梁璇
- 作品数:10 被引量:18H指数:3
- 供职机构:广西大学更多>>
- 发文基金:国家高技术研究发展计划广西壮族自治区科技攻关计划更多>>
- 相关领域:生物学化学工程农业科学轻工技术与工程更多>>
- 产邻苯二酚工程菌的构建及发酵条件的优化
- <正>从实验室保存的一株能高效降解苯胺的不动杆菌中克隆到完整的苯胺双加氧酶基因簇,序列分析表明该基因簇包含6个完整的ORF,全序列与已报道的不动杆菌YAA的苯胺双加氧酶基因簇在氨基酸水平上有较高的同源性。将该基因簇连接于...
- 张宗武申佩弘梁璇张敏李俊芳武波
- 关键词:苯胺邻苯二酚
- 文献传递
- 基因工程菌Pseudomonas sp. B4的构建及其产邻苯二酚发酵条件的初步研究被引量:1
- 2008年
- 利用PCR技术以Pseudomonas sp.B3-1基因组DNA为模板,扩增出2.9kb编码苯甲酸双加氧酶基因簇benABC。将该基因簇连接于pLAFRJ载体,电转化至E.coliDH5α,再通过三亲本结合法导入野生菌株Pseudomonas sp.B3-1中,得到了一株邻苯二酚产量提高的基因工程菌,命名为Pseudomonas sp.B4,在相同发酵条件下,工程菌Pseudomonas sp.B4的邻苯二酚产量达到0.5mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp.B3-1提高了17.5%。对工程菌Pseudomonas sp.B4进行发酵条件优化表明,当苯甲酸钠浓度为6.0g/L,聚蛋白胨浓度为2.5g/L,温度为32℃以及pH值为6.0时,工程菌在200r/min旋转摇床发酵36小时后,邻苯二酚产量达到0.7mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp.B3-1提高了75%。
- 唐咸来熊建文梁璇申佩弘武波
- 关键词:假单胞菌苯甲酸钠邻苯二酚
- 产邻苯二酚工程菌的构建及发酵条件的优化被引量:4
- 2006年
- 从实验室保存的一株能高效降解苯胺的不动杆菌中克隆到完整的苯胺双加氧酶基因簇,序列分析表明该基因簇包含6个完整的ORF,全序列与已报道的不动杆菌YAA的苯胺双加氧酶基因簇在氨基酸水平上有较高的同源性。将该基因簇连接于pLAFR6载体,电转化至E.coli,构建了该基因簇的工程菌。发酵条件优化表明,在苯胺浓度0.5mg/ml,采用pH7.0的LB培养基,E.coliDH5α为宿主菌,于37℃培养,接种量为3%的条件下,邻苯二酚产量在20h达到0.546mg/ml,底物分子水平转化率可达92.4%。
- 张宗武梁璇张敏李俊芳武波
- 关键词:苯胺邻苯二酚
- 基因工程菌Pseudomonas sp.B3-1的构建及其产邻苯二酚发酵条件的优化
- 本文主要利用实验室保存的一株能够降解苯甲酸钠生产邻苯二酚的野生菌株Pseudomonas sp.B-1来构建高产邻苯二酚的基因工程菌,并对工程菌产邻苯二酚的发酵条件进行了初步优化等方面的研究。
根据Genban...
- 梁璇
- 关键词:基因工程菌邻苯二酚发酵条件优化技术
- 文献传递
- 碱性土壤基因组DNA的分离纯化和基因文库的构建被引量:6
- 2004年
- 直接从广西南宁市凤凰纸业排污沟碱性土壤样品中抽提和分离纯化混合基因组 DNA,所获得DNA的产量为每克土壤样品 1 0~ 3 0μg。采用限制性内切酶 Eco R1酶处理后 ,构建了以 p GEM-3 Zf(+)为载体的 DNA部分文库。文库的容量为 2 3 65 0个转化子 ,外源片段 DNA平均大小为 3 .2 kb。建库效率为每克环境样品获得 60 0 0个左右的含 1~ 1 5 kb外源随机插入片段的克隆。通过 DNA序列测定和同源性比较 ,对从文库随机调取的 1 6个转化子序列进行分析 ,发现 1 3个外源插入片段包含序列尚未确定的 DNA片段。
- 蒋承建隆文杰梁璇孙栋武波
- 关键词:碱性土壤基因组纯化基因文库
- 碱性土壤基因组DNA的分离纯化和基因文库的构建
- 直接从广西南宁市凤凰纸业排污沟碱性土壤样品中抽提和分离纯化混合基因组DNA,所获得DNA的产量为每克土壤样品10~30g。采用限制性内切酶EcoR1酶处理后,构建了以pGEM—3Zf(+)为载体的DNA部分文库。文库的容...
- 蒋承建隆文杰梁璇孙栋武波
- 关键词:克隆
- 文献传递
- 碱性土壤微生物基因的克隆和多样性分析被引量:8
- 2006年
- 从碱性土壤样品中直接抽提和分离宏基因组DNA,首先构建了包含5562个阳性克隆的碱性土壤16SrDNA文库,随机抽取9个克隆测序后构建的系统进化树表明了碱性土壤环境微生物种群基因的多样性。纯化土壤宏基因组DNA后采用EcoRⅠ酶部分酶切处理,我们又构建了以pGEM-3Zf(+)为载体的DNA部分文库AL01。AL01文库包含23650个克隆,随机插入载体的外源DNA片段平均大小为3.2kb左右,DNA文库的总容量为75.68Mb。建库效率为从每克环境样品中获得6000个左右的含随机外源DNA片段插入载体的克隆。采用酶活筛选策略,我们从AL01文库中筛选到一个编号为pGXAA2011的阳性克隆携带有一个完整的碱性蛋白酶基因。蛋白酶活性检测其酶活作用最佳温度为40℃,最适作用pH值为9.5。另外,我们还克隆和表达了一个新型-葡萄糖苷酶基因unglu01,该基因和现有数据库中的-葡萄糖苷酶基因没有任何DNA或者氨基酸水平的同源性。将unglu01基因的ORF与表达载体pETBlue-2连接后导入宿主菌株Tuner(DE3)pLacI中,该重组表达克隆在含柠檬酸高铁铵和七叶苷的LA平板上表现清晰的-葡萄糖苷酶活性,SDS-PAGE电泳可以检测到29kDa大小的目的蛋白。
- 胡婷婷蒋承建梁璇隆文杰武波
- 关键词:宏基因组文库未培养微生物碱性蛋白酶Β-葡萄糖苷酶
- 用基因工程菌转化苯胺产邻苯二酚的方法
- 本发明公开了一种利用苯胺双加氧酶基因工程菌AC03转化苯胺生成邻苯二酚的方法,包括步骤:1)构建基因组文库,得到阳性克隆,由此获得一个完整的苯胺双加氧酶基因簇;2)将该基因簇连接于pLAFR6载体上,并将pGXA69重组...
- 武波张宗武张敏李俊芳梁璇毕洪凯
- 文献传递
- 用基因工程菌转化苯胺产邻苯二酚的方法
- 本发明公开了一种利用苯胺双加氧酶基因工程菌AC03转化苯胺生成邻苯二酚的方法,包括步骤:1)构建基因组文库,得到阳性克隆,由此获得一个完整的苯胺双加氧酶基因簇;2)将该基因簇连接于pLAFR6载体上,并将pGXA69重组...
- 武波张宗武张敏李俊芳梁璇毕洪凯
- 文献传递