石建峰
- 作品数：34 被引量：81H指数：6
- 供职机构：西安交通大学口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转化生长因子β1对牙周膜干细胞迁移、粘附及增殖的影响被引量：9
- 2015年
- 目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对牙周膜干细胞(PDLSCs)的迁移、粘附和增殖的影响,初步探讨TGF-β1通过影响牙周组织干细胞参与牙周改建的机制。方法分离培养人PDLSCs,鉴定其多向分化潜能。用Transwell法检测TGF-β1对PDLSCs的迁移的影响。用粘附实验检测TGF-β1对PDLSCs粘附能力的影响。用MTT法和生长率法检测TGF-β1对PDLSCs增殖的影响。结果浓度为2.5ng/mL以及10ng/mL的TGF-β1可促进PDLSCs的迁移,而且此作用呈剂量效应关系。粘附实验结果显示,在分别作用2h和4h后,浓度为10ng/mL的TGF-β1可促进PDLSCs的粘附。MTT法的结果证实了TGF-β1可促进PDLSCs的增殖,该作用呈剂量效应关系。再将细胞在含有或者不含有10ng/mLTGF-β1的培养基中培养2、4、6d,对细胞进行计数后发现TGF-β1显著促进PDLSCs的生长。结论 TGF-β1可促进PDLSCs的迁移、粘附和增殖。推测TGF-β1可能通过诱导PDLSCs向牙周组织部位迁移并提高其粘附和增殖能力。
- 王爽丰培勋陈悦石建峰曹沛张海娟
- 关键词：牙周膜干细胞迁移粘附增殖
- 牙龈卟啉单胞菌肽酰精氨酸脱亚氨酶的克隆与表达被引量：1
- 2011年
- 目的:构建牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白肽酰精氨酸脱亚氨酶(PAD)克隆表达重组子,转化于大肠杆菌BL21中,并在最适宜条件下诱导表达。方法:以牙龈卟啉单胞菌ATCC33277全基因组DNA为模板,利用PCR技术获得目的基因PAD,将扩增得到的PAD基因定向插入线性克隆载体PMD18-T Vector中,得到克隆重组子PMD18-T-PAD。经PCR和双酶切鉴定正确的克隆重组子PMD18-T-PAD与表达载体PET-28a经Xhol和Ncol双酶切后,在一定连接体系下,连接构建表达质粒PET-28a-PAD。鉴定正确的原核重组表达质粒PET-28a-PAD,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,在不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)及时间诱导下表达融合蛋白。以抗His Tag单克隆抗体为一抗,Western免疫印迹鉴定。结果:DNA测序结果表明,PAD与NCBI核酸数据库中收录的PAD序列同源性达100%;37℃,IPTG浓度为0.5mmol/L,250r/min振摇培养6h的诱导条件下,PAD可高效表达。结论:本实验成功构建了PAD的克隆表达重组子,并在大肠杆菌中表达了PAD蛋白,为进一步研究PAD的免疫学性能及相应的抗体制备奠定了基础。
- 李昂朱春晖石建峰魏虹刘瑾苟建重
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌原核表达
- 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术筛选牙龈卟啉单胞菌共同外膜蛋白被引量：5
- 2010年
- 目的 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS）技术筛选多种牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）共同外膜蛋白（outer membrane protein,OMP）,为针对多种Pg设计具有交叉保护作用的疫苗提供候选靶抗原.方法 应用超速离心法提取PgATCC33277、Pgw83、Pg301和Pg381菌株外膜蛋白,SELDI疏水性蛋白芯片H50检测OMP,Biomarker Wizard软件分析4种菌株OMP质谱图.结果 OMP质谱图显示,PgATCC33277、PgW83、Pg301和Pg381分别有71、74、76和72个蛋白质峰,并存在13种共同OMP 在美国国立生物信息中心蛋白库中鉴定到一种已知蛋白gil116636495,其功能尚不清楚.结论 发现13种共同OMP可作为牙周病疫苗候选抗原,证实基于SELDI-TOF-MS技术适合检测小相对分子质量（＜20000）、低丰度、疏水性蛋白,且操作简单、重复性好,可用于大规模寻找Pg的共同OMP.
- 李昂孙俊毅孙媛媛石建峰饶国洲苟建重
- 关键词：细菌外膜蛋白质类表面增强激光解吸电离飞行时间质谱
- 核酸吸附快速分离法与国外同类试剂盒及传统方法的比较与评估
- 2014年
- 目的评价核酸吸附材料及配套系列核酸分离试剂，与国外同类试剂盒及传统方法提取核酸结果的比较，探讨其替代国外同类产品的可行性。方法将核酸吸附法、传统法及国外三种试剂盒分为5组（A，B，C；D，E）进行比较，每组分别从细胞、细菌、血液、植物中提取DNA和RNA，采用紫外分光光度法检测浓度，以吸光度A值检测样品纯度，凝胶电泳法检测核酸完整性。结果DNA含量：A组14．0734±0．033μg／ml，B组4．31±0．041tμg／ml，C组14．325±0．030ug／m!，D组13．876±0．023μg／ml，E组12．654±0．012μg／ml，A组与B组相比差异有统计学意义（￡=11．175，P〈O．05），与其他各组相比差异无统计学意义（t=0．014，P=0．989；t=-0．525，P=0．627；t=0．453，P=0．674）。RNA含量：A组287．740±0．036μg／ml，B组32．121±0．055μg／ml，C组285．12士0．027μg／ml，D组276．10±0．034μg／ml。E组264．36±0．071μg／ml，A组与B组相比差异有统计学意义（t=29．284，P〈0．05），与其他各组相比差异无统计学意义（t=-0．22，P=0．836；t=-0．825，P=0．456；t=0．474，P=0．66）。DNA纯度}A组1．828士0．016，B组1．e01±0．013，C组1．836±0．022，D组1．819±0．014，E组1．796±0．025，A组与B组相比差异有统计学意义（t=7．448，P〈0．05），与其他各组相比差异无统计学意义（t=-0．099，P=0．926；f=0．111，P=0．917；f=-0．833，P=0．452）。RNA纯度：A组1．952±0．021，B组1．331±0．017，c组1．950±0．018，D组1．947±0．026，E组1.879±0．034，A组B组相比差异有统计学意义（t=8．755，P〈0．05），与其他各组相比差异无统计学意义（t=0．024，P=0．982；t=0．061，P=0．954；t=1．434，P=0．225）。A组和C，D，E组提取的核酸无降解，完整性好。B组核酸出现降解现象，完整性差。结论核酸吸附分离法较传统法简单快速，提取的核酸纯度�
- 饶国洲石建峰李昂魏虹苟建重周洪李晓红
- 关键词：DNARNA试剂盒
- 重组hFOXA2和hPDX1慢病毒载体诱导乳牙牙髓干细胞重编程为胰岛素生成样细胞被引量：3
- 2013年
- 目的:构建重组转录因子hFOXA2和hPDX1慢病毒载体,转染乳牙牙髓干细胞,诱导其向胰岛素生成样细胞(insulin-producing cells,IPCs)分化。方法:酶消化法分离培养人牙髓干细胞(DPSCs),有限稀释法纯化培养,流式细胞术分析细胞表面标志,并进行体外多向分化诱导验证;构建重组Lenti-hFOXA2、Lenti-hPDX1慢病毒载体,Lipofectamine2000转染293T细胞进行病毒包装,通过荧光细胞计数测定病毒感染效率和滴度;以最佳感染复数(MOI)感染牙髓干细胞,诱导其体外重编程为胰岛素生成样细胞,免疫荧光染色测定PDX1、FOXA2及胰岛素原表达,ELISA法检测胰岛素分泌情况。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:体外成功分离培养人DPSCs;细胞表面表达STRO-1(98.01%)、CDl46(98.51%)、CD34(99.54%)和CD45(24.08%)。体外成骨、成软骨、成脂肪诱导分化特异性染色阳性;成功构建重组Lenti-hFOXA2、Lenti-hPDX1慢病毒载体,双酶切和测序鉴定与GenBank的序列完全符合;病毒包装效率分别为(96.15±0.17)%和(95.49±0.21)%,感染滴度约为1.80×108GTU/mL,最佳MOI为20;诱导后的细胞表达胰岛素原、FOXA2和PDX1,胰岛素分泌量为1.92μmol/L,较未诱导组和对照组均显著增高(P<0.01)。结论:DPSCs经重组转录因子慢病毒载体Lenti-hFOXA2、Lenti-hPDX1转染诱导,可启动细胞重编程机制,形成胰岛素生成样细胞,可作为糖尿病基因治疗的种子细胞。
- 石建峰朱春晖刘瑾孙俊毅饶国洲李昂
- 关键词：乳牙牙髓干细胞诱导分化胰岛素分泌
- 人胚嗅粘膜嗅鞘细胞的分离、培养和纯化被引量：1
- 2008年
- 目的采用经我们改良的差速贴壁法结合神经营养因子3(NT3)和低浓度血清的培养方法对人胚嗅粘膜嗅鞘细胞进行分离和原代纯化培养,探讨建立嗅粘膜嗅鞘细胞体外培养的方法。方法对差速贴壁后的人胚嗅粘膜嗅鞘细胞交替应用含10%胎牛血清和含2.5%胎牛血清、NT3的DMEM-F12培养基进行原代培养。观察嗅粘膜嗅鞘细胞的形态学变化,采用p75NTR和GFAP免疫细胞化学染色进行鉴定和纯度检测。结果人胚嗅粘膜嗅鞘细胞形态多呈双极、三极,伴有细长的突起。p75NTR和GFAP染色均呈阳性反应,体外培养9d时纯度可达83%。结论差速贴壁法结合低浓度血清和NT3应用可以分离培养出人胚嗅粘膜嗅鞘细胞。
- 历强贺西京石建峰王斌朱振中臧全金樊沛
- 关键词：嗅鞘细胞鼻粘膜细胞培养纯化
- 黄连和骨碎补有效部位组方全身应用治疗小型猪牙周炎
- 目的:黄连和骨碎补有效部位全身应用于小型猪牙周炎模型的治疗,为牙周炎临床治疗提供实验依据。方法:小型猪采用根分叉去骨、金属丝线结扎牙颈部配合饲软食的方法建立小型猪牙周炎模型;正常组,牙周炎组,黄连和骨碎补有效部位组分别全...
- 刘瑾孙俊毅李昂曾辉王琪石建峰苟建重
- 关键词：小型猪牙周炎
- 文献传递
- 中药复方连补缓释凝胶制剂的毒理学研究
- 目的:中药黄连与骨碎补提取物制备成中药复方连补缓释凝胶,观察其毒理作用。方法:1)急性毒理实验:连补缓释凝胶、空白凝胶、对照组分别对小鼠进行一次性最大浓度灌胃,观察小鼠接受过量药物一周内产生的急性毒副反应;2)局部刺激实...
- 孙俊毅刘瑾李昂杨冬梅李珏丹石建峰苟建重
- 关键词：黄连提取物中药复方缓释凝胶毒理
- 文献传递
- Survivin和Bcl-2基因靶向siRNA对舌癌Tca-8113细胞生长抑制及诱导凋亡作用的影响被引量：4
- 2015年
- 目的:探讨Survivin联合Bcl-2siRNA对舌癌细胞的诱导凋亡作用。方法:实验分空白组、脂质体组、阴性干扰组、Survivin干扰组、bcl-2干扰组、Survivin/bcl-2干扰组,以舌癌细胞系Tca-8113为研究对象,应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)分别和同时沉默下调Survivin和Bcl-2两种基因的表达,采用MTT检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜检测细胞超微结构变化,比较各组对肿瘤细胞生长的抑制及诱导凋亡作用。结果:转染24h后可见Survivin/bcl-2干扰组的细胞形态发生明显改变,体积缩小变圆,染色质浓集于核膜内侧,核碎裂,电镜下呈典型的细胞凋亡形态学改变,并有凋亡小体出现,MTT显示细胞生长明显抑制,MCF检测凋亡率分别为空白组0.85%、脂质体组2.46%、阴性干扰组3.06%、Survivin干扰组15.48%、bcl-2干扰组11.02%、Survivin/bcl-2干扰组29.18%,与空白组相比差异有统计学显著性意义(P<0.01),转染阴性siRNA及脂质体组无抑制和诱导凋亡作用,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:靶向特异性Survivin联合Bcl-2siRNA双基因沉默下调较单基因沉默下调作用显著增强,并且能有效抑制舌癌细胞的增殖及诱导其发生凋亡。
- 饶国洲石建峰王欣欣魏虹李昂孙惠玲张引成
- 关键词：舌肿瘤基因,BCL-2
- 人牙周膜干细胞的分离培养及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨人牙周膜干细胞的多向分化潜能。方法:体外分离培养人牙周膜细胞,光镜下及HE染色鉴定细胞形态学特征。免疫组化法检测波形蛋白、角蛋白、CD44的表达。成骨诱导法培养人牙周膜干细胞向成骨细胞分化。结果:体外成功分离培养人牙周膜干细胞。角蛋白阴性表达,波形蛋白阳性表达,CD44阳性表达。诱导成骨结果显示人牙周膜干细胞具有潜在的多向分化潜能。结论:人牙周膜干细胞在体外可以诱导分化为成骨样细胞,具有多向分化的潜能。
- 石建峰李昂张晨时志斌黄辰
- 关键词：细胞分离细胞培养干细胞牙周膜
