李金克
- 作品数：16 被引量：228H指数：7
- 供职机构：北京林业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 胡杨悬浮细胞原生质体游离及质膜单离子通道测定(英文)被引量：4
- 2002年
- 该文以胡杨 (Populuseuphratica)悬浮细胞为材料 ,利用 1 0 %纤维素酶“onozuka”R 10、0 0 1%果胶酶Y 2 3、0 15 %离析酶R 10和 0 1%半纤维素酶的混合酶液消化细胞壁 ,得到原生质体 .并利用膜片钳细胞贴附技术分别测到质膜内向和外向单通道电流 .通道电流在不同水平上变化 ,表明并非只有一种类型的通道开放 .
- 陈少良戴松香李金克王沙生Andrea PolleAloys Hüttermann
- 胡杨PeAPY1和PeAPY2调控拟南芥耐盐机制研究被引量：4
- 2017年
- 本文研究了胡杨apyrase基因(Pe APY1和Pe APY2)对植物耐盐性的影响。以Pe APY1和Pe APY2过表达拟南芥、拟南芥Atapy1和Atapy2突变体、野生型(WT)拟南芥及空载体(VC)为实验材料,研究盐胁迫条件下的植物根长、相对电导率、细胞活力、H_2O_2水平、eATP浓度、抗氧化酶活性的变化。研究结果显示:低盐浓度(50 mmol/L NaCl)对拟南芥各基因型的生长和生理生化指标没有显著影响;而高盐浓度(100 mmol/L NaCl)抑制了各株系的根长生长、细胞活力和抗氧化酶(超氧化物歧化酶/SOD、抗坏血酸过氧化酶/APX、过氧化氢酶/CAT)活性,却提高了相对电导率、H_2O_2水平和eATP浓度。但与Atapy突变体株系相比较,Pe APY过表达株系受高盐胁迫的影响较小。主要是由于Pe APY1/2的过表达提高了apyrase酶活,下调了eATP浓度及其诱发的活性氧水平,同时,过表达株系还通过保持抗氧化酶活性来抑制H_2O_2的水平,从而降低活性氧及其对膜脂的过氧化,保持了膜的稳定性、细胞活力和生长,最终提高了植物耐盐性。
- 邓佳音张艳丽张一南赵瑞李金克周晓阳刘香芬陈少良
- 关键词：盐胁迫膜透性胞外ATPH2O2
- 用GPC-HPLC法测定植物组织中的细胞分裂素被引量：1
- 2012年
- 为了探讨和开发凝胶渗透色谱(GPC)--高压液相色谱(HPLC)法定量测定植物组织中的细胞分裂素,以群众杨叶片和烟草组培苗为试验材料,根据细胞分裂素标准品回收率的测定,得出最佳试验方法:80%甲醇研磨后4℃浸提24h,抽滤,滤液离心,上清液加2滴氨水,40℃浓缩至干,用含3%甲醇的CH2Cl2溶解样品,经0.22μm滤膜过滤后过GPC纯化,最后HPLC外标曲线法定量。用液相--质谱联用仪(LC-MS)对所检测的细胞分裂素定性。测试表明:群众杨叶片中玉米素鲜质量含量439.5018ng/g,烟草叶片中玉米素鲜质量含量为617.9957ng/g。在植物样品中检测到的激动素(鲜质量含量49.4739～124.7124ng/g)应为外源引入。研究结果表明,GPC纯化植物细胞分裂素后用HPLC定量是可行的。
- 李金克邓文红陈少良
- 关键词：细胞分裂素凝胶渗透色谱
- 盐胁迫条件下杨树盐分与甜菜碱及糖类物质变化被引量：96
- 2001年
- 以抗旱耐盐性强的胡杨 (Populuseuphratica)和非抗盐的群众杨 (P .popularis‘35 - 44’)为实验材料 ,研究了盐胁迫条件下盐分与甜菜碱、还原糖、蔗糖以及水溶性糖等细胞相容溶质的动态变化。两种杨树在盐处理期间表现出明显差异 :群众杨下部叶片首先表现出盐害症状 ,处理后两周苗木上部叶片也出现盐害并脱落。而胡杨在试验期间仅下部叶片发黄脱落 ,盐处理 1 5天后落叶量仅为 1 6%。群众杨盐害症状的出现主要是由叶片中盐离子的大量累积所致。与之比较 ,胡杨拒吸Na+的能力及控制Cl- 转运的能力均优于群众杨。另外 ,胡杨的耐盐性强于群众杨也与其有机溶质的变化有关。受到盐胁迫后胡杨根叶中甜菜碱浓度显著提高 ,在处理后 1 5天达到最高值 ,特别是叶片中甜菜碱的浓度提高了 2 4 3倍 ,达到 1 899.8μmol/L ,根中甜菜碱含量也增加了 9倍。此外 ,盐处理后胡杨叶和根中的还原糖、水溶性糖和蔗糖含量均呈明显上升趋势 ,分别在第 4天和第 1 5天达到峰值。与胡杨相反 ,耐盐性弱的群众杨在盐胁迫期间 ,叶中甜菜碱和糖含量并无显著提高 ,根中糖分水平还明显降低。由此可以得出结论 ,胡杨渗透调节能力高于群众杨 。
- 陈少良李金克毕望富王沙生
- 关键词：盐胁迫群众杨甜菜碱水溶性糖盐分
- 不同营养条件下杨树与刺槐混交植株含氮量的研究被引量：1
- 1997年
- 为探讨植物根系吸收过程中氮素亏缺与补给及其影响，１９９４～１９９５年，通过沙培盆栽试验，研究了２ａ生杨树、刺槐及两者混植在全营养、缺氮、缺钾和缺磷条件下根、茎、叶中氮素营养的变化特性。结果表明：刺槐根含氮量２％～３％，刺槐茎、叶以及杨树根、茎、叶含氮量均为０．１％～１％，刺槐和杨树的含氮量均按根＞茎＞叶根面土分布。正常营养条件下，混交杨根面土含氮量约等于混交槐根面土含氮量＞纯槐根面土含氮量＞纯杨根面土含氮量。在极度缺乏Ｎ素时，植物生长受到抑制，但与正常植株相比植物的氮素百分含量并不低，杨树中氮素积累量由０．５１ｇ下降到０．０７９ｇ，刺槐中Ｎ素积累量由１．９４ｇ下降到１．２７ｇ。在极度缺乏Ｐ或极度缺乏Ｋ时，植物中氮素积累量受其影响都有不同程度的下降。杨树与刺槐混交，能够改良土壤中氮素的分布状况，提高杨树根、茎、叶中氮素含量，但２ａ生的混交杨在干重方面并不优于纯林杨，在全营养或缺磷条件下混交杨中氮素积累量高于纯林杨。
- 李金克魏刚王沙生王天华
- 关键词：杨树刺槐混交氮素积累量
- 过表达胡杨PeAnn1负调控拟南芥的抗旱性被引量：2
- 2020年
- 【目的】Annexins是原核生物和真核生物中普遍存在的一大类膜联蛋白家族,能够参与氧化胁迫、热胁迫、干旱胁迫和盐胁迫等许多胁迫响应过程。但在胡杨中,对膜联蛋白家族在抗逆性中的作用情况还缺乏了解。本文研究胡杨Anneixn1在植物耐受渗透胁迫和干旱中的作用。【方法】本研究对渗透胁迫诱导的PeAnn1基因表达进行检测,对Pe Ann1进行相关生物信息学分析,与毛白杨、拟南芥、大豆和水稻膜联蛋白基因家族成员进行序列比对和系统进化树分析,以过表达PeAnn1拟南芥(PeAnn1-OE1和PeAnn1-OE2)、Annexin1突变体(atann1)和野生型拟南芥(WT)为实验材料,利用不同浓度甘露醇处理(0、150、200、250、300 mmol/L)模拟渗透胁迫,并对各株系进行土壤干旱和复水处理,测定了不同处理株系的萌发率、根长、叶绿素含量及荧光参数、过氧化氢含量、抗氧化酶活性和基因表达等指标,分析了不同基因型拟南芥的抗旱性。【结果】短期渗透胁迫处理诱导了胡杨叶片中PeAnn1基因的上调表达。PeAnn1基因序列与毛白杨PtAnn1相似度最高,与PtAnn1亲缘关系较近。在甘露醇培养基上,过表达PeAnn1拟南芥的生存率和根长生长受到明显的抑制,且随着甘露醇浓度的升高,差异显著(P <0.05)。土壤干旱8 d后测得的转基因拟南芥的叶绿素SPAD值、PSⅡ最大光量子效率(F_v/F_m)、实际光合量子产量(ΦPSⅡ)和相对电子传递速率(ETR)均显著低于野生型和突变体(P <0.05)。复水后,PeAnn1转基因拟南芥光合参数的恢复程度也较低。在渗透胁迫下,转基因植株抗氧化物酶SOD、POD、CAT的活性以及编码基因的表达量显著低于野生型和突变体,不能清除过多活性氧,导致氧化伤害。【结论】以上结果表明,过表达PeAnn1降低了拟南芥对水分逆境的抗性。
- 武霞张一南赵楠张莹赵瑞李金克周晓阳陈少良
- 关键词：膜联蛋白抗旱性转基因拟南芥
- GC-MS内标法定量分析植物组织中的JA、IAA和ABA被引量：11
- 2010年
- 提出了利用气相色谱-质谱联用仪同时定量测定植物组织中茉莉酸(JA)、吲哚-3-乙酸(IAA)和脱落酸(ABA)的方法。实验以欧洲灰杨叶片为材料,在用80%冷甲醇提取激素时,一并加入ABA、IAA和JA的内标(D3-ABA300ng,13C6-IAA60ng和DHJA80ng),激素提取液浓缩至水相,调pH2.5～3.0后经乙酸乙酯萃取、Sep-PakC18小柱纯化,甲酯化后,GC-MS定量测定ABA、JA。IAA经甲酯化后再经TMS化(三甲基硅烷化),用GC-MS定量测定。经检测:盆栽欧洲灰杨叶组织中脱落酸含量为120.170～128.771ng/g(鲜质量),茉莉酸含量为1.697～6.974ng/g(鲜质量),吲哚乙酸含量为4.990～14.776ng/g(鲜质量);脱落酸含量最高,其次是吲哚乙酸,茉莉酸含量最低。
- 李金克陈华君陈少良
- 关键词：气相色谱-质谱联用仪内标法茉莉酸吲哚乙酸
- 胡杨PeCSP1过表达负调控拟南芥耐盐性
- 2023年
- 【目的】冷激蛋白(CSPs)是普遍存在于原核和真核生物中的一类蛋白,能够参与冷、干旱和盐等非生物胁迫。在胡杨中,冷激蛋白的抗逆功能还少有研究。本文旨在通过研究胡杨PeCSP1在植物耐盐性中的作用,进一步揭示植物耐盐的生理与分子机制。【方法】参照NCBI数据库信息,使用primer5设计引物,利用Mega7软件进行多重序列比对及进化树分析,利用荧光定量PCR检测基因表达量。以转基因株系PeCSP1(OE1、OE2),野生型,转空载体为材料,对各基因型拟南芥进行不同盐浓度处理,从生理生化及分子生物学角度研究胡杨PeCSP1在盐胁迫中的响应机制。【结果】胡杨PeCSP1与毛果杨PtCSP1蛋白序列相似度高,亲缘关系较近。在短期盐胁迫下,胡杨叶片PeCSP1基因下调表达。在NaCl(75、100、125 mmol/L)处理后,过表达PeCSP1拟南芥植株种子萌发率和根长的下降幅度高于野生型(WT)和转空载体(VC),而且转基因拟南芥根细胞中Na^(+)含量显著高于WT和VC。盐胁迫下,WT和VC抗氧化酶(SOD、POD、CAT)的活性显著上升,酶活提高的幅度明显高于OE1、OE2。在土培条件下,盐处理12 d后,转基因株系的最大光量子效率未有明显下降,但相对电子传递效率、实际光合量子产量和叶绿素含量受到的抑制作用高于WT和VC。【结论】过表达胡杨PeCSP1负调控拟南芥耐盐性。
- 刘晓婧温馨赵瑞陈少良赵楠李金克周晓阳尧俊
- 关键词：冷激蛋白耐盐性
- 红松种子层积催芽处理和萌发过程中内源GA_S和IAA含量的变化被引量：14
- 1997年
- 采用高效液相色谱纯化、气质联用仪定性定量分析的方法，研究了红松种子在萌发过程中ＧＡＳ和ＩＡＡ含量的变化，并与萌发率相比较。结果表明：低温层积过程中ＩＡＡ、ＧＡ１、３、９含量均先下降后升高，呈“Ｖ”字型变化曲线，其中层积１１周ＧＡ１、３的含量超过层积０周的水平。室温干藏过程中，ＧＡ１、３、９含量均呈下降趋势。低温层积后萌发过程中，ＧＡ３、９、４呈上升势态，ＩＡＡ在萌发第５天有一个极大的上升高峰。室温干藏后萌发过程中ＩＡＡ、ＧＡ１、３、４、７、９含量均呈下降势态。
- 李金克金幼菊陈华君王沙生
- 关键词：萌发过程低温层积萌发率
- 反相HPLC离子对色谱法测定植物组织中的甜菜碱被引量：34
- 2000年
- 开发了一种用反相HPLC离子对色谱法测定植物组织中甜菜碱的方法。此法的特点是准确、灵敏、简便、费用低。实验分别以胡杨 (PopuluseuphraticaOliv .)悬浮细胞 ,胡杨和群众杨 (P .‘popularis 35 44’)苗木的叶、根组织为材料。样品提取液经浓缩后依次通过Dowex 1× 8阴离子交换树脂柱和Dowex 5 0W× 2阳离子交换树脂柱进行纯化。最后用NH4 OH洗脱阳离子交换树脂柱 ,洗脱液浓缩干后用流动相溶解。样品用C18反相色谱柱进行分离。流动相为 5 0mmol/LKH2 PO4 (pH 4.45 )和 0 .1%PICB_8(辛烷磺酸 ) ,流速 0 .7mL/min ,192nm波长测定。此色谱条件能使甜菜碱与其他组分很好地分离 ,甜菜碱的保留时间为 6 .3min。甜菜碱的加样回收率达到 85 %～ 96 %。经测定 ,杨树根、叶组织中甜菜碱含量为 0 .0 6～ 0 .75 μg/g鲜重 ,叶中甜菜碱浓度高于根。胡杨悬浮细胞经盐处理后甜菜碱浓度有所增加 ,从 0 .45提高到 0 .77μg/g鲜重。
- 陈少良毕望富李金克王沙生
- 关键词：甜菜碱植物组织抗逆生理
