肖荣
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
- 供职机构：罗格斯大学更多>>
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- 相关领域：生物学理学更多>>
- 一种新的高立体选择性羰基还原酶的性质及分离被引量：16
- 2006年
- 从近平滑假丝酵母(CandidaparapsilosisCCTCC203011)中分离得到了新的NADPH依赖型羰基还原酶。粗酶经硫铵分级沉淀、DEAESepharose离子交换层析、Phenyl-sepharoseFF疏水层析、BlueSepharoseFF亲和层析后在SDS-PAGE上显示为单一条带,其酶蛋白的相对分子质量为30kD。该酶还原反应的最适pH值为4.5,最适温度为35℃,Cu2+对羰基还原酶有强烈的抑制作用。该酶具有较高的底物专一性和立体选择性,对α-羟基苯乙酮和4-氯乙酰乙酸乙酯具有较高的不对称还原活力,其产物分别为(S)-苯基乙二醇和(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯,e.e值分别为100%和94.3%。因此该酶蛋白是不对称合成手性醇有效的生物催化剂之一。经LC-MASS-MASS分析得到了酶蛋白中一个肽段的氨基酸序列,通过比对发现该酶与假定蛋白(hypotheticalproteinCaO19.10414)具有一定的同源性。
- 羊明徐岩穆晓清肖荣
- 关键词：生物催化羰基还原酶分离纯化
- 近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶基因的克隆与表达被引量：7
- 2006年
- 根据纯化得到的(R)-专一性羰基还原酶(rCR)蛋白质测序结果推导出的核苷酸序列设计引物,以筛选得到的近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)CCTCC M203011基因组为模板,通过PCR扩增目的片段,克隆后测序。核苷酸序列测定结果表明rcr基因全长1011bp,共编码336个氨基酸,分子量为35·9kD。将序列递交NCBI比对,与醇脱氢酶超家族成员序列同源性达99%。在大肠杆菌(Escherichia coli)JM109中表达rcr基因,重组菌可还原β-羟基苯乙酮得到(R)-苯乙二醇,光学纯度为100%e·e,摩尔产率为80·4%,在反应体系中无需外加辅酶再生系统即可完成转化。
- 许娜王海燕聂尧徐岩肖荣
- 关键词：羰基还原酶
- 新型醛酮还原酶不对称转化制备(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺被引量：2
- 2014年
- 生物催化具有反应条件温和、绿色环保、高立体选择性等优点,已成为制备光学活性度洛西汀的重要方式和途径,但仍存在有效的生物催化剂数量有限和反应效率低等问题,基因组数据库的发展为新型立体选择性生物催化剂的开发提供了有效的途径和平台。本研究通过基因组信息挖掘,从Candida parapsilosis CCTCCM203011中发现了8个新型的醛酮还原酶,分析研究不同的醛酮还原酶对N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)的催化还原能力,发现CPAR4能够高立体选择性地催化还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DHTP)。通过粗酶体系反应参数的优化,CPAR4催化还原底物浓度在3g/L时,产率达到94.5%,光学纯度大于99.9%ee;当底物浓度为5g/L时,产率仍达到70%以上。该重组菌粗酶液能够高立体选择性地生物还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-DHTP,具有一定的应用潜力。
- 郭荣云聂尧穆晓清徐岩肖荣
- 关键词：醛酮还原酶
- 定点突变提高克雷伯氏菌普鲁兰酶的耐酸性被引量：2
- 2016年
- 通过分析Klebsiella variicola SHN-1普鲁兰酶的活性中心,并将K.variicola SHN-1普鲁兰酶与来自K.pneumoniae,Bacillus acidopullulyticus,B.naganoensis的普鲁兰酶氨基酸序列进行同源性比较,确定了H626D、R756E、H852D、R908E、I619N、F723Y、S850T、K851S八个突变位点,采用定点突变的方法获得了8个突变酶,经过酶学性质分析,发现H852D的最适反应pH由原来的pH 5.0降低为pH 4.7,且在pH 4.5下的稳定性得到提高。通过同源建模及结构分析发现,852位点突变为天冬氨酸后与周围的氨基酸多形成了2个氢键,因此提高了结构的稳定性,且由于活性中心p Ka值的改变,造成了普鲁兰酶最适pH发生了迁移。
- 牟国翠聂尧穆晓清徐岩肖荣
- 关键词：普鲁兰酶定点突变耐酸性最适PH值
- 重组(R)-专一性羰基还原酶的表达、纯化及酶学性质
- 通过对近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶(rCR)进行氨基酸序列分析,根据其保守性利用PCR技术得到目的基因rcr.该基因全长1011bp,共编码336个氨基酸.通过构建重组质粒pETRCR,使目的基因在Escher...
- 聂尧徐岩王海燕许娜肖荣
- 关键词：还原酶羰基还原酶酶学性质基因表达
- 文献传递
- 立体专一性羰基还原酶
- 立体专一性羰基还原酶SCR1，SCR2，SCR3是本文中所述的编码这些还原酶的核苷酸序列。这些立体专一性羰基还原酶具有anti-Prelog选择性以及可用于精细生物化学合成的特异性。
- 盖塔诺·蒙泰莱奥肖荣聂尧徐岩
- 文献传递
- 重组大肠杆菌不对称还原2-羟基苯乙酮合成(R)-苯基乙二醇被引量：16
- 2006年
- 通过对近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶(rCR)进行氨基酸序列分析并根据其序列的保守性设计PCR引物,以近平滑假丝酵母基因组为模板利用PCR技术得到目的基因rcr。该基因全长1011bp,共编码336个氨基酸。将该基因与表达载体pET21c连接后构建重组质粒pETRCR,并转化入EscherichiacoliBL21(DE3)中进行表达。重组大肠杆菌具有(R)-专一性羰基还原酶活性,可催化不对称还原2-羟基苯乙酮合成(R)-苯基乙二醇。研究发现,在重组菌培养过程中,同添加IPTG诱导培养的情况相比,不添加IPTG诱导培养的酶活及不对称转化(R)-苯基乙二醇的效果较好。在反应过程中,转化48h及在pH值8～9的条件下更有利于不对称反应的进行。另外,较高的底物浓度会对反应产生抑制作用,通过提高重组菌细胞浓度可显著提高转化效果。在5g/L的底物浓度条件下,利用0.3g/mL重组菌细胞可还原2-羟基苯乙酮得到(R)-苯基乙二醇,产物光学纯度为95.5%e.e,产率为92.6%。
- 聂尧徐岩王海燕许娜肖荣
- 关键词：羰基还原酶重组大肠杆菌苯基乙二醇
- 新型异亮氨酸双加氧酶及其重组大肠杆菌合成羟基异亮氨酸被引量：4
- 2014年
- 异亮氨酸双加氧酶(IDO)可特异性的转化底物L-异亮氨酸(L-Ile)生成4-羟基-L-异亮氨酸(4-HIL),该产物具有促进胰岛素分泌的功能,可用于抗糖尿病、降胆固醇等。本研究结合了酶标显色和薄层层析(TLC)的方法从自然界中筛到了具有IDO活性的菌株,并将该菌株中的目的基因ido克隆到大肠杆菌中,获得重组表达菌株,并且验证该菌具有IDO的转化功能。本研究优化了转化反应体系和条件,同时通过30℃过夜温育菌体细胞的方法,使该菌株全细胞转化合成4-HIL的产率达到85%以上。
- 付敏杰聂尧穆晓清徐岩肖荣
- 关键词：异亮氨酸生物转化
- 羰基还原酶辅酶结合域位点突变对其不对称催化性能的影响被引量：1
- 2012年
- 基于同源模型的比较和分析,发现羰基还原酶SCR1辅酶结合域P124和W125位点对辅酶NADPH的结合形成了一定的空间位阻效应.通过对该位点进行小侧基氨基酸的取代突变,该酶的底物专一性和立体选择性均发生了不同程度的改变,表明该位点是酶与辅酶有效结合的关键位点,而且它与辅酶结合的空间效应进一步影响了底物结合域活性中心对不同构型的底物及其对映体产物的亲和作用.在底物专一性方面,野生型酶对2-羟基苯乙酮和2-溴苯乙酮及其衍生物等底物表现出较高的催化活性,而突变株W125A,W125G,P124A/W125A和P124G/W125G对苯乙酮及其部分衍生物和2-辛酮等底物的催化活性均有所提高.对于酶的立体选择性,部分突变株发生了转化产物对映体构型反转的现象,突变株P124A/W125A和P124G/W125G催化还原2-羟基苯乙酮和4-氯乙酰乙酸乙酯均生成了(R)-型产物.
- 宫绪敏聂尧徐岩肖荣Gaetano T.MONTELIONE
- 关键词：羰基还原酶定点突变底物特异性
- 立体专一性羰基还原酶
- 立体专一性羰基还原酶SCR1，SCR2，SCR3是本文中所述的编码这些还原酶的核苷酸序列。这些立体专一性羰基还原酶具有anti-Prelog选择性以及可用于精细生物化学合成的特异性。
- 盖塔诺·蒙泰莱奥肖荣聂尧徐岩
