熊颖
- 作品数：11 被引量：17H指数：3
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：甘肃省科技重大专项计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源抗破伤风毒素单链抗体(ScFv)的原核表达、纯化及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 实验通过DNA重组技术从一株可中和破伤风毒素的人源单克隆抗体细胞(G6)中扩增出了抗体VH、VL的基因,通过重叠PCR使连接片段与VH、VL连接成单链ScFv。经测序证实VH、VL为抗体的可变区序列,命名为ScFv-G6。将ScFv-G6连接转化PET/26b质粒,构建了抗体的表达载体,被命名为PET/26b/ScFv-G6。以该载体在大肠杆菌中分泌表达产物经Ni-亲和柱纯化后的小鼠试验证实,可抵抗破伤风毒素的攻击,表明为中和抗体。具有组织穿透力强,不易过敏,可直接靶向于毒素等特点,适合于破伤风的防治,具有重要的应用价值。
- 熊颖李晓进乔玉玲毛晓燕龟井优德赵红
- 关键词：单链抗体原核表达中和活性
- 从人源天然ScFv噬菌体抗体库中筛选A型肉毒毒素特异性抗体被引量：5
- 2011年
- 目的:以不同形式的A型肉毒毒素或类毒素为靶抗原,对已经构建的人源天然ScFv噬菌体抗体库进行特异性抗体的筛选及特异性抗体的序列分析。方法:制备3种不同形式的A型肉毒毒素或类毒素,抗原梯度包被免疫管,对人源天然ScFv噬菌体抗体库进行筛选,经过3轮"吸附-洗脱-扩增"淘选富集,制备单克隆噬菌体抗体颗粒,用ELISA验证ScFv的结合活性,并对获得的阳性克隆进行基因序列分析。结果:用3种不同形式的抗原进行筛选,各挑180个克隆进行单克隆噬菌体抗体颗粒的ELISA分析,其中以A型肉毒类毒素筛选获得52个阳性克隆,阳性率为28.8%,随机挑取12个克隆测序,结果表明7个ScFv序列正确且各不相同;以纯化后A型肉毒神经毒素(BONT/A)筛选获得18个阳性克隆,阳性率为10%,测序结果表明获得的14个ScFv序列正确且各不不同;以原核表达的A型肉毒毒素重链C段筛选获得122个阳性克隆,阳性率为68%,随机挑取55个克隆测序,结果表明30个正确的ScFv序列中14个系列完全相同,16个序列各不相同;结论:应用固相筛选的方法,从人源天然ScFv噬菌体抗体库可以获得肉毒毒素特异性抗体,为抗肉毒毒素马血清的更新替换提供了研究依据与应用基础。
- 毛晓燕卢卫嘉乔玉玲熊颖张超马瑞
- 关键词：噬菌体抗体库A型肉毒毒素
- 不同色谱介质纯化人源破伤风毒素单克隆抗体的比较
- 从一株人源破伤风毒素单克隆抗体的培养上清中纯化抗体,对三种纯化方法的结果进行了比较.结果表明培养上清直接经一次亲和层析,纯度可达85﹪-90﹪,收率达82.5﹪-90﹪而经过两步离子交换层析后,纯化的单克隆抗体的纯度为8...
- 赵红王棣李晓进熊颖
- 关键词：破伤风毒素单克隆抗体亲和层析法
- 文献传递
- 16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用
- 目的:建立一种快速,可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法:从肉毒梭菌中提取基因组DNA为模板,通过16S rRNA特异性引物进行PCR,扩增得到16S rDNA序列并测序。将结果通过Clustal和Mega两个软件分...
- 卢卫嘉毛晓燕熊颖张超王建锋
- 关键词：肉毒梭菌进化树
- 文献传递
- 冻干人血浆补体的制备及其稳定性被引量：3
- 2016年
- 目的制备冻干人血浆补体,并观察其在4种不同保存温度条件下的稳定性。方法制备3批冻干人血浆补体,将每批样品分别保存在-70、4、25和37℃条件下,采用补体50%溶血试验测定于-70和4℃条件下保存第1、15、30、60、90、120、180、270、365天以及于25和37℃条件下保存第1、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120天的CH_(50);细胞增殖-毒性检测法测定补体对抗CD_(20)抗体CDC活性检测的影响。结果-70和4℃保存的3批冻干人血浆补体,1年内CH_(50)平均下降了19.5%和36.3%,25和37℃保存的3批冻干人血浆补体,3个月CH_(50)平均下降了53.4%和60.7%。与上市补体和CH_(50)为30 U/ml的冻干人血浆补体相比,CH_(50)为15 U/ml的冻干人血浆补体对抗CD_(20)抗体CDC活性检测结果无影响。结论在-70和4℃条件下保存的冻干人血浆补体的CH_(50)相对较稳定,但随着保存温度的升高,CH_(50)下降有加速的趋势。CH_(50)大于15 U/ml的冻干人血浆补体可用于治疗性抗体CDC活性检测。
- 秦海艳熊颖乔玉玲陈继军安晨毛晓燕
- 关键词：血浆冷冻干燥补体稳定性
- 16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用被引量：3
- 2011年
- 目的建立一种快速、可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法以从LCL063、830110、LC175、LCL155、66418、N153、61082、ALASKA、IWANAI共9株梭菌中提取的基因组DNA为模板,利用16SrRNA特异性引物分别进行PCR扩增并进行T-A克隆转化、测序。通过Clustal和Mega软件分析16SrDNA序列,以NJ法和MP法构建进化树,分析其种属特异性。结果 16SrRNA分型结果可判断出LCL063、830110、LCL175为产E型毒素的酪酸梭菌。IWANAI与ALASKA株为E型肉毒梭菌。与传统分型鉴定得到的结果一致。结论 16SrRNA在肉毒梭菌分型鉴定中具有快速、准确的优势,随着核糖体库的不断完善,有望成为细菌分型鉴定的标准依据。
- 卢卫嘉毛晓燕熊颖张超王建锋
- 关键词：肉毒梭菌进化树细菌分型技术
- 破伤风毒素C片段(TTc)在大肠杆菌中的表达、优化与鉴定
- 以一株破伤风生产菌株为模板，通过上游引物中几个碱基的修改，PCR扩增出破伤风C片段(TTc)基因，构建了原核表达质粒pET-42(b)/TTc在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，重组蛋白分子量约50KD，表达量为22％，...
- 毛晓燕乔玉玲王云天熊颖赵红
- 关键词：表达条件优化大肠杆菌亚单位疫苗载体蛋白生物制品
- 文献传递
- 人源抗破伤风毒素单链抗体(scfv)的原核表达、纯化及功能鉴定
- 本实验通过DNA重组技术从一株可中和破伤风毒素的人源单克隆抗体细胞(G6)中扩增出了抗体的VH，VL基因，通过重叠PCR使连接片段与VH，VL连接成单体ScFv。
经测序证实VH，VL为抗体的可变区序列，命名为...
- 熊颖李晓进乔玉玲毛晓燕龟井优德赵红
- 关键词：单链抗体原核表达中和活性破伤风
- 文献传递
- 破伤风毒素C片段(TTc)在大肠杆菌中的表达、优化与鉴定被引量：1
- 2007年
- HTSS以一株破伤风生产菌株基因组DNA为模板,通过上游引物中几个碱基的修改,PCR扩增出破伤风毒素C片段(TTc)基因,构建了原核表达质粒pET-42(b)/TTc,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。重组蛋白分子量约50kD,表达量为22%,超声波破碎显示为可溶性重组蛋白。通过对培养基、诱导时间、诱导温度的优化,重组蛋白的表达量和可溶性均有提高。Western blotting检测表达产物可与破伤风C片段单克隆抗体产生特异的免疫反应。该工作为亚单位疫苗或载体蛋白的开发奠定了基础。
- 毛晓燕乔玉玲王云天熊颖赵红
- 关键词：原核表达表达条件优化
- 破伤风毒素C片段(TTc)在大肠杆菌中的表达、优化与鉴定
- 以一株破伤风生产菌株为模板,通过上游引物中几个碱基的修改,PCR扩增出破伤风C片段(TTc)基因,构建了原核表达质粒pET-42(b)/TTc,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,重组蛋白分子量约50KD,表达量为22％...
- 毛晓燕乔玉玲王云天熊颖赵红
- 关键词：原核表达大肠杆菌重组蛋白
- 文献传递
