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缢蛏（Sinonvacula constricta）变应原的免疫学鉴定与分子生物学研究: 随着生活水平的提高，食物过敏越来越受到人们的重视。缢蛏(Sinonvaculaconstricta)是常见的海产品，也是重要的食物变应原，对缢蛏过敏严重影响人们的生活质量。变应原是诊断和治疗变态反应性疾病的基础。因此，对...; 李启沅; 关键词：缢蛏变应原原肌球蛋白变态反应性疾病; 文献传递

缢蛏泛变应原原肌球蛋白的克隆表达、纯化及其免疫学特性研究被引量：1: 2007年; 原肌球蛋白（tropomyosin）作为泛变应原广泛存在于无脊椎动物体内，本研究从缢蛏中克隆出一个原肌球蛋白基因。缢蛏（Sinonvacula constricta）购于深圳市水产品市场。9个缢蛏过敏病人的阳性血清来自深圳市人民医院和儿童医院（经Unit CAP 检测，2级以上）。缢蛏原肌球蛋白 cDNA片段转入表达载体（pET-28a），引物序列P5：5＇-GGACATATG-GAGGCCATCAGTTGGC-3；p3：5＇-CCGGAAT-TCTTAGCCAGTCAGTTKCGC-3＇。重组原肌球蛋白基因表达按常规方法进行。目标蛋白洗脱组分透析并保存。纯化缢蛏重组原肌球蛋白进行SDS-PAGE，电转到纤维素膜上，再经常规免疫学方法鉴定。重组原肌球蛋白分离后进行酶切，混合肽进行MALDI-TOF-MS质谱鉴定。; 李荔李启沅刘志刚; 关键词：原肌球蛋白克隆表达免疫学特性缢蛏 MALDI-TOF-MS 纯化

缢蛏过敏原的分离、鉴定与纯化被引量：3: 2007年; 以磷酸盐缓冲液提取蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其抗原成分进行分析,选用缢蛏过敏患者的阳性血清进行免疫印迹,鉴定出主要与次要过敏原.用高压液相色谱(HPLC)纯化主要过敏原蛋白,鉴定其免疫活性,结果表明,缢蛏粗提液SDS-PAGE显示有18条蛋白条带,含量高的蛋白有6条,其分子量分别为110kD、55kD、42kD、38kD、35kD和28kD,其中以35kD处最为富集.经Western-Blotting鉴定,58kD蛋白为缢蛏的主要过敏原,38kD、28kD和12kD蛋白为缢蛏的次要过敏原.HPLC体积排阻纯化后得9个峰,以SDS-PAGE检测,58kD的蛋白位于第4峰,其中有一条明显的蛋白条带.将该蛋白条带用HPLC反相纯化,得到两个峰.经Western-Blotting鉴定,58kD的主要过敏原位于反相纯化的第2峰.; 李荔李启沅刘志刚余晓; 关键词：缢蛏聚丙烯酰胺凝胶电泳免疫印迹高压液相色谱

枝孢芽枝菌主要过敏原的分析与免疫、质谱鉴定被引量：2: 2008年; 目的分析并用免疫和质谱方法鉴定枝孢芽枝菌(Cladosporium cladosporioides)的主要过敏原。方法空气中暴皿获得枝孢芽枝菌菌种,经鉴定后大规模培养;用碳酸盐缓冲液提取枝孢芽枝菌蛋白,并用SDS-PAGE、Western-blotting方法鉴定出枝孢芽枝菌的主要过敏原。主要过敏原胶内酶切,再经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,所得质谱数据进入网站(http://www.matrixscience.com)Mascot检索比对。结果经过暴皿获得枝孢芽枝菌菌种,其蛋白粗提液SDS-PAGE结果显示有14个条带,含量丰富的有10个条带;Western-Blotting鉴定出18kD的蛋白阳性率达66%,为枝孢芽枝菌的主要过敏原;质谱显示枝孢芽枝菌主要过敏原与约18kD嗜冷杆菌(Psychrobacter arcticum)50S的核糖体蛋白的匹配分值最高。结论采用免疫、质谱法鉴定了枝孢芽枝菌的主要过敏原是约18kD的核糖体蛋白。; 李荔李启沅刘志刚吴海强; 关键词：MALDI-TOF-MS 核糖体蛋白真菌

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李启沅