肖慈英
- 作品数：32 被引量：18H指数：2
- 供职机构：华东理工大学更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程生物学医药卫生化学工程更多>>
- 内源信号肽DSE4介导头孢菌素C酰化酶在毕赤酵母中的分泌表达被引量：1
- 2015年
- 头孢菌素C(CPC)酰化酶可用于一步酶法合成7-氨基头孢烷酸(7-ACA)。对来自Pseudomonas sp.Strain SE83的高活性CPC酰化酶突变基因进行基于毕赤酵母偏好密码子优化,获得基因SECA。选取毕赤酵母内源信号肽DSE4,构建表达菌G/DSECA,首次在毕赤酵母中分泌了CPC酰化酶。与酿酒酵母α-交配因子前导肽(α-factor)相比,DSE4介导SECA的分泌表达效果更优,其介导SECA表达的胞内、外单位体积酶活分别比α-factor高65%和44%。分别以DSE4和α-factor为信号肽构建β-半乳糖苷酶表达菌G/DSEL与G/MFL,进一步考察DSE4介导异源蛋白的分泌效果,G/DSEL的胞内外单位体积酶活也均高于G/MFL。
- 丁璐妹肖慈英储炬钱江潮张嗣良
- 关键词：毕赤酵母分泌表达Β-半乳糖苷酶
- 一种提高土霉素产量的方法
- 本发明公开了一种提高土霉素产量的方法。本发明通过增加土霉素合成途径中三个酶的合成基因在细胞中的表达，以此促进土霉素合成途径的前体——四环素碳骨架的形成，提高土霉素合成途径的碳源通量，从而提高龟裂链霉菌中土霉素的产量。
- 郭美锦张嗣良于岚颜湘云王龙储炬庄英萍肖慈英
- 文献传递
- 龟裂链霉菌工业菌中zwf1基因的阻断对土霉素生物合成影响被引量：3
- 2012年
- 目的运用代谢工程手段对龟裂链霉菌工业菌(Industrial Streptomyces rimosus,SRI)进行基因改造,提高土霉素(oxytetracycline,OTC)产量。方法利用pKC1139质粒阻断SRI基因组中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase)编码基因zwf1。结果筛选得到一株OTC高产突变株,将突变株与原始菌株进行发酵,发现OTC产量比原始菌株提高了36.2%。结论 SRI基因组中zwf1基因的缺失使细胞合成土霉素的能力增强;龟裂链霉菌中初级代谢关键基因调控会影响次级代谢。
- 郑子静于岚唐振宇郭元昕肖慈英郭美锦
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因阻断
- K^+/Na^+浓度比对罗汉果悬浮细胞生长和甜苷V合成的影响
- 2018年
- 本文研究了不同K^+/Na^+浓度比对罗汉果悬浮细胞生长和甜苷V合成的影响。结果表明,合适的K^+/Na^+浓度比促进细胞生长和甜苷V生物合成。当K^+/Na^+最佳浓度比为15:1时,罗汉果悬浮细胞内K^+浓度、K^+/Na^+、S_((K,Na))值均为最大,此时细胞利用K^+效率最高,细胞生长速率最快。此外,胞外有机酸和胞内氨基酸的变化表明此浓度比例下,细胞可能通过降低TCA循环代谢强度,以及增强EMP途径和MVA途径代谢强度,从而促进萜类化合物前体乙酰Co A向罗汉果甜苷V合成。
- 陈雨霞王泽建肖慈英庄英萍宋云飞郭美锦
- Streptomyces rimosus M4018中氧化应激转录抑制因子Rex的克隆表达及与rex操纵子的体外结合活性
- 2012年
- 【目的】为了研究龟裂链霉菌Streptomyces rimosus M4018中的rex基因对自身rex operator(ROP)的调控机制。【方法】根据天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)中rex基因的同源序列设计引物进行PCR,从S.rimosus M4018中获得其rex基因(Sr-rex)。同时,通过染色体步移的方法,获得其上游的ROP序列。采用体外凝胶迁移的方法,分析了Sr-Rex对ROP的调控作用。【结果】获取的Sr-rex基因核苷酸序列长度为846 bp,预测的编码氨基酸序列与S.coelicolor A3(2)中Rex的同源性为84%,获得GenBank登录号:GQ849479。圆二色光谱显示Sr-Rex的结构以α螺旋和β折叠为主,与软件预测相符。凝胶迁移实验表明,Sr-Rex能与S.rimosus M4108中扩增到的ROP片段特异性结合。同时,以Rex:ROP的最小结合序列为基础,设计了一条22 bp的单链DNA片段,和Sr-Rex的最大结合摩尔浓度比约为5:1。高浓度的NADH抑制两者的结合活性,而NAD+对结合没有影响。【结论】在S.rimosus M4108中,Rex是通过响应胞内NAD(H)水平的方式来调控ROP的表达的。
- 沈晶唐振宇肖慈英郭美锦
- 关键词：龟裂链霉菌氧化应激基因克隆和表达
- 基于代谢调控高产土霉素的方法
- 本发明涉及基于代谢调控高产土霉素的方法。本发明公开了一种在龟裂链霉菌中通过调控土霉素合成途径提高土霉素产量的方法，通过增加一个或多个土霉素生物合成途径的调控因子的拷贝数，从而提高土霉素合成途径中相关基因的表达水平，进而提...
- 郭美锦张嗣良于岚王龙颜湘云储炬庄英萍肖慈英
- 文献传递
- 调节目标蛋白表达的折叠因子及其应用
- 本发明涉及调节目标蛋白表达的折叠因子及其应用。本发明揭示了一类新的折叠因子，其可以在酵母细胞中有效地调节外源蛋白的表达，特别是分泌表达。
- 钱江潮段广东魏东升王志朋储炬庄英萍张嗣良肖慈英陶丽媛
- 文献传递
- 亚氨基噻唑烷类化合物的新用途
- 本发明涉及2，3‑二取代亚氨基噻唑烷类化合物(式I所示化合物)的一种新用途：即式I所示化合物作为抑制植物病原菌中草酰乙酸酶活力的抑制剂(或作为抑制植物病原菌合成草酸的抑制剂)的应用，及作为苯并咪唑类杀菌剂、二甲酰亚胺类杀...
- 黄青春丰俊郓新明饶文兵肖慈英徐志康郎佳琳
- 基于易错PCR技术的红酵母D-氨基酸氧化酶的定向进化被引量：1
- 2014年
- 采用易错PCR技术对来源于红酵母Rhodotorula gracilis的D-氨基酸氧化酶基因(RgDAAO)进行突变,构建并优化了突变株文库;结合48深孔板的高通量筛选方法,获得突变株M3217,其V_(max)相对于野生型提高了16.8%。对测序结果进行分析,发现突变酶基因序列中有5处点突变,其中3处发生了氨基酸置换,分别为:D242V/Q253R/D304V。利用Swiss-Model对突变株M3217进行三维结构模拟,结果显示所有突变位点都不在催化活性中心的附近,特别是V304的位置在连接F5和F6两个β折叠股的长loop环上。推测D304V这一突变位点很可能增强了RgDAAO二聚体形态的稳定性,或是增强了与辅酶FAD的结合能力,从而间接提高了全酶的催化活力。
- 孙晨肖慈英郭美锦储炬张嗣良
- 关键词：易错PCR定向进化高通量筛选
- 毕赤酵母内源信号肽及其应用
- 本发明涉及毕赤酵母内源信号肽及其应用。揭示了一系列毕赤酵母内源信号肽，这些信号肽可实现指导目的基因的分泌表达。本发明的信号肽可分离地存在或可被构建为一个文库。
- 钱江潮丁璐妹张嗣良肖慈英储炬庄英萍
- 文献传递
