段志刚 作品数:25 被引量:62 H指数:4 供职机构: 河南农业大学 更多>> 发文基金: 河南省重大公益性科研项目 国家科技支撑计划 河南省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 更多>>
猪源肠球菌多重PCR诊断方法的建立及应用 肠球菌不但是引起医院内住院病人的心内膜炎、腹膜炎、尿道炎和脑膜炎等主要原因,近年来对猪、羊、鸡和鸭等动物的感染也越来越多。肠球菌种虽已增加到41个种,但引起人和动物感染的主要是粪肠球菌和屎肠球菌。在肠球菌致病的毒力因子中... 段志刚关键词:毒力基因 致病机理 文献传递 动物源大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的初步研究 被引量:4 2011年 为建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157∶H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计2对特异引物,分别建立针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件,进一步建立可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法,并进行特异性和灵敏性试验,同时还初步应用到临床样品的检测中。结果表明:所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fliC基因(247 bp)的特异性片段,特异性结果显示其他非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性;灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102cfu/mL。通过试验初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157∶H7提供了一种简单、灵敏的试验方法,可用于临床动物携带大肠杆菌O157∶H7的分子流行病学调查。 陈雅君 胡慧 段志刚 崔保安 张龙现 孟振北 彭新然 陈丽颖 王亚宾关键词:多重PCR 动物源大肠埃希菌O157∶H7多重PCR检测方法的初步研究 被引量:1 2011年 【目的】建立一种快速检测动物源大肠埃希菌O157∶H7及其毒力基因的多重PCR方法。【方法】以编码大肠埃希菌O157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因,设计3对特异性引物,优化并建立检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,对其特异性和敏感性进行检测,最后对其临床应用效果进行了初步验证。【结果】成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠埃希菌O157∶H7rfbE、fliC和hylA基因的多重PCR方法,该方法特异性较好,灵敏度较高,可达2.0×102CFU/mL。【结论】初步建立了检测动物源大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,该方法可用于携带大肠埃希菌O157∶H7临床动物的分子流行病学调查。 胡慧 段志刚 崔保安 张龙现 陈雅君 陈丽颖 张红英 彭新然 孟振北 王亚宾关键词:多重PCR 动物源大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的初步研究 目的: 建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法。方法: 根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157:H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计两对特异引物,分别建立了针对rf... 陈雅君 段志刚 魏战勇 王亚宾 崔保安 张龙现 陈丽颖 胡慧关键词:多重PCR 文献传递 一种肠球菌属及毒力基因多重PCR检测引物及方法 本发明的技术方案公开了一种肠球菌属及毒力基因多重PCR检测引物,它包括肠球菌属引物的序列、聚集物质引物的序列和溶血素引物的序。本发明建立了一种快速准确鉴定肠球菌属及其主要毒力基因的多重PCR方法。本方法特异性高;敏感性实... 王亚宾 胡慧 孟振北 段志刚 陈丽颖 胡清林 耿鑫肠球菌主要毒力基因多重PCR测定方法的建立 根据GenBank公布的基因序列,分别针对肠球菌属及其毒力基因cylA、esp和AS设计合成了4对引物。通过改进模板DNA提取方法和优化反应条件,建立了可以同时测定肠球菌和其携带的3种主要毒力基因的多重PCR方法。经过对... 王亚宾 陈丽颖 胡慧 段志刚 崔保安关键词:肠球菌属 毒力基因 多重PCR 文献传递 猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株的遗传变异分析 被引量:2 2010年 用间接免疫荧光试验和RT-PCR方法,从河南省不同地区送检的疑似猪繁殖与呼吸综合征的病料中分离到16株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),扩增分离株的ORF5基因并进行序列测定、比较分析和绘制进化树.结果表明,16株分离株之间的氨基酸序列同源性为88.1%~99,8%;与欧洲型LV株和美洲型VR-2332株的氨基酸序列同源性分别为54.0%~54.5%和88.1%~99.2%,证明分离的16株病毒均为美洲型.用DNAstar等软件对16株分离株推导的氨基酸序列作进一步比较分析,发现16株分离株ORF5基因编码的gp5蛋白的抗原区、潜在疏水区、跨膜区和N-糖基化位点分布均有差异,与其它美洲型毒株也存在一定程度的差异,说明在河南流行的PRRSV存在明显的遗传差异性. 范旭 李伟娟 刘玉松 徐红运 张凤华 赵琳 段志刚 夏平安 崔保安关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 克隆 猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR快速鉴定方法的建立 被引量:6 2010年 粪肠球菌和屎肠球菌是引起猪感染发病的优势肠球菌种,以肠球菌的16 S rRNA基因设计属特异性引物,利用SodA基因多态性设计种特异性引物,同时优化反应条件,建立了能同时测定猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR方法。通过对来源于猪的临床菌株、粪便菌株和鲜猪肉菌株进行测定,均能成功扩增出属特异性片段和种特异性片段。经过与快速生化鉴定试剂盒(Vitek-32)和16 S rRNA测序方法比较,多重PCR与16 S rRNA测序方法对猪的临床菌株、粪便菌株和鲜猪肉菌株的鉴定符合率100%;与Vitek-32鉴定符合率为62.3%,其中,与分离于感染猪的临床菌株符合率仅有46.7%,特别是感染猪的屎肠球菌,符合率仅为22.3%。 王亚宾 陈丽颖 胡慧 段志刚 崔保安关键词:肠球菌 多重PCR RRNA VITEK-32 零售鲜猪肉中肠球菌的鉴定与毒力基因检测 被引量:3 2009年 2007-2009年间,分别从郑州市5个农贸市场鲜猪肉销售摊点采集了52份猪肉样品,经细菌分离得到30株疑似肠球菌,通过细菌形态学和培养特性的观察,并采用Vitek-32全自动细菌鉴定系统对其进行分析,最终鉴定为肠球菌,其中粪肠球菌(E.faecalis)16株、屎肠球菌(E.faecium)4株、铅黄肠球菌限casseliflavus)6株、鸟肠球菌(E.avium)2株、鹑鸡肠球菌(E.gallinarum)2株。药敏试验结果表明:肠球菌对呋喃妥因、万古霉素、替考拉宁和氨苄青霉素有较高的敏感性,对四环索、卡那霉素和红霉索的敏感性较低。经过对肠球菌6种公认的毒力基因cy1A、ge1E、efaA、ace、AS和esp的检测,发现分离株携带毒力基因不同,7号粪肠球菌携带6种,而12号屎肠球菌则全部为阴性,其它菌株则携带1~5种不等的毒力基因。 段志刚 王亚宾 胡惠 金钺 崔保安关键词:猪肉 肠球菌 生化鉴定 毒力基因 猪肠球菌溶血素cylA基因原核表达载体的构建 2009年 以猪致病性粪肠球菌染色体DNA为模板,PCR扩增溶血素cylA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET32a中,构建pET32a-cylA重组质粒,并将pET32a-cylA质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经HindⅢ、XhoI双酶切及测序鉴定,并与已发表的肠球菌溶血素cylA基因序列比较,同源性达99.8%。表明成功构建猪肠球菌溶血素cylA基因的重组表达质粒,为制备单抗、开发疫苗及其致病机制研究奠定了基础。 刘磊 王亚宾 程金平 王中明 段志刚 蔡京雷 崔保安关键词:粪肠球菌 溶血素 原核表达