杨娜
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Notch1信号通路对异基因造血干细胞移植后损伤肝细胞的修复作用研究
- 目的:探讨Notch1信号通路对异基因造血干细胞移植(HSCT)后损伤肝细胞的修复作用.方法:将小鼠经致死剂量全身照射(TBI)后随机分为单纯照射预处理组及异基因造血干细胞移植组,正常小鼠为对照组.移植当天为0天,分别于...
- 夏园乔建林褚培培秘红岭杨娜曾令宇
- 长链非编码RNA0610009 E02 Rik／Notch1腺病毒载体构建及其在原代肝细胞中的表达被引量：1
- 2015年
- 目的构建长链非编码RNA-0610009 E02 Rik（长链非编码RNA-0610009 E02 Rik，简称Rik）重组腺病毒载体，制备一定滴度含Rik基因的重组腺病毒，为后续研究Rik的生物学功能提供实验工具。方法①应用分子克隆技术以Rik的cDNA为模板，PCR扩增，酶切。将酶切后的目的基因连接到腺病毒穿梭质粒GV315上，产生0610009E02Rik腺病毒表达载体，连接好的产物转化感受态大肠埃希菌进行克隆，对阳性克隆进行酶切鉴定并测序；②重组腺病毒穿梭质粒和辅助包装质粒pBHG在人胚胎肾293细胞中包装、扩增、纯化并测定病毒滴度；③将构建好的腺病毒感染原代肝细胞．Real．timePCR检测原代肝细胞内Rik的相对表达水平。结果①成功构建Rik重组腺病毒穿梭载体；②重组病毒经扩增、纯化，最终滴度测定约为2×10^10PFU／ml：③Real-timePCR检测过表达组肝细胞内Rik的表达量约为对照组的2440＋0．36倍（P〈0．05），差异有统计学意义。结论构建含Rik基因的腺病毒载体，在小鼠原代肝细胞内成功实现了Rik基因的表达上调，为后续开展有关Rik生物学功能及分子机制研究奠定基础。
- 秘红岭杨娜夏园乔建林李小莉陈朝褚培培姚海娜陈翀徐开林曾令宇
- 关键词：长链非编码RNA重组腺病毒肝细胞
- 竞争抑制0610009E02Rik长链非编码RNA重组腺病毒穿梭载体的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的 构建可竞争抑制肝细胞内0610009E02Rik长链非编码RNA（lncRNA）的重组腺病毒穿梭载体,为探索0610009E02Rik/Notch1在肝静脉闭塞病（HVOD）肝细胞损伤修复中的作用提供有效实验方法.方法 采用基因组DNA提取试剂盒对截取的C57BL/6小鼠尾进行基因组DNA的提取,通过PCR扩增出0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠的1 000 bp基因序列,并连接入经BamHⅠ/Nhe Ⅰ双酶切后的腺病毒穿梭载体GV359;竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与辅助包装质粒pBHG共转染HEK293细胞,并对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒进行包装、扩增,采用氯化铯（CsCl）不连续密度梯度离心与连续密度梯度离心2个步骤对重组腺病毒进行浓缩纯化,并对重组腺病毒滴度进行测定;测定不同感染复数（MOI）竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35的感染效率,并采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blotting对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35与同步培养的对照肝细胞中竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段、Notch1 mRNA及0610009E02Rik lncRNA相对表达水平及其蛋白表达水平,并进行统计学分析.结果 ①经基因序列比对分析发现0610009E02Rik与Notch1的第34个外显子存在分子量为1 000 bp的重叠序列,依据0610009E02Rik与Notch1基因序列设计含BamH Ⅰ/Nhe Ⅰ酶切位点特异性引物,通过PCR扩增出片段长度为1 000 bp的0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠序列的竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段,DNA测序结果显示竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与理论预期序列构建成功.②将竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体转染HEK293细胞后第12天,约90％细胞出现细胞病变（CPE）,收集细胞获取病毒液.浓缩纯化病毒液经梯度稀释在感染HEK293细胞后第10天,于显微镜下观察稀释梯度1∶ （10～1010）均出现
- 杨娜陈翀秘红岭李小莉陈朝褚培培夏园姚海娜徐开林曾令宇
- 关键词：肝细胞
- 肝细胞Notch1基因敲除小鼠模型的建立
- 2015年
- 目的繁育和鉴定Notch 1基因敲除小鼠。方法用B6.Notch 1flox/flox和B6.Alb-Cre转基因小鼠进行饲养和杂交;将繁育出的第1代小鼠再进行相互交配,得到第2代小鼠。通过PCR鉴定出基因型为B6.Notch 1flox/flox.Alb-Cre的第2代小鼠。采用Western blot法检测Notch 1蛋白在肝脏中有无表达。结果两种转基因小鼠繁殖产生的第2代小鼠基因型符合孟德尔遗传定律,可通过该方法获得较多的B6.Notch 1flox/flox.Alb-Cre小鼠。该基因型小鼠肝脏中不表达Notch 1蛋白。结论应用Cre-loxp系统可以成功地敲除小鼠Notch 1基因。
- 陈朝杨娜吴进燕褚培培夏园姚海娜曾令宇
- 关键词：NOTCH基因敲除
- 肝静脉闭塞病及其他疾病中肝细胞损伤机制的研究进展
- 2014年
- 肝脏是人体重要的解毒器官，当机体受到外界因素影响时，肝脏即发挥其解毒功能，当超出其解毒能力时，则可导致肝脏结构及功能损伤。肝静脉闭塞病（HVOD）是造血干细胞移植（HSCT）后常见并发症之一，移植预处理方案所致的肝窦内皮细胞及肝细胞损伤是HVOD的始发因素，其中肝细胞损伤程度决定HVOD患者的肝功能恢复情况。另外，其他多种疾病，如药物性肝病、病毒性肝炎、爆发性肝炎等，也严重影响肝脏正常生理结构及功能。笔者主要从自由基的产生及脂质过氧化反应、线粒体损伤、炎性细胞浸润及炎性细胞因子的产生3个方面总结不同肝脏疾病中肝细胞损伤机制，为临床HVOD及其他疾病的肝细胞损伤的治疗和预防提供新的策略。
- 杨娜曾令宇
- 关键词：肝细胞肝炎肝静脉闭塞性疾病
- Notch1信号通路对异基因造血干细胞移植后损伤肝细胞的修复作用研究
- 目的 探讨Notch1信号通路对异基因造血干细胞移植(HSCT)后损伤肝细胞的修复作用.方法 将小鼠经致死剂量全身照射(TBI)后随机分为单纯照射预处理组及异基因造血干细胞移植组，正常小鼠为对照组.移植当天为0天，分别于...
- 夏园乔建林褚培培秘红岭杨娜曾令宇
