秦玲莎
- 作品数：27 被引量：97H指数：5
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 包裹反义寡核苷酸的BCA纳米粒抑制C6脑胶质瘤细胞生长的实验研究
- 2008年
- 目的优化制备包裹反义寡核苷酸（ASODN）的α-氰基丙烯酸正丁酯（BCA）纳米粒，观察其对C6脑胶质瘤细胞的生长抑制作用。方法以BCA为载体材料，采用界面聚合法制备包裹ASODN的纳米粒（ASODNinNP）．并将其转染至C6脑胶质瘤细胞；倒置显微镜下观察游离ASODN组、ASODNinNP组、吸附ASODN纳米粒组和空白纳米粒组转染C6脑胶质瘤细胞后的细胞生长状态．流式细胞仪（FCM）检测细胞周期变化，采用CCK．8法测定ASODNinNP对细胞毒性和细胞增殖的影响。结果与空白对照组相比．除空白纳米粒组外．其他各组转染后的C6脑胶质瘤细胞形态均发生改变，细胞失去原有的贴壁特性，生长密度降低，生长状态变差，其中以ASODNinNP组最为明显．呈时间依赖性；各组细胞周期均发生变化，表现为G1期细胞比例明显增高，S期细胞比例减少，其中ASODNinNP组最为显著（P〈0．05）；除空白纳米粒组外，各纳米粒组对细胞增殖的抑制效应随ASODN相对终浓度的增加而增加，呈现浓度依赖性特征，其中ASODNinNP组抑制效应显著优于其他各组（P〈0．05）。结论ASODNinNP转染C6脑胶质瘤细胞后能有效抑制细胞增殖及改变细胞周期，对胶质瘤细胞生长有明显抑制作用。
- 徐越柯以铨黄乐松王建奇秦玲莎宋晓妮
- 关键词：反义Α-氰基丙烯酸正丁酯神经胶质瘤
- VEGF165-PE38重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的构建血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物（PE38）基因的真核融合表达载体，研究其在HEK293细胞中的表达情况。方法通过PCR获得实验需要的VEGF165基因片段，通过酶切pRB391质粒获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38基因，再通过适当的酶切及连接反应，构建VEGF165与PE38融合基因的真核表达载体pIRES2-VEGF165-PE38-EGFP，重组质粒经限制性内切酶及DNA序列测定证实构建成功后，用Lipofectamine2000脂质体转染HEK293细胞，然后用RT—PCR及ELISA法检测VEGF165-PE38融合蛋白在HEK293细胞的表达。结果酶切分析及DNA序列测定证实，VEGF165-PE38融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pIRES2-EGFP，RT—PCR及ELISA法检测证实重组基因可在HEK293细胞表达。结论VEGF165-PE38融合基因可在HEK293细胞中表达，为进-步研究其对肿瘤血管内皮细胞的靶向毒性及临床应用奠定基础。
- 胡昌辰柯以铨王斌全周丽媛吕俊张发兵卢建侃蔡颖谦秦玲莎
- 关键词：PE38免疫毒素HEK293细胞真核表达
- 人骨髓基质细胞核移植重构胚的建立
- 2007年
- 目的建立人体细胞核移植技术,为治疗性克隆的实验研究及临床应用奠定基础。方法应用显微操作技术将单个人骨髓基质细胞注入去核后的兔卵母细胞内,经电融合、离子霉素和6-甲氨基嘌呤激活后,培养于含10%胎牛血清的TCM-199中,使重构胚进一步发育至囊胚。结果245枚卵母细胞进行去注核显微操作,核移植后有72.6%(178/245)卵母细胞仍保持完整;经电融合后细胞融合率为62.8%(83/132);体外培养后约65%(54/83)的重构胚可进入分裂期,3.7%(2/54)发育至桑囊期,囊胚孵化率为100%(2/2)。结论兔卵母细胞能使人骨髓基质细胞核重新编程形成核移植重构胚并可继续发育至囊胚,使得从核移植重构囊胚分离胚胎干细胞用于实验和临床治疗研究成为可能。
- 邹雨汐姜晓丹邹飞尚江华秦玲莎滕晓华
- 关键词：核移植克隆胚胎干细胞细胞分化
- 人骨髓基质细胞作为核移植供体细胞的相关生物学特性研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究作为核移植供体细胞的人骨髓基质细胞相关生物学特性。方法应用密度梯度离心法分离培养人骨髓基质细胞，并对其进行形态观察、免疫荧光分析细胞骨架结构、端粒酶活性测定、核型及细胞周期分析。结果培养的细胞具有正常的大小、形态、细胞骨架结构：在融合密度达80%-90%时，G0＋G1期细胞所占的比例较高，约占92．58％；检测传至第7代的人骨髓基质细胞具有正常染色体数目（46，XY），端粒酶活性为0．567。结论形态良好、染色体数目正常的人骨髓基质细胞可以作为核移植的供体细胞。
- 邹雨汐姜晓丹尚江华滕晓华邹飞秦玲莎
- 关键词：骨髓基质细胞供体细胞细胞骨架
- LINGO-1多克隆抗体对大鼠脊髓损伤模型干预的可行性分析被引量：2
- 2009年
- 目的探讨脊髓损伤（SCI）处局部给予LINGO-1多克隆抗体治疗的可行性。方法24只成年雌性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、半横断对照IgG组及半横断LINGO-1多克隆抗体组，每组8只。假手术组仅行椎板切除术，另外两组均行T9脊髓半横断术，半横断LINGO-1多克隆抗体组大鼠半横断损伤后立刻通过微量渗透泵局部给予损伤处LINGO-1多克隆抗体，而半横断对照IgG组仅给予兔源性对照IgG。术后3d和28d取各组T8-10节段脊髓制作冰冻切片，应用免疫荧光染色方法观察分析LINGO-1多克隆抗体是否进入脊髓组织并与LINGO-1分子特异性结合。结果半横断LINGO-1多克隆抗体组大鼠SCI术后3d和28d均可检测出兔源性抗体；术后3d，半横断对照IgG组切片LINGO-1染色强度（1．704±0．174）明显强于半横断LINGO-1多克隆抗体组（0．568±0．052），LINGO-1多克隆抗体预处理后的半横断对照IgG组切片LINGO-1染色强度（0．329±0．055）明显弱于半横断对照IgG组（1．704±0．174）切片，比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论局部给予的LINGO-1多克隆抗体在较宽的时间窗里均可进入SCI区并特异性识别LINGO-1分子．证明被动免疫治疗SCI是可行的。
- 吕俊徐如祥法志强姜晓丹鲁辛柯以铨蔡颖谦杜谋选邹雨汐秦玲莎
- 关键词：中枢神经系统脊髓损伤
- 碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子对恒河猴骨髓源性神经干细胞的体外诱导增殖作用被引量：8
- 2004年
- 目的:探索骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)体外诱导分化为神经干细胞(nervestemcells,NSCs)的增殖条件,比较碱性成纤维细胞生长因子(basefibroblastgrowthfactor,bFGF)、表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)对神经干细胞生长曲线的影响,为BMSCs在神经科学领域内的应用提供参考。方法:以恒河猴骨髓中分离出的BMSCs为实验对象,实验组利用NSC培养基和bFGF,EGF生长因子,进行体外培养、诱导、增殖。对照组用神经干细胞培养基进行培养增殖。Nestin及CD133作为免疫细胞化学鉴定NSCs的细胞标志。结果:原代培养第6天时多数细胞表现为Nestin及CD133抗原阳性,此后实验组及对照组细胞数量开始明显扩增,但实验组增殖更为明显,bFGF+EGF组从第8天时的(96.30±8.78)×104增加到第18天时的(1407.90±26.62)×104,并且增殖开始的时间较对照组提前2d。NSCs在10d后有少量细胞向神经元和神经胶质细胞分化。结论:bFGF与EGF联合应用能够促使NSCs增殖时间提前及增殖效能显著提高。另外,bFGF和EGF还具有诱导NSC向神经细胞分化的作用。
- 郭再玉姜晓丹徐如祥邹雨汐徐强杜谋选蔡颖谦秦玲莎
- 关键词：NSC碱性成纤维细胞生长因子表皮生长因子BMSC神经干细胞恒河猴
- IL-6促进骨髓源性神经干细胞增殖的实验研究
- 2005年
- 目的研究白细胞介素6(IL-6)及其受体对体外培养的大鼠骨髓源性神经干细胞增殖的影响及信号转导机制。方法采用密度梯度离心法分离骨髓基质细胞,应用特制的神经干细胞培养基诱导培养6d后收集贴壁细胞传代培养,用AlamarBlue摄入法检测不同浓度的IL-6及IL-6受体对大鼠骨髓源性神经干细胞增殖的影响,Westernblot方法检测不同剂量IL-6对干细胞中STAT3表达的影响。结果IL-6能够促进干细胞的增殖,随着药物剂量的增加,增殖作用明显增加,呈明显剂量依赖性,其中20、100、200ng/mL组均与对照组有显著差异(P<0.01),但2ng/mL与对照组、100ng/mL与200ng/mL组之间无显著差异(P>0.05),20ng/mL与100ng/mL组之间有差异(P<0.05)。IL-6受体可抑制干细胞的增殖,单独应用IL-6受体,100ng/mL、200ng/mL组与对照组均有显著差异(P<0.05)。而IL-6与IL-6受体联合应用可促进干细胞的增殖,但增殖作用比单独应用IL-6组差,两组相比有显著性差异(P<0.05)。随IL-6浓度的增加,干细胞中的STAT3表达增加,20、100、200ng/mL组与对照组相差显著(P<0.01)。结论100ng/mL组的IL-6对骨髓源性神经干细胞有较好的增殖促进作用;IL-6受体可抑制骨髓源性神经干细胞增殖;联合应用IL-6和IL-6受体增殖效果不如单独应用IL-6,提示骨髓源性神经干细胞表面自身具有IL-6受体;IL-6通过增加STAT3表达促进骨髓源性神经干细胞增殖。
- 周虎田徐如祥姜晓丹徐宗俊蔡颖谦杜谋选邹雨汐邓镇秦玲莎
- 关键词：神经干细胞增殖IL-6受体骨髓源性神经干细胞密度梯度离心法
- 来源于乳鼠与成年大鼠的脂肪源性干细胞增殖特性比较被引量：3
- 2012年
- 目的比较来源于出生5dSD乳鼠和成年SD大鼠的脂肪源性干细胞（ADSCs）在同等条件下进行培养时增殖情况的差异。方法分别分离乳鼠和成年大鼠皮下脂肪组织并使用I型胶原酶消化法获取ADSCs，进行形态学观察。应用流式细胞仪检测ADSCs表面标记物CD45、CD29、CD90的表达情况，并在同等条件下接种相同数量的两种第2代ADSCs，培养4d后行细胞计数，比较ADSCs数量的差异。于96孔板上对相同数量的两种第2代ADSCs进行体外培养，应用CCK-8和alamarblue试剂盒连续7d对细胞增殖情况进行观察，酶标仪检测吸光度值．并绘制增殖曲线。结果流式细胞仪检测到来源于乳鼠和成年大鼠的ADSCs表面标志物均显示干细胞特性：CD45表达均呈阴性，CD29表达率分别是98．04％和93．17％，CD90表达率分别是94．92％和93.3％。在接种数量、培养条件和培养时间相同情况下，细胞计数结果显示，来源于乳鼠的ADSCs增殖数量[（8．87±0．13）×10^5]明显高于成年大鼠[（4．51±0．36）×10^5]。来源于乳鼠的ADSCs的吸光度值在第6、7天（CCK-8检测）和第2-7天（alamar blue检测）均明显高于来源于成年大鼠的ADSCs．比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论来源于乳鼠的ADSCs比来源于成年大鼠的ADSCs增殖能力更强。
- 杜谋选李鹏蔡颖谦邹雨汐唐艳萍秦玲莎姜晓丹
- 关键词：脂肪源性干细胞细胞增殖乳鼠成年鼠
- 人骨髓基质细胞移入兔去核卵母细胞的异种克隆研究
- 本实验选用人骨髓基质细胞((hBMSCs)和去核兔卵母细胞重组构建异种治疗性克隆胚，比较不同融合电压强度、不同注核方式对构建重构胚的影响，同时通过与兔卵丘细胞(rCCs)和兔骨髓基质细胞(rBMSCs)构建的同种重构胚比...
- 尚江华邹雨汐姜晓丹陈镇洲秦玲莎徐如祥
- 关键词：骨髓基质细胞异种克隆卵丘细胞
- 文献传递
- 编码轴突生长抑制因子的重组DNA疫苗的免疫原性研究
- 2010年
- 目的 探讨以前期实验所构建的腺病毒骨架质粒pAdEasy为载体,编码神经损伤后轴突生长抑制因子Nogo-A、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白（OMgp）、腱糖蛋白-R（TN-R）和髓磷脂相关糖蛋白（MAG）的重组DNA疫苗的免疫原性. 方法 16只5周龄Lewis大鼠按随机数字表法分为DNA疫苗注射组（Vaccine组）和空质粒注射组（pAdEasy组）.Vaccine组大鼠以DNA疫苗经双侧胫骨肌注射免疫,1次/周,共持续8周.每次进行疫苗注射前采血和分离血清,Dot-blot和ELISA法对血清中抗体进行定性和定量检测. 结果 6周后Vaccine组大鼠血清能与GST-TN-R和GST-OMgp融合蛋白产生较强的免疫反应,点杂交反应较明显;pAdEasy组大鼠血清则不能与GST-TN-R和GST-OMgp融合蛋白产生免疫反应.6周后Vaccine组大鼠血清中抗体效价则可以达到1：100万,并保持稳定的水平. 结论 编码轴突生长抑制因子Nogo-A、OMgp、TN-R和MAG的重组DNA疫苗接种大鼠后能够产生特异性的抗体.说明该重组DNA疫苗具有良好的免疫原性.
- 寇盛斌姜晓丹唐艳萍蔡颖谦杜谋选秦玲莎邹雨汐徐如祥
- 关键词：轴突生长抑制因子DNA疫苗免疫原性轴突再生
