李丹丹
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：天津医科大学基础医学院生理学与病理生理学系更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金天津市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同G蛋白耦联受体激酶对β-肾上腺素受体诱导心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活化的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨不同G蛋白耦联受体激酶（GRK）对β-肾上腺素受体（β-AR）诱导的心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）活化的影响。方法雄性小鼠（体质量20～28 g）分为野生对照组（WT：SPF级C57BL/6小鼠,作为阳性对照）、GRK2,3,5,6基因敲除组（GRK2KO、GRK3KO、GRK5KO、GRK6KO）和β1、2-AR突变组[GRK（-）：β-AR缺乏GRK磷酸化位点,作为阴性对照]。各组小鼠分别给予异丙基肾上腺素（ISO）刺激或等量生理盐水2周,断颈处死动物,切取左心室并剥离粘连组织,经液态氮处理后贮存于-80℃。Western blot用于检测有活性的CaMKⅡ（p-CaMKⅡThr286/T-CaMKⅡ）的表达变化;采用ELISA方法检测心肌匀浆CaMKⅡ活性;HE染色检测心肌细胞组织学变化。结果给予ISO刺激后,与阳性对照WT小鼠变化相同,GRK2KO,GRK3KO和GRK6KO小鼠心肌组织中p-CaMKⅡ表达水平明显增加（ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P〈0.05）,而GRK5KO与阴性对照GRK（-）小鼠变化相同,ISO刺激组与非刺激组相比心肌组织中p-CaMKⅡ表达无明显增加;ELISA检测也发现,ISO刺激后WT及GRK2KO,GRK3KO,GRK6KO小鼠心肌组织匀浆的CaMKⅡ活性显著增加（ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P〈0.05）,而GRK5KO及GRK（-）小鼠ISO的CaMKⅡ活性无明显增加。HE染色发现,WT小鼠ISO刺激与非刺激组相比心肌横截面积明显增大[（1388.2±270.3）μm^2比（825.5±414.9）μm^2,P〈0.05],GRK5KO小鼠ISO刺激组与非刺激组比较,心肌横截面积无明显差异[（837.1±112.8）μm^2比（883.5±235.9）μm^2,P〉0.05]。结论 GRK5对β-AR诱导的CaMKⅡ激活是必要的;GRK5基因敲除可能通过引起CaMKⅡ表达改变而改善β-AR持久兴奋诱导的心肌肥厚。
- 李锐柴慧娟屈扬扬李丹丹刘艳丽张玲
- 关键词：Β-肾上腺素受体钙心肌肥厚
- GRK5与持久兴奋βAR诱导心肌肥厚氧化应激途径的关系被引量：2
- 2015年
- 目的探讨持久兴奋B受体诱导病理性心肌肥厚机制中，氧化应激水平升高与GRK5之间的关系。方法雄性sD大鼠（180～200g），按照随机原则分为对照组（CTRL）、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组（CTRL＋NAC）、异丙肾上腺素（ISO）组（ISO）及ISO注射辅以NAC组（ISO＋NAC），6只／组。ISO组通过腹腔注射给予ISO3mg／（kg·d），对照组给予腹腔注射等量生理盐水，NAC组通过饮用水给药15g/L，共2周，分别检测各组大鼠血压、心脏质量指数（HMI）、心肌组织学变化、心肌NOX4及GRK5的表达变化。结果与CTRL组比较，ISO组大鼠HMI明显升高[（3．99±0．10）mg／g VS（3．31±0．13）mg／g]，其差异有统计学意义（P〈0．05），心肌横截面积明显增大[（11117．00±387．57）μm^2vs（4572．23±176．39）μm^2]，其差异有统计学意义（P〈0．05）；ISO＋NAC组大鼠的HMI[（3．56±0．12）mg／g]、心肌细胞横截面积[（6160．33±141．44）μm2]均明显低于ISO组大鼠，其差异均具有统计学意义（P〈0．05）；ISO组大鼠心肌NOX4蛋白表达水平明显高于CTRL组（10．59±1．61VS4．35±1．65），其差异具有统计学意义（P〈0．05），NAC明显降低了ISO诱导的NOX4表达增加（4．67±1．25VS10．59±1．61），其差异具有统计学意义（P〈0．05）；用Westrenblot、免疫组化技术检测心肌GRK5表达情况，结果显示ISO组与CTRL组、ISO＋NAC组与ISO组差异均无统计学意义（黔0．05）；同时RT—qPCR技术检测心肌GRK5mRNA表达水平亦发现ISO与CTRL、ISO＋NAC与ISO组的差异均无统计学意义（P〈0．05）；鼠尾动脉血压测量结果显示在4组实验动物间差异均无统计学意义（P〉0．05）；NAC组各项指标与CTRL组大鼠无差异。结论持久兴奋BAR诱发病理性心肌肥厚机制中，GRK5可能未参与氧化应激通路对致肥厚因子的调节，有待进一步体外实验证明。
- 李锐李丹丹杨霞杨冰屈扬扬张玲
- 关键词：心肌肥厚G蛋白偶联受体激酶氧化应激N-乙酰半胱氨酸
- ERT2-Cre诱导的Rosa26R-YFP报告基因系统标记小鼠造血干祖细胞的条件和效率检测
- 2014年
- 目的 探索ERT2-Cre诱导的黄色荧光蛋白（YFP）报告基因系统标记小鼠造血干祖细胞的条件和效率.方法 通过基因型分型的方法,从Rosa26R-YFP小鼠与ERT2-Cre小鼠杂交得到的后代中,筛选出YFP及ERT2-Cre双阳性转基因杂交小鼠;采用免疫磁珠法从双阳性转基因小鼠骨髓细胞中富集c-kit＋造血干祖细胞群进行体外培养,并用不同浓度4-羟基它莫西芬（OHT）作用不同时间以诱导YFP表达;流式细胞术检测c-kit＋造血干祖细胞中YFP的表达量.结果 Rosa26R-YFP小鼠与ERT2-Cre小鼠的杂交后代共9只,采用基因型分型方法筛选出双阳性转基因小鼠5只;体外培养的c-kit＋细胞部分形态发生变化,提示存在细胞分化;流式细胞术检测到c-kit＋细胞中YFP表达量可达13.7％.结论 YFP报告基因系统在OHT诱导的ERT2-Cre作用下,能有效标记小鼠造血干祖细胞.
- 罗琦尹洁孟歆怿杨冰雷蕾孙琰李丹丹王瑾王玺何景华
- 关键词：造血系统造血干祖细胞
