童新
- 作品数：17 被引量：91H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 凋亡素的克隆及诱导HeLa细胞凋亡被引量：8
- 2001年
- 目的 :克隆凋亡素 (apoptin)的全长基因 ,在肿瘤细胞HeLa中表达并诱导其凋亡。方法 :从CAV病毒基因组TK580 3中通过PCR技术扩增凋亡素基因 ,直接克隆至真核表达载体pCDNA3.1/His/Topo ,序列测定证实其正确性 ,并克隆至pCIneo真核表达载体构建重组表达载体。采用脂质体转染HeLa细胞 ,转染 3d后Honchest332 58染色并于荧光显微镜下观察细胞状态。结果与讨论 :核酸序列分析证实所克隆的凋亡素基因与文献报道的一致 ,将其成功克隆至真核表达载体pCDNA3.1/His/Topo和pCIneo ,构建了真核重组质粒pCIneo apoptin和pCDNA3.1/His/Topo apoptin ,转染HeLa细胞 3d后可见明显的细胞凋亡 ,而只转染空质粒的对照组则较少。表明凋亡素能够有效地诱导HeLa细胞凋亡。
- 孙国敬童新孙志贤
- 关键词：凋亡素克隆HELA细胞凋亡聚合酶链反应基因转染肿瘤
- 凋亡素Apoptin选择性诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制
- 来源于鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)VP3蛋白的凋亡素apoptin能够选择性诱导肿瘤细胞凋亡,且不依赖于p53的介导,不被Bcl-2过表达所抑制,不易产生耐药性,被认为是真正意义上的第一...
- 孙国敬童新孙志贤
- 文献传递
- 辐射诱发细胞凋亡中DNA大片段的生成被引量：4
- 1999年
- 目的与方法：ＤＮＡ在核小体间断裂，琼脂糖凝胶电泳时出现梯形谱（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ），通常被认为是细胞凋亡的特征性生化标志。利用脉冲场凝胶电泳，对人外周血淋巴细胞受照后ＤＮＡ梯形谱形成前，ＤＮＡ断裂情况进行了观察。结果：人外周血淋巴细胞受照诱发凋亡过程中，ＤＮＡ的断裂分成两步，首先是产生３００ｋｂ到５０ｋｂ的ＤＮＡ大片段，随后才是通常所描述的ＤＮＡ梯形谱。结论：细胞凋亡中核酸内切酶对ＤＮＡ的降解不是一步完成的。
- 童新刘斌孙志贤
- 关键词：细胞凋亡DNA琼脂糖凝胶
- 辐射诱发白血病U937细胞凋亡基因的分离与鉴定被引量：8
- 1998年
- 目的：愈来愈多的证据显示Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白酶在细胞凋亡执行程序中发挥重要功能。辐射可诱发肿瘤细胞凋亡，分离、鉴定辐射诱发肿瘤细胞凋亡中Ｃａｓｐａｓｅ家族成员，是肿瘤细胞凋亡调控机制关键所在。方法：根据已知的Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白保守的氨基酸序列，设计简并引物，逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），分离、鉴定参与辐射诱发细胞凋亡基因。结果：Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白酶特异的抑制剂能阻抑射线诱发的细胞凋亡，并从照后６ｈＵ９３７细胞分离出ｃａｓｐａｓｅ－３基因。结论：Ｃａｓｐａｓｅ参与辐射诱发的细胞凋亡，ｃａｓｐａｓｅ－３基因是射线诱发细胞凋亡的枢纽元件。
- 童新罗瑛董燕孙志贤
- 关键词：白血病电离辐射细胞凋亡基因分离U937细胞
- γ-射线诱导HL-60细胞凋亡相关基因的克隆及其表达
- 为明确γ-射线诱导HL-60细胞凋亡过程中可能参与的caspase蛋白酶家族成员,以及该基因在凋亡细胞和多种永生化肿瘤细胞中的表达特性, 根据已知caspase家族成员保守肽序列设计简并引物,经RT—PCR从凋亡HL-6...
- 李小明童新宋天保孙志贤
- 文献传递
- 从人白细胞cDNA文库筛选凋亡素相互作用蛋白被引量：10
- 2001年
- 来源于鸡贫血病毒的小分子蛋白 凋亡素 (apoptin)能够选择性诱导肿瘤细胞凋亡 ,为研究其选择性诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制 ,利用酵母双杂交系统筛选从人白细胞cDNA文库筛选apoptin相互作用蛋白 ,核酸序列分析及同源性检索表明 ,其中一个与ABP2 80 (actin bindingprotein 2 80 )有高度同源性 .细胞免疫共沉淀实验结果显示 :在哺乳动物细胞水平仍能够检测到apoptin与ABP2 80片段的特异的相互作用 .分别构建缺失C端 11个氨基酸、中间 33～ 46位氨基酸和二者均缺失的apoptin的 3个突变体 ,突变体与ABP2 80相互作用研究表明 :apoptin的 33～ 46位氨基酸 (核外运信号 )对于apoptin与ABP2 80的相互作用是必需的 ,而C端核定位信号 /DNA结合序列对于apoptin与ABP2
- 孙国敬童新孟祥兵董燕孙志贤
- 关键词：凋亡素酵母双杂交免疫共沉淀人白细胞CDNA文库
- γ射线诱发细胞程序性死亡的时间及剂量效应研究被引量：10
- 1996年
- 通过对辐射所致程序性细胞死亡（ＰＣＤ）的研究，揭示了射线诱发小鼠胸腺细胞ＰＣＤ生成的时间及剂量效应规律，采用不同的检测ＰＣＤ方法（ＤＮＡ片段分析法及流式细胞术），比较了不同组织的辐射敏感性差异。结果表明：照射后４～６ｈ诱发胸腺细胞ＰＣＤ生成最多。不同剂量照射，照后６ｈ取胸腺，发现２０Ｇｙ时胸腺细胞ＰＣＤ生成最多。脾、胸腺对辐射敏感，小剂量（１Ｇｙ）即可检测到ＰＣＤ形成；而心脏、大脑、肾对射线不敏感，照射１０Ｇｙ以上时，才能检测到ＰＣＤ。
- 童新董燕张双喜孙志贤
- 关键词：程序性细胞死亡Γ射线
- γ-射线诱导HL-60细胞凋亡的形态学研究被引量：5
- 1999年
- 目的 观察γ－射线诱导ＨＬ－６０ 细胞凋亡的形态学变化。 方法 应用Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光显微镜及透射电子显微镜进行观察。 结果 γ－射线诱导ＨＬ－６０ 细胞死亡的主要方式是凋亡，凋亡细胞具有典型的形态特征，细胞核染色质凝集边聚；发现细胞核经多种形式形成核碎块；并可见具有不同内含物的凋亡小体；内质网增多，参与形成核碎块。 结论 同一因素诱导同一细胞凋亡，细胞核的变化可有多种形式。γ－射线诱导Ｋ５６２和ＣＥＭ 细胞凋亡的形态学变化与ＨＬ－６０ 细胞的不同，反映出同一因素诱导不同细胞凋亡的途径有一定的差异。
- 李小明宋天保童新孙志贤
- 关键词：细胞凋亡HL-60细胞形态学白血病Γ射线
- 靶向Survivin的反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖的抑制作用被引量：20
- 2001年
- Survivin是新近克隆的一种凋亡抑制蛋白 (IAP)家族成员 ,在几乎所有肿瘤组织中特异性表达 ,而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达 .采用四唑盐 (MTT)比色实验法比较 2 0条抗人survivin反义寡核苷酸对HeLa细胞增殖的抑制效果 ,并从中筛选效果显著的反义寡核苷酸 ,在体外水平进一步验证其抑制survivin表达的能力 .在用 4 0 0nmol L反义寡核苷酸转染HeLa细胞 4 8h后 ,有 4条反义寡核苷酸对细胞增殖的抑制率超过 4 0 %,其中 4 5号反义寡核苷酸的抑制率可达5 9%,而阳性对照序列ISIS2 372 2的抑制率仅达 30 %.Northern和Western印迹分析证明 :4 5号反义寡核苷酸可明显降低细胞中survivin基因的mRNA含量和蛋白水平 .4 5号反义寡核苷酸还可在较低浓度 (2 0 0nmol L)显著增强HeLa细胞对化疗药三尖杉酯碱的敏感性 .因此 ,4
- 王治梅柱中童新董燕李青山孙志贤
- 关键词：靶向SURVIVIN反义寡核苷酸肿瘤细胞增殖IAP凋亡抑制蛋白
- 毛细血管扩张性共济失调突变蛋白在细胞凋亡过程中被Caspase┐3降解被引量：5
- 1998年
- 新近的研究揭示：ｃａｓｐａｓｅ蛋白酶在细胞凋亡中起着死亡执行者的重要功能．一些蛋白相继被证明在细胞凋亡中可被ｃａｓｐａｓｅ特异切割，其中参与ＤＮＡ损伤修复过程的聚ＡＤＰ核糖聚合酶（ＰＡＲＰ）以及ＤＮＡ依赖的蛋白激酶（ＤＮＡ－ＰＫ），在细胞凋亡过程中被ｃａｓｐａｓｅ选择性切割具有特殊的功能意义．为探索与ＤＮＡ－ＰＫ催化亚基有较高同源性，含有ｃａｓｐａｓｅ切割位点，且功能上目前也被认为是感受ＤＮＡ损伤和参与信号传导途径的ＡＴＭ（Ａｔａｘｉａｔｅｌａｎｇ－ｉｅｃｔａｓｉａｍｕｔａｔｅｄ）蛋白，是否在凋亡过程中也可被切割而降解？应用体外转录与翻译系统获得ＡＴＭ蛋白的ＰＩ３Ｋ结构域，同时通过建立无细胞反应体系获得含ｃａｓｐａｓｅ活性的细胞抽提液，将两者在体外共同保温．结果发现：ＡＴＭ蛋白与ｃａｓｐａｓｅ－３能免疫共沉淀，ＡＴＭ蛋白的ＰＩ３Ｋ结构域可被ｃａｓｐａｓｅ－３特异切割，并观察到辐射诱发细胞调亡中ＡＴＭ蛋白的降解．从而进一步证实了ＤＮＡ损伤修复的抑制，促进细胞凋亡的发生．
- 童新孟祥兵董燕孙志贤
- 关键词：CASPASE-3细胞凋亡DNA损伤修复ATM
