曹姝
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
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- 沉默CD133基因对CD133^+肝癌干细胞放射敏感性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究沉默CD133基因对人肝癌CD133+-HepG2干细胞放射敏感性的影响。方法免疫磁珠分选HepG2细胞;流式细胞术检测分选前后CD133表达率;NOD/SCID小鼠成瘤实验验证其干性;靶向沉默CD133基因并分组(空白组、阴性感染组、阳性感染组);RT-PCR和Western blot检测各组CD133基因mRNA和蛋白表达;克隆形成实验检测各组细胞经不同剂量照射后的克隆形成率及存活率,绘制存活曲线并计算各组细胞放射生物学参数D0、Dq、N及放射增敏比(SER);流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况。结果流式细胞术检测结果显示,分选前后CD133表达率分别为(1.36±0.20)%和(87.62±1.92)%。CD133+细胞在细胞数为1×103/ml时即可形成皮下移植瘤。RT-PCR和Westernblot检测结果显示,阳性感染组CD133 mRNA和蛋白表达均受到明显抑制。流式细胞术检测结果显示:阳性感染组G1、S期减少G2期增加,细胞凋亡率明显增加。克隆形成实验显示阳性感染组D0、Dq、N值与SF2均减小,放射敏感性明显增强,其SER为(1.37±0.02),差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 CD133作为肝癌干细胞的表面标志物之一,可能成为肝癌干细胞放射治疗增敏的靶点。
- 王勇唐川兰曦冉雪琪邹冬玲曹姝李芳李少林
- 关键词：CD133肝癌干细胞RNA干扰
- RNA干扰抑制CD133表达对CD133^+肝癌干细胞增殖和化疗敏感性的影响被引量：3
- 2012年
- 目的利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调CD133+HepG2肝癌干细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响。方法利用流式分选技术筛选CD133+HepG2细胞并检测分选前后CD133表达量,体外成球及体内成瘤实验鉴定其"干性";随后以CD133 mRNA编码序列为干扰靶点,采用慢病毒介导的shRNA转染CD133+细胞。应用RT-PCR和Western Blot检测CD133 mRNA及蛋白表达,克隆形成实验检测转染前后细胞增殖情况,CCK-8法和流式细胞仪检测在化疗药物顺铂作用下转染前后细胞的生长抑制率及凋亡情况。结果分选前后CD133表达率分别为(3.36±1.80)%,(88.74±3.19)%;CD133+细胞相对于CD133-细胞有更强的体外成球和体内成瘤能力;转染CD133 shRNA后的细胞CD133 mRNA表达明显受到抑制(P<0.05),蛋白表达水平降低,增殖能力显著下降(P<0.01)。顺铂对转染CD133 shRNA后细胞生长抑制作用明显提高(P<0.01),且其在顺铂作用下的凋亡率也显著增加(P<0.05)。结论慢病毒介导的shRNA能显著下调CD133+肝癌干细胞CD133基因的表达,抑制其增殖并提高其对顺铂的敏感性。
- 兰曦王勇曹姝邹冬玲李芳李少林
- 关键词：CD133RNA干扰
- 霉酚酸酯对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的保护作用及分子机制研究
- 目的：初步探讨霉酚酸酯(Mycophenolate mofetil，MMF)在博莱霉素(bleomycin，BLM)诱导的小鼠肺纤维化模型中的保护作用及分子机制。 方法：将36只C57BL/6小鼠随机分为6组，每组6只...
- 曹姝
- 关键词：霉酚酸酯博莱霉素肺纤维化转化生长因子-Β1免疫组化法
- 霉酚酸酯对小鼠肺纤维化的治疗作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化模型的治疗作用。方法将36只C57BL/6小鼠完全随机分为6组:正常对照组、MMF对照组、BLM模型组及MMF干预组(分为低、中、高剂量组),每组6只。实验第1天BLM模型组、MMF干预组经气管注入BLM(6 mg/kg),正常对照组、MMF对照组则注入等量生理盐水。从实验第2天开始MMF干预组分别给予低、中、高剂量(20、60、100 mg/kg)MMF,2周后处死所有小鼠,收集肺脏标本;HE、Masson染色在组织形态学上观察肺纤维化病变情况,Aschcroft法评分;RT-PCR检测COLA1及COLA2的mRNA表达水平;免疫组化法检测肺组织TGF-β1的蛋白表达。结果 BLM诱导的肺纤维化模型构建成功。MMF高剂量干预组较BLM模型组纤维化程度减轻,COLA1、COLA2 mRNA表达及TGF-β1蛋白表达明显降低(P<0.01);低、中剂量组与BLM模型组间,MMF对照组与正常对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MMF能有效减轻BLM诱导的肺纤维化病变,其机制可能与下调促纤维化细胞因子TGF-β1相关。
- 曹姝李少林兰曦王勇邹冬玲臧春宝王颖
- 关键词：霉酚酸酯博莱霉素肺纤维化
- 霉酚酸酯对小鼠肺纤维化组织中转化生长因子-β1表达的影响
- 2013年
- 目的探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为6组:正常对照组、MMF对照组、BLM模型组、MMF低(20 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量干预组,每组6只。BLM模型组和MMF 3个干预组经气管注入BLM(6 mg/kg),正常对照组和MMF对照组注入等量无菌生理盐水;次日按MMF对照组和MMF干预低、中、高剂量组小鼠体重计算MMF给药量,灌胃小鼠,每日1次,连续14 d,正常对照组和BLM模型组用等体积的双蒸水灌胃。灌胃第16天采集小鼠肺脏标本,经HE、Masson染色,从组织形态学上观察肺组织纤维化情况并进行Aschcroft评分;RT-PCR法检测小鼠肺组织中TGF-β1基因mRNA的转录水平;Western blot法检测小鼠肺组织中TGF-β1蛋白的表达水平。结果 BLM诱导的小鼠肺纤维化改变显著,Ashcroft评分较正常对照组显著增高(P<0.01),表明小鼠肺纤维化模型构建成功;MMF高剂量干预组肺组织损伤减轻,炎细胞浸润及胶原沉积减少,Ashcroft评分显著降低(P=0.000)。MMF高剂量干预组与BLM模型组比较,TGF-β1基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显减低(P<0.05);而MMF低、中剂量干预组与BLM模型组之间、MMF对照组与正常对照组之间,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高剂量的MMF(100 mg/kg)可抑制BLM诱导的肺纤维化小鼠肺组织中TGF-β1基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平,有望成为治疗肺纤维化的理想药物。
- 曹姝李少林吴府容康强强李芳王颖
- 关键词：霉酚酸酯博来霉素肺纤维化转化生长因子-Β1
- 肿瘤特异性启动子Survivin调控shRNA腺病毒的构建及对HepG-2细胞中CD133基因表达的抑制
- 2013年
- 目的:构建肿瘤特异性启动子Survivin驱动的小发夹RNA(shRNA),通过下调HepG-2肝癌细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:①构建pEntr-Surp-shRNA真核表达载体,转染HepG-2肝癌细胞,Hela细胞,293T细胞。②设计shRNA干扰片段,筛选干扰最佳干扰效率的CD133干扰片段,重组载体pAd.Surp-shRNA972,pAd.SurpshRNA2377,pAd.Surp-shRNA485并筛选出稳定表达shRNA的转染克隆。③Ad.Surp-shRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.SurpshRNA485腺病毒分别转染HepG-2肝癌细胞株,建立Ad.Surp-shRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.Surp-shRNA485实验组,未转染腺病毒组为空白组。感染肝癌细胞株,应用RT-PCR和Western blot检测CD133 mRNA和蛋白的表达,MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力。结果:①成功构建了Survivin启动子调控的shRNA真核表达载体pEntr-Surp-shRNA,在293T细胞株无荧光,而在Hela、HepG-2细胞株中荧光表达明显,证实Survivin具有肿瘤特异性。②成功包装Ad.SurpshRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.Surp-shRNA485腺病毒。③RT-PCR和Western blot检别显示Ad.Surp-shRNA972、Ad.SurpshRNA2377,有封闭CD133 mRNA和蛋白表达的效果;计算实验组与空白组相比mRNA抑制率分别为(63.44±0.02)%、(56.98±0.03)%;Ad.Surp-shRNA972、Ad.Surp-shRNA2377、Ad.Surp-shRNA485组蛋白抑制率分别为(55.43±0.40)%、(48.65±0.20)%、(34.67±0.40)%;实验组细胞的增殖和侵袭能力也受到明显抑制,Ad.Surp-shRNA972组生长抑制率为(72.88±0.74)%,Ad.Surp-shRNA2377组生长抑制率为(59.90±0.87)%,Ad.Surp-shRNA485组生长抑制率为(30.18±0.95)%。结论:肿瘤特异性启动子Survivin调控腺病毒介导的shRNA能显著下调CD133基因的表达,抑制肝癌细胞株HepG-2的增值和减弱其侵袭力。
- 李芳邹冬玲曹姝李少林
- 关键词：SURVIVINCD133小发夹RNA
- IL-6对食管癌细胞侵袭迁移及上皮间质转化的影响被引量：12
- 2013年
- 目的研究白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对食管癌Eca-109细胞增殖、侵袭迁移及上皮间质转化的影响,探讨其作用机制。方法用不同浓度(0、25、50和100 ng/mL)的IL-6处理Eca-109细胞,采用MTT法检测细胞增殖,细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,荧光定量PCR检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Twist1mRNA的表达,Western blot检测Stat3、p-Stat3、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Twist1蛋白表达。结果与对照组(0 ng/mL)比较,IL-6处理组(25、50、100 ng/mL)在IL-6作用后第1～5天Eca-109细胞增殖增加,呈量效-时效关系(P<0.05,P<0.01)。IL-6各浓度(0、25、50 ng/mL)组24 h细胞迁移距离分别为(18.20±0.89)、(23.77±0.40)和(25.27±0.93)mm,与对照组(0 ng/mL)比较,IL-6处理组(25、50 ng/mL)Eca-109细胞体外迁移距离明显增加(P<0.05,P<0.05)。IL-6各浓度(0、25、50 ng/mL)组穿过Matrigel胶的细胞分别为(70.33±2.36)、(103.00±3.51)、(118.00±4.00)个/视野,与对照组(0 ng/mL)比较,IL-6处理组(25、50 ng/mL)Eca-109细胞体外穿过Matrigel胶的细胞数量明显增加(P<0.05,P<0.05)。荧光定量PCR结果显示,与对照组(0 ng/mL)相比,IL-6处理(25、50 ng/mL)组N-cadherin、Vimentin和Twist1 mRNA达增加(P<0.05,P<0.05),E-cadherin mRNA表达降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组(0 ng/mL)相比,IL-6各处理(25、50 ng/mL)组p-Stat3、N-cadherin、Vimentin和Twist1蛋白表达增加,E-cadherin蛋白表达降低,Stat3蛋白表达没有明显改变。结论 IL-6可提高食管癌Eca-109细胞体外增殖、侵袭、迁移能力,促进上皮间质转化过程,其机制可能通过活化Stat3蛋白,上调Twist1的表达,进一步调控EMT蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达。
- 臧春宝曹姝李芳陈兴月李少林
- 关键词：IL-6食管癌STAT3上皮间质转化
