王金宝
- 作品数：280 被引量：740H指数：14
- 供职机构：山东省农业科学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理医药卫生更多>>
- PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变及其真核表达载体的构建被引量：3
- 2014年
- 根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列设计并合成引物,通过点突变的方法对其进行单点、两点和3点突变,成功获得含单点、两点和3点的突变体。设计引物扩增突变体的ORF1片段,将目的片段分别经KpnI和XbaI双酶切进而将其连接到真核表达载体pVAX1中,成功构建PCV2-pVAX1-Rep真核表达载体。此重组表达载体的成功构建为进一步研究PCV2 ORF1编码蛋白的生物学活性打下了基础。
- 王鹏张熙艳时建立徐绍建丛晓燕刘畅彭喆孙文博杜以军吴家强王金宝李俊
- 关键词：猪圆环病毒2型突变
- 猪伪狂犬病病毒山东分离株gE和gD基因的克隆及序列分析被引量：7
- 2017年
- 近年来,我国猪场内很多规模化猪场的伪狂犬病病毒野毒呈阳性,大部分中小规模猪场和小养殖场感染情况更为糟糕,使得伪狂犬病病毒的变异率增加,给该病的防控带来了更大的压力。为了深入了解本病的流行情况及研制新型疫苗用于该病的防治,本研究在流行病学调查的基础上从发生疑似伪狂犬病的2个猪场仔猪组织内各分离到1株PRV野毒株,分别命名为LY株和YSH株。参照已发表的PRV gE和gD基因序列,设计合成2对分别扩其全长的引物,使用高保真酶进行PCR扩增,将扩增得到的全长序列克隆到pEASY-Blunt载体中,并转化Trans1-T1感受态细胞,挑取阳性菌落的质粒进行酶切、测序鉴定,并与国内外其他毒株进行比较分析,构建遗传进化关系图。结果表明,2毒株与国内外其他毒株比较,gE、gD基因核苷酸序列的同源性分别为97.7%~100.0%和99.0%~100.0%;氨基酸序列的同源性分别为95.5%~100.0%和98.9%~100.0%,以gE、gD基因氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3~5年分离的PRVs形成一个相对独立的新分支。经过同源性及进化分析,可知新分离的2株伪狂犬病病毒株与欧美株的亲缘关系远,与亚洲株内中国株的亲缘关系近,初步判定属于国内流行株,并可能存在一定的抗原变异,这为进一步研究山东省猪群伪狂犬病病毒分子流行病学奠定了基础。
- 张玲玲时建立彭喆徐胜男郑书轩吴晓燕徐绍建王金宝李俊
- 关键词：猪伪狂犬病毒GE基因GD基因
- 黄芪多糖高分子性能研究被引量：9
- 1997年
- 以水为溶剂，乙醇为沉淀剂，提取分离了均一性的黄芪多糖。采用凝胶层析法测得各级分多糖的分子量，Ｓｃｈｕｌｚ－Ｄｉｎｌｉｎｇｅｒ习惯法求得其分子量分布曲线。使用分光光度计，以浊度滴定法及修正的Ｅｌｉａｓ公式，研究了多糖溶液的Ｈ条件，Ｈ温度为２０±０．０２℃，Ｈ溶剂为Ｖ水：Ｖ丙酮＝６９．９３：３０．０７。利用乌氏粘度计，依次稀释法测得各级分的特性粘度，建立Ｍａｒｋ－Ｈｏｕｗｉｎｋ方程［η］＝５．７５×１０－３Ｍ０．４５。
- 史美丽王金宝孙月平袁月莲张乐萃
- 关键词：黄芪多糖
- 表达猪pCD163的细胞系、其制备方法及应用
- 本发明涉及生物技术中基因表达领域，特别涉及一种表达猪pCD163的细胞系，通过RT-PCR扩增获得pCD163受体基因，将其插入真核表达载体pCI-neo中，构建真核表达质粒pCI-pCD163，将真核表达质粒pCI-p...
- 杜以军王金宝丛晓燕陈蕾齐静孙文博吴家强陈智于江郭立辉任素芳
- 提高PRRSV GP5体外诱导细胞凋亡方法及系统
- 本发明属于医学领域，公开了一种提高PRRSV GP5体外诱导细胞凋亡方法及系统，根据PRRSV ORF5的基因序列，将第30位天冬酰胺的密码子突变为编码甘氨酸的AAG；第34位和第35位天冬酰胺的密码子分别突变为编码谷氨...
- 彭军申思袁艳梅吴家强王中华王金宝
- 文献传递
- 山东地区猪蓝耳病病原变异、诊断和防治技术
- 2009年
- 本研究拟开展山东省猪场猪繁殖与呼吸综合征PRRS流行病学调查，在一定时间跨度内完成一定数量PRRSV的分离，分析病毒遗传变异的分子机制。建立用于蓝耳病检测的核酸探针、免疫荧光、ELISA方法，应用DNA重组技术构建PRRSV传染性cDNA克隆和系列核酸疫苗，并优化生产工艺，研制PRRSV油乳剂灭活疫苗。在对PRRS系统研究的基础上，对已建立的诊断技术和研制的疫苗进行组装和集成，形成一整套对蓝耳病系统防治行之有效的技术体系，为我国养猪业的健康发展提供有力保障。
- 吴家强李俊任慧英徐龙涛温建新周顺朱向福张乐萃宋春阳禚宝山张秀美王金宝
- 猪核糖核酸酶L基因真核表达载体的构建与表达
- 2016年
- 为了研究猪核糖核酸酶L(sRNase L)的抗病毒能力,利用pXJ41载体构建猪RNase L基因真核表达载体pXJ41-sRNase L,采用poly(I∶C)转染PK-15细胞刺激诱导sRNase L基因转录mRNA;根据Gen Bank上sRNase L基因编码区序列设计引物并加入真核表达增强序列Kozak序列,通过RT-PCR扩增sRNase L编码基因序列,并将其克隆至真核表达载体pXJ41,通过双酶切和测序鉴定重组质粒;将重组表达载体pXJ41-sRNase L转染Marc-145细胞,Western blot检测sRNase L在Marc-145细胞中表达。结果显示:成功扩增得到sRNase L基因全长;成功克隆至真核表达载体pXJ41并能够在Marc-145细胞中成功表达。结果表明:成功构建了真核表达载体pXJ41-sRNase L并在Marc-145细胞中实现了sRNase L的表达,为进一步研究sRNase L在猪体内先天性免疫中抗病毒能力及其机制提供了条件。
- 周明明王加才姜宁朋丛晓燕陈蕾吴家强李俊杜以军王金宝
- 关键词：抗病毒先天性免疫
- 中药对法氏囊病病毒感染仔鸡免疫器官形态学的影响被引量：8
- 1998年
- 中药对法氏囊病病毒感染仔鸡免疫器官形态学的影响＊张乐萃王金宝马端忠孙月平任慧英周克年（莱阳农学院动科系，山东２６５２００）法氏囊病（ＩＢＤ）是鸡的一种急性病毒性传染病，是危害养鸡业发展的主要疾病之一，鸡感染本病后，主要危害其免疫器官－法氏囊，导致免疫...
- 张乐萃王金宝马端忠孙月平任慧英周克年
- 关键词：仔鸡免疫器官法氏囊病毒中药
- 猪IL-4对PRRS减毒活疫苗诱导的病毒特异性免疫反应的调节作用
- 彭军王金宝于江吴家强杜以军李俊郭中坤徐绍建张玉玉孙文博丛晓艳时建立
- HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：3
- 2013年
- 本试验旨在建立一种用SYBR GreenⅠ荧光染料检测HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d(T)15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和熔解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时荧光定量RT-PCR方法,检测FMDV L蛋白对Ⅰ型IFN效应因子的抑制效果。HeLa细胞在转染FMDV L蛋白真核表达质粒,并受到Ⅰ型IFN刺激后ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR的相对表达量较转染空载体或表达GST的真核表达质粒明显降低。本试验建立了HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的实时荧光定量RT-PCR检测方法,为在mRNA水平上对HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的定量分析奠定了基础,并成功地初步应用于FMDV L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路的研究中。
- 刘纪玉杜以军刘星吴家强李俊丛晓燕赵新华徐绍建孙文博时建立单虎王金宝
- 关键词：实时荧光定量RT-PCRSYBRL蛋白干扰素
