王晓丰
- 作品数：11 被引量：64H指数：5
- 供职机构：江苏省淡水水产研究所更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技支撑计划项目公益性行业(农业)科研专项江苏省水产三项工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程生物学更多>>
- 嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类药物的敏感性及耐药相关基因分析被引量：8
- 2010年
- 为明确嗜水气单胞菌临床分离株对常用氟喹诺酮类药物的敏感性和耐药菌株中gyrA和parC基因的突变情况。试验采用自动化细菌药敏分析仪测定4种常用氟喹诺酮类药物对23株鱼源嗜水气单胞菌的最低抑菌浓度,并依据耐药数目的不同选取9株嗜水气单胞菌,PCR扩增其gyrA及parC基因的喹诺酮抗性决定区(QRDR),直接测序后进行多序列比对分析。结果显示:嗜水气单胞菌对诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星的耐药率依次为8.7%、30.4%、73.9%和43.5%;序列分析发现gyrA基因编码的第83位氨基酸存在Ser→Ile、Ser→Val的突变,parC基因编码的第87位氨基酸同样存在Ser→Ile的突变。表明临床分离的嗜水气单胞菌对恩诺沙星耐药最为严重,氧氟沙星、环丙沙星次之,对诺氟沙星较为敏感;尽管绝大多数耐药菌株的药物靶位基因QRDR区域有突变发生,但是菌株的耐药性与药物靶位基因QRDR区域有无发生突变并不存在线性关联,提示我们药物靶位的变化并非是氟喹诺酮类耐药菌株唯一的抗性机制。
- 王晓丰薛晖丁正峰杨林
- 关键词：嗜水气单胞菌氟喹诺酮GYRA基因PARC基因
- 氰戊菊酯对河川沙塘鳢幼鱼的毒性效应被引量：4
- 2013年
- 采用静水生物测试法,研究了氰戊菊酯(fenvalerate,FEN)对河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)幼鱼的毒性效应。结果显示,FEN对河川沙塘鳢幼鱼的24、48、72和96 h(t)的半数致死质量浓度ρ(LC50)(95%置信区间)分别为(3.19±1.38)、(1.66±1.02)、(0.98±0.69)和(0.70±0.49)μg.L-1,变化规律符合指数衰减模型ρ(LC50)=0.915 1+15.012 3×exp(-0.075 8×t)(r=0.996 2),安全浓度为(0.13±0.97)μg.L-1。半数致死时间t(LT50)表现出显著的剂量〔ρ(FEN)〕效应,可用方程t(LT50)=2 653.467 6×exp[-5.590 4×ρ(FEN)]+56.378 7×exp[-0.209 5×ρ(FEN)](r=0.999 4)对其进行拟合。双因素方差分析显示,肝脏过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量随FEN浓度的增加和暴露时间的延长而均呈显著变化(P<0.05),但两个因素的交叉影响不显著(P>0.05)。暴露24 h时,4μg.L-1浓度组SOD和CAT活性达到峰值,随后开始下降,而此时各浓度组MDA含量无显著变化(P>0.05),48和96 h时,4、6和10μg.L-1浓度组MDA含量则表现为显著上升。暴露时间和FEN浓度的交互作用对鳃Na+/K+-ATP酶活性影响显著(P<0.05),暴露24、48和96 h时,高浓度(6和10μg.L-1)组Na+/K+-ATP酶活性均呈现显著下降;上述指标可较好地用于评价FEN的毒性效应。组织病理观察发现,FEN污染对河川沙塘鳢幼鱼的鳃、肝脏均造成严重损伤:鳃丝紊乱,上皮细胞增生,柱状细胞破裂;肝细胞实质空泡化,胆管内皮细胞肥大、融合。
- 丁正峰史阳白李潇轩王晓丰薛晖边文冀
- 关键词：氰戊菊酯河川沙塘鳢毒性效应抗氧化系统K+
- 白斑综合征病毒江苏分离株变异区和缺失区基因的序列比较被引量：8
- 2011年
- 为了解白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)在养殖克氏原螯虾(Procambarus clarkii)中的感染流行情况和分子流行病学特征,以及探讨不同病毒株间的遗传进化差异,2008年7月至2010年6月在江苏各主要克氏原螯虾养殖产区共采集了83份样品,应用环介导等温扩增技术(LAMP)检测42份样品为病毒感染阳性,阳性率达50.6%。在此基础上考虑地理和时间因素选取了兴化、盱眙等地的6份样品,PCR扩增、克隆了样品中所携带病毒的变异区和缺失区基因并对其进行了测序。分析结果显示,在变异区除兴化毒株为1 829 bp之外,其余各分离株间差异微小,均在1 440 bp左右;而在缺失区各毒株大小均为384 bp,且核苷酸序列完全一致。随后将各分离株序列与GenBank已公布的毒株做进一步的序列比较分析,结果表明在江苏境内流行的兴化毒株与其余毒株间存在明显差异,在遗传上相距较远,并且推测WSSV变异区和缺失区可能是各自独立进化变异的;同时,缺失变小的病毒基因组更易于适应宿主和环境的变化。
- 薛晖王晓丰丁正峰唐建清
- 关键词：白斑综合征病毒
- 毒死蜱(CPF)对河川沙塘鳢幼鱼的急性毒性被引量：12
- 2012年
- 采用静水生物测试法研究了毒死蜱(CPF)对河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)幼鱼的急性毒性效应并进行了安全评价。设定0 mg/L、0.18 mg/L、0.36 mg/L、0.57 mg/L、0.86 mg/L和1.1 mg/L 6个CPF质量浓度梯度进行急性暴露实验,以肝超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽(GSH)含量为指标,研究CPF污染对幼鱼肝抗氧化系统的影响。结果表明,CPF浓度升高对实验鱼产生了较大毒性,24 h、48 h和96 h LC50分别为(0.296±0.019)mg/L、(0.16±0.036)mg/L和(0.052±0.003)mg/L,随着时间延长呈显著下降趋势,符合双曲线衰减模型(R=0.999 9,P<0.000 1),安全浓度为(0.014±0.003 1)mg/L;低浓度染毒条件下,CAT活性随时间变化较小,在0.57mg/L CPF染毒96 h后CAT活性达到最大值,之后随药物浓度的升高而降低,CAT活性随时间和药物浓度呈极显著变化(P<0.01);SOD活性变化与CAT相似,在时间和不同浓度CPF的共同作用下,SOD活性表现出显著差异(P<0.05);药物对GSH含量的影响不大,在0.36 mg/L以上浓度组,24 h和48 h的含量有所下降,96 h的含量则维持在较高水平,GSH含量随时间呈现极显著变化(P<0.001);由此可见,肝CAT、SOD酶活性和GSH含量作为毒理学指标能较好地评价CPF毒性效应。组织病理观察发现,CPF污染对河川沙塘鳢幼鱼的鳃、肝均造成严重损伤:鳃丝紊乱、上皮细胞增生,鳃小片肥大、充血,鳃弓软骨细胞变性、溶解;肝细胞发生实质空泡化,细胞间隙增大,胆管内皮细胞肥大隆起。
- 丁正峰薛晖王晓丰史阳白李潇轩
- 关键词：毒死蜱急性毒性抗氧化系统组织病理
- 毒死蜱(CPF)对克氏原螯虾的急性毒性及组织病理观察被引量：15
- 2012年
- 采用静水生物测试法研究毒死蜱(CPF)对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的急性毒性效应及克氏原螯虾的组织病变情况并进行安全评价。设定0、2、10、20、40和80μg·L-1 6个CPF浓度梯度进行急性暴露试验,结果表明,CPF浓度升高对克氏原螯虾产生较大毒性,24、48和96 h半致死浓度〔ρ(LC50)〕分别为(28.24±2.81)、(19.50±2.03)和(13.13±1.70)μg·L-1,ρ(LC50)随着暴露时间延长呈显著下降趋势,符合双曲线衰减模型(r=0.999 9,P<0.000 1),安全浓度为(2.79±0.31)μg·L-1。组织病理观察发现,染毒虾心脏上皮细胞增生,心肌肌束间充满血淋巴细胞;神经细胞肿大,尼氏体溶解消失,细胞由多极形状变为圆形,神经纤维坏死并解体;肝胰腺小管收缩并充血,空泡增加;鳃组织空泡化,表面出现黑色素沉积,被多量血淋巴细胞浸润;肌肉纤维萎缩并溶解。
- 丁正峰薛晖王晓丰唐建清
- 关键词：毒死蜱克氏原螯虾急性毒性组织病理
- 草鱼呼肠孤病毒RT-PCR检测方法的建立及临床应用被引量：4
- 2012年
- 为了解草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)的感染流行情况及早期临床诊断的需要,研究并建立了该病毒的RT-PCR检测方法。根据GenBank中GCRV VP6蛋白基因保守序列设计引物,以GCRV弱毒疫苗株GCHV-892总RNA为模板,RT-PCR反应扩增出712 bp的目的条带,并对PCR反应体系和反应程序进行了优化,测定了该方法的敏感性和特异性。敏感性试验结果表明以含VP6蛋白基因的重组质粒为模板,该PCR方法的最低检测限为102copies.μL-1,特异性试验表明该引物仅能扩增GCRV核酸,而与白斑综合征病毒(WSSV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、病毒性神经坏死病毒(VNNV)无交叉反应性。应用所建立的RT-PCR方法检测了7份疑似出血病草鱼病样,3份病料获得了阳性扩增,随机挑选其中的1份阳性样品经克隆后测序,结果显示与GenBank中已知序列最高有99%的相似性。
- 王晓丰薛晖丁正峰丁正峰唐建清
- 关键词：草鱼出血病呼肠孤病毒RT-PCR
- 草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立被引量：3
- 2012年
- 为更加快速、灵敏地检测草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV),建立环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据GenBank中GCRV HZ08等毒株VP6蛋白基因序列设计引物,以GCRV弱毒疫苗株(GCHV-892)总RNA为模板建立RT-LAMP反应,对扩增产物用限制性内切酶PvuⅡ进行酶切鉴定,所得酶切产物大小符合预期值。随后对LAMP反应体系包括Mg2+、dNTPs、甜菜碱(betaine)和内外引物浓度比进行了优化,并以含VP6蛋白基因的重组质粒(pEASY-VP6)为模板考量了该方法的敏感性,结果显示最低检测限为10copies.μL-1,比RT-PCR检测方法敏感10倍。特异性试验表明与白斑综合征病毒(WSSV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、病毒性神经坏死病毒(VNNV)无交叉反应。应用RT-LAMP方法检测16份疑似出血病草鱼,6份病料获得了阳性扩增,与RT-PCR检测结果一致。
- 王晓丰薛晖丁正峰唐建清夏爱军熊怀生
- 关键词：草鱼出血病呼肠孤病毒
- 江苏主要水产病原菌耐药谱系监测被引量：10
- 2011年
- 对2006—2009年期间收集自江苏境内的480株水产病原菌进行了菌种鉴定及耐药率统计,监测了江苏省主要水产病原菌的耐药率变迁状况,绘制了菌株对常见药物的耐药谱。结果显示,分离菌株以革兰氏阴性菌(G-)为主,占92.2%,呈上升趋势(χ2=34.103,P<0.01);主要集中在弧菌科的3个属:弧菌属、气单胞菌属和邻气单胞菌属,其中以气单胞菌属最多,占总数72.28%;各属病原菌对喹诺酮类、氯霉素类、磺胺类、氨基糖苷类、四环素类及β-内酰胺类等常见药物均有不同程度的耐药性,耐药率总体呈逐年上升趋势;高达62.5%的菌株对喹诺酮类药物耐药,对氯霉素类和四环素类的总体耐药率则维持在较低水平,分别为11.85%和10.35%;交叉耐药、多重耐药现象严重,超过98%的分离菌株至少有1种耐药标记,有3种耐药标记接近75%。耐药性的产生与扩散已成为当前渔业细菌性疾病防控的突出问题。
- 丁正峰薛晖王晓丰杨林
- 关键词：水产病原菌
- 乐斯本对克氏原螯虾肝胰脏抗氧化系统的影响被引量：3
- 2013年
- 采用静水生物测试法进行急性暴露试验,研究了有机磷类农药———乐斯本(LSB)对体质量为(20.0±1.7)g的克氏原螯虾Procambarus clarkii肝胰脏抗氧化系统的影响。试验设定2、10、20、40、80μg/L 5个LSB质量浓度梯度,每个浓度设2个平行,另设空白对照组和助溶剂二甲基亚砜(DMSO)对照组,每组投放克氏原螯虾20只,试验在聚乙烯塑料箱(58 cm×35 cm×34 cm)中进行。结果表明:药物浓度升高对克氏原螯虾产生较大毒性,半致死浓度(LC50)随着暴露时间的延长呈显著下降趋势,符合双曲线衰减模型(R=0.9999,P<0.0001),安全浓度为(2.79±0.31)μg/L;低LSB浓度染毒条件下,克氏原螯虾肝胰脏过氧化氢酶(CAT)活性随时间变化较小,在20μg/L LSB感染96 h时CAT活性达到最大值,之后随药物浓度的升高而降低,CAT活性随时间和药物浓度的变化呈极显著性差异(P<0.001);肝胰脏超氧化物歧化酶(SOD)活性变化与CAT活性变化相似,在时间和LSB浓度的共同作用下,SOD活性表现出显著性差异(P=0.045<0.05);LSB浓度对肝胰脏谷胱甘肽(GSH)含量的影响不大,在20～80μg/L浓度组,24 h和48 h的GSH含量有所下降,96 h的GSH含量则维持在较高水平,GSH含量变化在时间上出现了极显著性差异(P<0.001)。本研究表明,肝胰脏SOD和CAT活性及GSH含量变化可以反映克氏原螯虾受损伤的程度,并可用作克氏原螯虾安全性风险评价的参考依据。
- 丁正峰薛晖王晓丰唐建清
- 关键词：乐斯本克氏原螯虾肝胰脏抗氧化酶
- 江苏省渔用抗菌药物使用现状、存在问题及对策被引量：3
- 2012年
- 近年来，江苏省充分发挥水域资源优势，大力发展规模化水产养殖。据统计，2011年全省水产品产量为475．9万t，比2010年增加15．5万t，增长3．4％。水产行业为增加农民收入，丰富市民菜篮子作出了极大的贡献。然而伴随着水产养殖的不断集约化式发展，病害问题频发，渔用抗菌药物作为控制细菌性疾病的重要水产投入品，
- 马小荣王晓丰薛晖
- 关键词：药物使用水产品产量细菌性疾病农民收入
