶的微生物菌株...
- 吴中柳刘艳张超张志刚
- 文献传递
- 一种1,4-β-D-木聚糖酶突变体
- 本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及1,4-β-D-木聚糖酶突变体。本发明使用易错PCR方法、DNA改组技术对该酶基因进行突变，再通过高通量筛选方法将正突变检出。并结合基于序列比对的半理性设计方法确定部分潜在热稳...
- 吴中柳张志刚刘艳
- 文献传递
- 嗜热脂肪土芽孢杆菌木聚糖酶基因的合成及其在大肠杆菌中的表达(英文)被引量：1
- 2009年
- 来自嗜热脂肪土芽孢杆菌的木聚糖内切酶XT6在工业上有着重要的应用,已经成功应用于工业规模的生产试验.本文作者在合成XT6基因全序列的同时对其密码子进行了优化,且构建重组质粒在大肠杆菌中高表达.通过优化表达条件,功能正常的XT6基因在大肠杆菌中成功过量表达,蛋白表达量占细胞中总蛋白的65%.重组表达的木聚糖内切酶XT6特性和天然酶相似,以桦木木聚糖为底物测定细胞提取物中木聚糖酶活性,最大活性高达3030U/mL.本文首次报道了来自嗜热脂肪土芽孢杆菌中木聚糖酶基因全序列的合成和在大肠杆菌中成功过量表达.
- 张志刚裴小琼吴中柳
- 关键词：木聚糖酶密码子优化
- 用高通量umu测试从环境基因组中筛选新型环氧化酶
- 环氧化合物是很多药物和活性分子合成中的重要中间体,光学活性的环氧更是现代有机合成中最重要的手性砌块之一。由于酶催化剂独一无二的区域选择性和对映选择性,温和的反应条件和环境友好的过程,环氧化酶在生物催化领域一直倍受关注
- 吴中柳刘艳李晓璐张志刚裴小琼
- 文献传递
- 一种1, 4-β-D-木聚糖酶突变体
- 本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及1,4-β-D-木聚糖酶突变体。本发明使用易错PCR方法、DNA改组技术对该酶基因进行突变，再通过高通量筛选方法将正突变检出。并结合基于序列比对的半理性设计方法确定部分潜在热稳...
- 吴中柳张志刚刘艳
- 一种1,4-β-D-木聚糖酶突变体
- 本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及1,4-β-D-木聚糖酶突变体。本发明使用易错PCR方法、DNA改组技术对该酶基因进行突变，再通过高通量筛选方法将正突变检出。并结合基于序列比对的半理性设计方法确定部分潜在热稳...
- 吴中柳张志刚刘艳
- 文献传递
- 一种1, 4-β-D-木聚糖酶突变体
- 本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及1,4-<I>β</I>-D-木聚糖酶突变体。本发明使用易错PCR方法、DNA改组技术对该酶基因进行突变，再通过高通量筛选方法将正突变检出。并结合基于序列比对的半理性设计方法确...
- 吴中柳张志刚刘艳
- 文献传递
