朱路
- 作品数：12 被引量：50H指数：4
- 供职机构：华中科技大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学哲学宗教更多>>
- 日本血吸虫双价DNA疫苗对小鼠单次肌肉注射的毒性试验被引量：1
- 2006年
- 目的观察日本血吸虫双价DNA疫苗单次肌肉注射小鼠的急性中毒反应,初步评价其安全性。方法40只BALB/c小鼠(雌雄各半)随机分为4组,即10、20mg/kg给药组,空白质粒和生理盐水对照组,连续观察14d。结果各组动物无死亡,疫苗10mg/kg组未见明显毒性反应,疫苗20mg/kg组有个别动物出现短暂的活动减少,而空白质粒对照组出现活动减少和体重下降。结论日本血吸虫双价DNA疫苗对小鼠单次肌肉注射给药无明显毒性反应,预期临床应用安全性好。
- 石佑恩胡媛朱路余龙江朱晓华
- 关键词：日本血吸虫双价DNA疫苗毒性实验单次剂量
- 日本血吸虫DNA疫苗的优化策略被引量：2
- 2006年
- 血吸虫病严重危害人类及家畜健康,发展疫苗是防治血吸虫感染的有效措施。传统疫苗的发展因成本高、免疫原性低及安全隐患而受到限制。发展DNA疫苗成为近年的研究重点。为提高DNA疫苗的免疫保护力,候选抗原的筛选、CpG序列的优化、基因佐剂的选用、多价疫苗的构建等被认为是日本血吸虫DNA疫苗的优化策略。
- 李春艳余龙江鲁明波朱路夏涛
- 关键词：日本血吸虫DNA疫苗
- 两种血吸虫病DNA疫苗的候选抗原基因研究被引量：4
- 2008年
- 目的:以日本血吸虫基因SjFABP和SjGST原核表达产物检测二价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST在体内诱发的特异性抗体。方法:克隆日本血吸虫抗原基因SjFABP和SjGST,构建重组原核表达载体pET30a-SjFABP、pET30a-SjGST及真核表达载体pVIVO2-SjFABP-SjGST;将pET30a-SjFABP和pET30a-SjGST进行原核表达,并将表达产物用镍亲和柱分离纯化;采用Western印迹对日本血吸虫DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST免疫4周后的BALB/c小鼠血清进行特异性抗体检测。结果:克隆了日本血吸虫抗原基因SjFABP(399bp)和SjGST(657bp),并构建了pET30a-SjFABP、pET30a-SjGST及pVIVO2-SjFABP-SjGST重组质粒;经Western印迹检测,pET30a-SjFABP及pET30a-SjGST原核表达的抗原蛋白均能够与经日本血吸虫二价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST免疫的小鼠的血清产生特异性免疫反应。结论:日本血吸虫SjFABP和SjGST基因的原核表达系统成功建立;原核表达的抗原蛋白具有免疫原性;以原核表达产物可检测日本血吸虫DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST在体内诱发的特异性抗体。
- 夏涛朱路龙全科鲁明波余龙江
- 关键词：日本血吸虫原核表达DNA疫苗
- 实时PCR分析△^5脱饱和酶在花生四烯酸合成中的作用被引量：4
- 2006年
- 花生四烯酸是人体的必需脂肪酸，具有独特的生物活性。△^5脱饱和酶是花生四烯酸生物合成途径中催化二高-γ-亚麻酸脱饱和为花生四烯酸的酶。通过实时定量PCR技术，检测了△^5脱饱和酶在不同花生四烯酸产量的高山被孢霉（Mortierella alpina）菌株M10、M6和M23中的mRNA表达水平，以及在高产花生四烯酸菌株M6培养过程中的mRNA表达水平的动态变化。发现岔脱饱和酶基因的mRNA表达水平与花生四烯酸的产生之间存在明显的线性关系，表明△^5脱饱和酶在高山被孢霉花生四烯酸合成途径中起到了非常重要的作用。
- 肖靓刘智朱敏余龙江朱路周蓬蓬
- 关键词：花生四烯酸实时PCR高山被孢霉
- 濒危植物岩黄连叶片中基因组DNA的提取及分析被引量：7
- 2006年
- 目的获取高质量的岩黄连基因组DNA。方法用改进的SDS-CTAB法从岩黄连叶片中提取基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、PCR检测其质量,并与传统的CTAB法比较。结果通过改进的SDS-CTAB法提取的DNA优于CTAB法提取的DNA,电泳条带清晰,纯度高,能较好的进行PCR。结论改进的SDS-CTAB法适合岩黄连基因组DNA的提取。
- 程华周蓬蓬余龙江胡琼月朱路刘智敖明章
- 关键词：岩黄连基因组DNA
- 日本血吸虫DNA多价疫苗pVIVO_2SjFABP-23的构建及其保护性免疫被引量：12
- 2006年
- 目的构建日本血吸虫多价DNA疫苗pVIVO2SjFABP-23,并观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据Sj FABP和Sj23的基因序列合成两对特异性引物,利用重组PCR技术将日本血吸虫Sj FABP和Sj23的基因片段进行拼接,得到融合基因SjFABP-23,再将该片段重组于p GEM-T载体中,进行PCR扩增及DNA序列测定。然后经双酶切将目的片段SjFABP-23克隆到pVIVO2的一个多克隆位点上转化E.coliGT 110获得重组质粒pVIVO2SjFABP-23,免疫小鼠进行免疫保护性实验。结果PCR扩增出一条大小约为1.1Kb的目的片段。免疫小鼠获得52.14%减虫率(P<0.01)和60.93%的减卵率(P<0.01),且均高于单价疫苗pVIVO2Sj23(P<0.05)。结论PCR成功扩增SjFABP-23的基因片段,血吸虫DNA多价疫苗pVI-VO2SjFABP-23构建成功,该疫苗在小鼠抗血吸虫感染中具有比单价疫苗pVIVO2Sj23更好的免疫保护作用。
- 李春艳余龙江刘智朱路朱晓华胡媛石佑恩
- 关键词：日本血吸虫脂肪酸结合蛋白多价DNA疫苗免疫保护
- 高山被孢霉Δ5脱饱和酶基因的分离与验证被引量：6
- 2005年
- 花生四烯酸(arachidonicacid)是人体的必需脂肪酸,具有独特的生物活性。Δ5脱饱和酶是花生四烯酸生物合成途径上的关键酶,以二高-γ-亚麻酸为底物,催化其第5位碳脱氢形成花生四烯酸。从花生四烯酸高产菌株高山被孢霉M6(Mortierellaalpina)中通过RT-PCR分离了可能的编码Δ5脱饱和酶完整的cDNA,其大小为1366bp,编码446个氨基酸。推导出的蛋白质含有Δ5脂酰脱饱和酶中保守的特征性结构域,包括该蛋白质N端典型的细胞色素b5结构域,以及3个保守的组氨酸盒。为验证该蛋白质的功能,将该基因片段克隆到穿梭表达载体pPIC9K中,获得的重组载体pPIC9K-D5通过电转化法转化到巴斯德毕赤酵母GS115中,利用G418耐受度筛选出高拷贝数的酵母转化子,在加入外源底物二高-γ-亚麻酸时,利用甲醇诱导酵母转化子表达外源基因。酵母转化子的油脂的气相色谱图谱中出现了一个花生四烯酸的特征峰,进一步对该峰进行气质联谱(GC-MS)分析,证实该峰是花生四烯酸。研究结果表明,从高山被孢霉M6中分离出Δ5脱饱和酶基因。
- 朱敏刘智余龙江朱路程华
- 关键词：花生四烯酸高山被孢霉
- 日本血吸虫核酸疫苗质粒适宜宿主菌的筛选及其发酵条件的优化
- 2010年
- 目的筛选二价日本血吸虫核酸疫苗质粒的适宜宿主菌,并对其发酵条件进行优化。方法通过综合考察细胞干重、质粒DNA产量及工程菌传代的质粒稳定性等参数,确定适宜宿主菌及其相适应的发酵培养基碳源、氮源和磷酸盐类型;进一步通过中心组合设计响应面试验,优化发酵培养基,并对优化的发酵培养基进行实验验证。结果确定适宜宿主菌为E.coliDH5α,优化的发酵培养基(m/v)为:NaCl1.0%,Yeast Extract1.0%,磷酸盐0.3%[其中m(K2HPO4)∶m(KH2PO4)=1∶4],甘油1.68%,牛肉汁2.28%,豆饼汁4.21%。在此发酵条件下,菌体干重由原来的1.57mg/ml增长至5.68mg/ml,质粒DNA产量由原来的3.94μg/ml增长至36.52μg/ml。结论已筛选出日本血吸虫核酸疫苗质粒适宜宿主菌,并优化了其发酵条件,明显提高了质粒DNA产量,具有大规模发酵生产应用价值。
- 朱路刘海峰龙全科鲁明波余龙江
- 关键词：质粒发酵
- 高山被孢霉 5脱饱和酶基因的分离、功能验证与表达分析
- 花生四烯酸(arachidonic acid)是合成人体前列腺素、凝血噁烷以及白三烯的前体物质,具有独特的生物活性,花生四烯酸还具有重要的营养作用,它是人类的必需脂肪酸之一,作为人母乳的天然成分,从对于婴儿的神经及生理的...
- 朱敏刘智余龙江朱路程华
- 关键词：花生四烯酸高山被孢霉巴斯德毕赤酵母
- 文献传递
- 日本血吸虫三价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH的构建及其免疫保护作用评价被引量：3
- 2010年
- 目的:构建含有日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白(SjFABP),3-磷酸甘油醛脱氢酶(SjGAPDH),26kDa谷胱甘肽S转移酶(Sj26)的三价DNA疫苗,并通过药理实验评价其抗血吸虫感染的免疫保护作用。方法:以血吸虫成虫RNA为模板制备cDNA第一链,RT-PCR扩增得到抗原基因片段,再通过重组PCR技术,将Sj26和SjGAPDH融合为Sj26.SjGAPDH基因。将SjFABP和Sj26.SjGAPDH分别克隆入pVIVO2的mcs1和mcs2,获得重组质粒pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH。瞬时转染MCF-7细胞,通过逆转录PCR(RT-PCR)检测抗原基因在mRNA水平的表达,通过间接荧光免疫(IIF)检测抗原基因在小鼠体内抗原水平表达,验证了DNA疫苗的有效性;并免疫小鼠后进行免疫保护性初步试验。结果:经过酶切、测序及体内外表达验证,该三价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH构建成功;该三价DNA疫苗在小鼠抗血吸虫感染中诱发减虫率和减卵率达到58.6%和59.8%。结论:该三价DNA疫苗组具有比单价和双价DNA疫苗组更加良好的免疫保护作用,为日本血吸虫DNA疫苗的研制奠定了基础。
- 朱路龙全科刘海峰鲁明波胡媛石佑恩余龙江
- 关键词：日本血吸虫脂肪酸结合蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶
