徐发良
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 手术创伤后Toll样受体4/髓样分化蛋白-2的表达被引量：9
- 2005年
- 目的研究手术创伤对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化蛋白2(MD2)表达的影响及其临床意义。方法设计自身配对实验,采集12例手术患者外周静脉血;用密度梯度离心法和黏附洗脱法分离单核细胞,用流式细胞仪检测单核细胞TLR4和MD2的表达;血浆脂多糖(LPS)、血浆TNFα和IL10,以及血浆TLR4和MD2含量分别用鲎试剂法、放免法和ELISA法检测。结果单核细胞TLR4和MD2在术后第1～3天显著上调表达(P<0.01),两者具有显著相关性;围手术期血浆LPS在正常范围波动(<50μg/L),血浆TNFα在各时间点差异无统计学意义(P>0.05);血浆IL10于术后第3天显著升高(P<0.01);血浆MD2在术后第3～5天显著升高(P<0.01),而TLR4仅在第3天轻度升高(P>0.05)。结论手术创伤早期可导致TLR4/MD2上调表达,致机体敏感性增强;此后血浆抑制性介质IL10和MD2升高并产生免疫抑制效应。这种双向性变化可能是大手术后全身炎症反应综合征(SIRS)和脓毒症发生的分子机制之一。
- 徐发良李磊吕凤林顾长国徐祥胡承香尹华华
- 关键词：髓样分化蛋白-2TOLL样受体4血浆TNF-Α创伤后免疫抑制效应外周静脉血
- 髓样分化蛋白-2在天然免疫中的作用被引量：5
- 2004年
- Toll样受体 (Toll likereceptor ,TLR)家族作为模式识别受体 ,在天然免疫中具有重要作用。髓样分化蛋白 2 (myeloiddifferentialprotein 2 ,MD 2 )可能含有两个相对独立的功能结构域 ,既能与Toll样受体家族中的TLR4、TLR2结合 ,也能与多种配体结合 (包括lipopolysaccharide ,LPS)。这种特殊的结构可能与其三方面的主要功能有关 :(1)MD 2与TLR4结合 ,赋予TLR4对各种配体 (包括LPS)的反应性 ;(2 )MD 2与TLR2结合 ,赋予TLR2对LPS的反应性 ,并增强TLR2对细菌及其胞壁成分的反应性 ;(3)MD 2能促进TLR4和TLR2的表达 ,并且与TLR4在细胞内的分布密切相关。这表明MD 2可以通过两种方式直接或间接调控TLRs的功能 :与TLR2 /TLR4结合 ,或调控TLR2 /TLR4的表达与分布。因而MD 2不仅仅是TLR4的辅助分子 ,而且还是天然免疫中的调控分子 ,可能在感染、炎症。
- 徐发良李磊
- 关键词：髓样分化蛋白-2天然免疫信号转导生物学功能
- 人MD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达被引量：3
- 2003年
- 构建人髓样分化蛋白 2 (humanmyeloiddifferentiatonprotein 2 ,hMD 2 )与谷胱甘肽巯基转移酶 ( glutathione S transferase,GST)的融合蛋白(hMD 2 /GST)表达载体PGEX 4T 1/hMD 2 ,在大肠杆菌中融合表达hMD 2 /GST。以真核表达载体PEF BOS/hMD 2为模板 ,用PCR法在MD 2编码序列上下游引入酶切位点和终止密码子 ;将hMD 2编码序列克隆入原核表达载体PGEX 4T 1的相应酶切位点 ;用PCR和酶切筛选、鉴定重组质粒PGEX 4T 1/hMD 2 ,并对插入基因片断测序 ;重组质粒PGEX 4T 1/hMD 2转化大肠杆菌 ,经IPTG诱导后用SDS PAGE分析表达产物。结果PCR、酶切鉴定和序列测定证实MD 2编码序列正向插入原核表达载体PGEX 4T 1的相应酶切位点 ,片断与PCR扩增产物大小相同、序列无误、阅读框架正确 ;SDS PAGE证实hMD 2 /GST在大肠杆菌中表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 3 0 %。说明成功构建了PGEX 4T 1/hMD 2载体 ,hMD 2 /GST融合蛋白在大肠杆菌中得到初步表达 ,为MD
- 徐发良顾长国胡承香李磊
- MD-2的B细胞抗原表位预测被引量：5
- 2006年
- 目的 利用生物信息学预测髓样分化蛋白-2（myeloid differentiation protein-2，MD-2）的B细胞抗原表位，为MD-2特异性抗体的制备提供实验基础。方法 采用多种生物软件和互联网服务器，以单参数（亲水性、抗原性、可及性及可塑性）预测为基础，二级结构预测初步筛选，抗原指数最终确定的方法预测MD-2的B细胞抗原表位。结果 96～110序列（RGSDDDYSFCRALK）的亲水性和抗原指数（AI=0．043）显著高于其他候选片断；65～76序列（YIPRRDLKQLYF）和107～117序列（ALKGETVNTTI）的A1分别为0．0063和0．0036。结论 96—110序列（RGSDDDYSFCRALK）是MD-2的B细胞优势抗原表位。
- 闫红徐发良顾长国胡承香葛衡江李磊
- 关键词：生物信息学MD-2抗原表位
- 髓样分化蛋白-2与脂多糖结合的模拟小肽的分子设计
- 2005年
- 目的:利用生物信息学原理,设计针对髓样分化蛋白-2的与脂多糖结合的模拟小肽,为研制具有抗炎效应的髓样分化蛋白-2拮抗多肽奠定基础。方法:实验于2004-01/12在第三军医大学野战外科研究所第一研究室完成。采用Goldkey核酸和蛋白质分析软件及核酸和蛋白质数据光盘、PC/Gene软件系统;EMBL提供的PRS服务器、NCBI提供的BLAST服务器及Superfamily等互联网服务器,分析髓样分化蛋白-2的氨基酸序列,预测髓样分化蛋白-2的新功能,寻找髓样分化蛋白-2与脂多糖结合的关键位点。结果:①髓样分化蛋白-2的氨基酸序列功能位点信息:在96～141位氨基酸具有多达5个的功能位点。②髓样分化蛋白-2的Superfamily超家族预测:K128和K132是与脂多糖结合域的关键氨基酸,以K128-K132为中心的肽段呈现较强的亲水性,即NH2-FSKGKYKCV-COOH。结论:如果人工合成髓样分化蛋白-2与脂多糖结合域的关键序列,即“髓样分化蛋白-2模拟小肽”,并以此段多肽为靶,采用噬菌体随机肽库筛选,可望得到天然髓样分化蛋白-2的拮抗多肽。
- 闫红顾长国徐发良胡承香葛衡江李磊
- 关键词：分子生物学分子构象肽库
- 创伤与择期手术患者外周血单核细胞TLR4表达变化差异
- 目的研究创伤患者与择期手术病人外周血单核细胞内内毒素复合受体--Toll样受体4(TLR4)mRNA及蛋白的不同表达变化,观察其相互间的差异及与临床预后的关系。方法分别于术后及创伤后1d,3d,5d采集35例创伤患者(损...
- 刘枫徐发良郑仲谨李元朝谭燕吴晓凤刘华渝李磊
- 人类髓样分化蛋白-2的原核表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :在大肠杆菌DH 5α中表达人类髓样分化蛋白 2 (humanmyeloiddifferentiatonprotein 2 ,hMD 2 )与谷胱甘肽巯基转移酶 (glutathione s transferase ,GST)的融合蛋白 (GST/hMD 2 ) ,并对融合蛋白进行免疫学鉴定及初步的变性复性处理 .方法 :建立GST/hMD 2表达菌 ,在不同温度下以不同浓度IPTG诱导不同时间后采样 ,用SDS PAGE分析各种组合条件下融合蛋白的表达量和溶解性 ;用Western Blot鉴定融合蛋白免疫性 ;用尿素变性和透析法对融合蛋白进行初步纯化 .结果 :在 37℃经 0 .4mmol/LIPTG诱导 4h后 ,GST/hMD 2可获最高表达量 (约占菌体总蛋白的 2 0 % ) ,未见可溶性表达 ;Western Blot证实GST/hMD 2能与抗MD 2单克隆抗体特异性结合 ;GST/hMD 2溶于 8mol/L尿素 ,梯度透析后纯度提高至4 0 % .结论 :hMD 2可在大肠杆菌DH
- 徐发良顾长国胡承香李磊
- 关键词：髓样分化蛋白-2基因表达重组融合蛋白质类谷胱甘肽转移酶
