李欢
- 作品数：19 被引量：27H指数：4
- 供职机构：河南农业大学更多>>
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- PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立被引量：9
- 2014年
- 为建立检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白抗体的ELISA方法，应用RT-PCR从腹泻仔猪样本中扩增获得了1段PEDV河南流行毒株N基因全长序列，根据对其氨基酸序列的抗原性分析结果，将N基因上2个大的抗原表位区（112～321位氨基酸）克隆至原核表达载体pET-32u，构建pET-32a-N重组质粒并转化至宿主菌BL21（DE3）中。将重组菌在37℃条件下加入IPTG进行诱导使该蛋白获得了高效表达，表达产物为融合蛋白，相对分子质量约41300。Western-blot分析表明，所表达的蛋白可与抗PEDV全病毒小鼠阳性血清发生反应。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法，抗原最佳包被量0．226ug／μL，血清最佳稀释度为1：100，二抗最佳稀释度为1：2000，待检血清n450值≥0．28判定为阳性。国内首次用该方法对临床猪血清样本进行了检测，母猪血清PEDV抗体阳性率为84．26％（166／197），仔猪血清阳性率为27．93％（31／111）。结果表明，建立的间接ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好，可用于-1盏床上PEDV抗体水平的监测和PED流行病学调查。
- 郑逢梅赵军霍金耀李欢杨霞陈陆常洪涛王新卫刘红英杜季梅姚慧霞王川庆
- 关键词：PEDVN基因原核表达抗体监测
- 河南地区猪嵴病毒分子检测和VP1基因遗传进化分析
- 小RNA病毒是无囊膜的单股正链RNA病毒,该科由12个属组成,包含一个新的嵴病毒属。目前,嵴病毒属有Aichi病毒、牛嵴病毒(Bovine Kobuvirus,BKV)和一个暂定的猪嵴病毒(Porcine Kobuvir...
- 姬郭彪赵军李欢杨霞周峰魏亚鹏王晓梦常洪涛郑逢梅陈陆王川庆
- 4株IBDV的分离鉴定及VP2基因序列分析被引量：6
- 2013年
- 通过接种鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)、DF-1细胞和琼脂扩散试验,对2010～2012年间收集于河南地区疑似鸡传染性法氏囊病病料,进行鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的分离、鉴定,得到4株IBDV;应用RT-PCR对分离株VP2基因进行扩增、克隆和序列测定后,分析比较4个分离株与参考毒株的VP2序列。结果表明:LY株属于超强毒株,与已发表的vvIBDV D6948株、OKYM株、UK661株、GZ/96株亲缘关系较近,核苷酸同源性达97.9%～98.2%;ZZ株属于强毒株,与标准强毒株52/70株亲缘关系较近,核苷酸同源性为97.8%;AY、XC株不仅具有弱毒株的特征,同时又具有变异毒株的特征,属于变异弱毒株,与标准弱毒株CU1的亲缘关系最近,核苷酸同源性达99.0%～99.3%。证明河南区域同时存在着不同毒力的IBDV毒株,病毒变异呈多态性。
- 王帅涛常洪涛李欢李伟豪燕贺王川庆姚惠霞刘红英王新卫
- 关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒株VP2基因
- PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立
- 本研究利用PCR技术扩增PEDV N基因部分片段，通过原核表达获得重组N蛋白，作为包被抗原，初步建立起检测PEDV抗体的间接ELISA，为进一步研制PEDV ELISA抗体检测试剂盒奠定了良好基础。
- 郑逢梅赵军霍金耀李欢杨霞常洪涛杜季梅王晓梦王川庆
- 关键词：核衣壳蛋白原核表达
- 文献传递
- 河南地区猪嵴病毒分子检测和VP1基因遗传进化分析
- <正>小RNA病毒是无囊膜的单股正链RNA病毒,该科由12个属组成,包含一个新的嵴病毒属。目前,嵴病毒属有Aichi病毒、牛嵴病毒(Bovine Kobuvirus,BKV)和一个暂定的猪嵴病毒(Porcine Kobu...
- 姬郭彪赵军李欢杨霞周峰魏亚鹏王晓梦常洪涛郑逢梅陈陆王川庆
- 文献传递
- 鸭源鸡杆菌毒素蛋白GtxA表达和间接ELISA方法的建立及初步应用被引量：3
- 2015年
- 扩增鸡杆菌毒力基因gtxA全长序列,对GtxA蛋白的抗原性进行预测。将gtxA基因的部分抗原表位区所处片段克隆至pGEX-6P-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内表达。重组菌在37℃条件下经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果表明该蛋白高效表达,表达蛋白相对分子质量约为50 000,以可溶性蛋白和包涵体蛋白2种形式存在。Western blotting分析表明,获得的蛋白具有良好的反应原性和特异性。以纯化的GtxA蛋白为包被抗原建立了抗GtxA间接ELISA方法:抗原最佳包被质量为0.403μg/孔,一抗血清的最佳稀释度为1∶160,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2 000,阳性判定标准为血清D450≥0.28。应用建立的检测方法对680份临诊鸡血清进行检测,结果显示河南省不同地区鸡群鸡杆菌感染阳性率为19.06%(129/680)。结果表明,该方法可有效检测鸡杆菌血清抗体。
- 李欢杨霞赵军魏亚鹏陈陆王新卫常洪涛李永涛刘红英王川庆
- 关键词：间接ELISA抗体监测
- 禽支气管炎病毒Jin-13分离株在SPF鸡体内的动态分布
- 本研究旨在探究禽传染性支气管炎病毒(IBV)感染SPF鸡后在体内的动态分布.针对IBV流行毒Jin-13株N基因设计并合成一对引物,建立了检测IBV SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.人工感染90日龄SPF鸡l...
- 李欢王川庆杨霞赵军陈陆王新卫常洪涛李永涛刘红英王泽霖
- 关键词：传染性支气管炎病毒SPF鸡
- 禽支气管炎病毒Jin-13分离株在SPF鸡体内的动态分布
- 本研究旨在探究禽传染性支气管炎病毒(IBV)感染SPF鸡后在体内的动态分布。针对IBVJin-13毒株N基因设计并合成一对引物,建立了检测IBV SYBR Green I荧光定量PCR方法。人工感染90日龄SPF鸡1、4...
- 李欢杨霞赵军常洪涛王晓梦刘红英张秀平王新卫王川庆
- 关键词：传染性支气管炎病毒SPF鸡
- 文献传递
- 猪链球菌血清2型环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为了建立快速、灵敏的猪链球菌血清2型(SS2)LAMP检测方法,根据GenBank登录的SS2特异的荚膜多糖(cps2 H)基因序列作为检测靶标,在其序列的保守区域设计LAMP引物,利用参考菌株S735基因组DNA为模板进行扩增,优化了LAMP的反应条件和反应体系,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果,利用建立的LAMP方法对SS2进行扩增,扩增产物显色呈现阳性反应,电泳出现阶梯状条带,最低检测量为0.186fg/μL模板DNA,比常规PCR高1 000倍;且与其他常见的细菌无交叉反应。结果表明,建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速和重复性强等优点,适用于猪链球菌病的实验室快速检测。
- 张九州李欢杨霞赵军陈陆常洪涛程海卫郑逢梅王川庆迪丽拜尔.阿木提
- 关键词：环介导等温扩增技术
- PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立
- 猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种接触性肠道传染病,临床上以猪的急性肠炎、...
- 郑逢梅赵军霍金耀李欢杨霞常洪涛杜季梅王晓梦王川庆
