汪飞鹏
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：青年科技基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- hCu,Zn-SOD-TAT PTD融合基因的构建和表达被引量：2
- 2004年
- 目的 构建人hCu ,Zn SOD TATPTD表达载体及其原核表达与表达产物的纯化。方法 从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu ,Zn SOD基因 ,插入 pUC19测序 ;以测序质粒为模板 ,再用含TATPTD编码序列的 3′引物PCR扩增得hCu ,Zn SOD TATPTD融合基因 ,并插入pUC19。将SOD TATPTD融合基因克隆至温控表达载体 pJW 2 ,转化大肠杆菌DH 5α。温度诱导表达 ,表达产物用离子交换层析法初步纯化。结果 经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定表明所构建质粒与设计相同 ,hCu ,Zn SOD TATPTD融合蛋白在转化大肠杆菌获得了高效表达并纯化。结论 成功地获得了hCu ,Zn SOD TATPTD融合基因的表达产物 ,为进一步研究及临床应用奠定了基础。
- 汪飞鹏桂向东宋礼华
- 关键词：超氧化物歧化酶聚合酶链反应大肠杆菌
- hCu,Zn-SOD-TAT-PTD的融合表达及其跨膜转运性质的初步研究
- 目的 hCu，Zn-SOD-TAT PTD表达载体的构建及其体外表达，表达产物的纯化及对其跨膜转运能力的初步研究。方法 先从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu，Zn-SOD基因，插入pUC19测序；以测序质粒为模板，再用...
- 汪飞鹏
- 文献传递
- hCu,Zn-SOD-TAT PTD的融合表达及其跨膜转运性质的初步研究被引量：5
- 2004年
- HIV I反式激活蛋白TAT中的一段富含碱性氨基酸的短序列具有独特的跨膜转运能力 ,被称为TAT蛋白转导结构域 (proteintransductiondomain ,PTD)。从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu ,Zn SOD基因 ,插入pUC19测序 ;以测序质粒为模板 ,再用含TATPTD编码序列的 3’引物PCR扩增得hCu ,Zn SOD TATPTD融合基因 ,并插入 pUC19。将SOD基因和SOD TATPTD融合基因分别亚克隆至温控表达载体 pJW 2 ,转化大肠杆菌DH5α。SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,热击诱导 4h后 ,分别在 19ku和 2 2ku处出现SOD和SOD TATPTD目标表达条带 ,表达蛋白以包含体形式存在。分别提取SOD和SOD TATPTD包含体 ,复性纯化后SOD和SOD PTD重组蛋白均具有特异的SOD酶活性 ,其比活性分别为 12× 10 3 NU/mg和 9.9× 10 3 NU/mg。细胞试验结果表明 ,与SOD相比较 ,SOD TATPTD融合蛋白能显著提高细胞内SOD酶活力。
- 汪飞鹏桂向东宋礼华
- 关键词：原核表达蛋白转导
