王婷
- 作品数:4 被引量:61H指数:3
- 供职机构:山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学更多>>
- 筛选在非生长条件下突变体酶的新方法被引量:6
- 2001年
- 利用双层平板筛选由定向进化方法产生的瑞氏木霉内切葡聚糖酶III (EGIII)突变体文库 ,根据水解圈在平板上形成的速度判断酶活高低。采用这种方法在不同的筛选条件下分别筛选得到了几株在低温或碱性条件下高活性的EGIII突变体。比色法测定的酶活性与平板筛选结果一致。该方法的建立将使通过定向进化方法改造现有蛋白质 。
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- 关键词:瑞氏木霉
- 瑞氏木霉EGⅠ3′-UTR对基因在酿酒酵母中表达的影响被引量:12
- 2001年
- 将纤维素降解菌丝状真菌瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅰ (EGⅠ )全长cDNA克隆于酿酒酵母H1 58中得到表达。重组酿酒酵母产生的EGⅠ的最适pH值为 5 0 ,最适作用温度为 50℃~ 60℃。EGⅠcDNA中的 3′ 非翻译区 (3′ UTR)序列的删除导致EGI基因在酵母菌中没有活性产物表达。通过RT PCR技术检测EGⅠmRNA转录水平的结果表明 ,带有 3′ UTR的EGⅠcDNA在酿酒酵母中具有明显的转录产物生成 ,但删除 3′ UTR之后的EGⅠcDNA却检测不到转录产物。这说明EGⅠ的 3′ UTR对基因在酵母菌中的表达具有重要作用。
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- 关键词:瑞氏木霉酿酒酵母
- 瑞氏木霉纤维素酶的酶分子改造
- 酶的体外定向进化是90年代以来兴起的蛋白质工程的新策略。较之蛋白质分子的理性设计,酶的体外定向进化属于非理性设计,适合于任何酶蛋白。它最大的优点是不需了解酶的空间结构和催化机制。通过人为创造特殊条件,模拟自然进化过程,可...
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- 文献传递
- 瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ基因的克隆及在酿酒酵母中的表达被引量:48
- 2001年
- 采用刚果红染色法从瑞氏木霉cDNA文库中分离到一株具有CMCase活性的阳性克隆 ,测序结果显示该基因所编码的蛋白质为瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ (EGⅢ )。对重组酿酒酵母所产生的EGⅢ进行了酶学性质分析 ,其最适pH为 5 0 ,最适温度为 60℃。检测了酿酒酵母蛋白质分泌系统组分SSO2和SEB1对EGⅢ分泌的影响。结果表明 ,在可过量表达蛋白质分泌系统组分SSO2的酿酒酵母H837中 ,EGⅢ的分泌量最高。由此分析 ,酿酒酵母SSO2蛋白可能在EGⅢ的分泌中 ,是一个限速步骤。通过PCR方法删除EGⅢ基因 5′端非翻译区的 98bp核苷酸序列使EGⅢ表达量提高了 5 3倍。这提示我们 ,瑞氏木霉的EGⅢ基因在酿酒酵母细胞中表达时 ,其mRNA 5′端先导序列中可能存在影响该基因表达水平的调控序列。
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- 关键词:瑞氏木霉酿酒酵母基因表达蛋白质分泌