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水稻RSSG8基因启动子与GUS融合基因的构建及在烟草中的瞬间表达被引量：4: 2004年; 使用染色体步移(Genomewalking)法,从籼稻(Oryzasativasubsp indica)桂朝2号基因组中克隆到长度为471bp的水稻精细胞优势表达基因RSSG8的启动子片段R8PN,并进行了全序列测定和分析该段序列中含有3个CAAT box,6个G box和多种植物顺式作用元件,但没有发现典型的TATA box,推测为一种特殊的启动子结构.为了鉴定RSSG8基因的基本启动子元件,将二条长度不同的5'端侧翼区缺失体(分别长471bp,260bp)定向插入载体pBI121中,取代原有的CaMV35S启动子,构了驱动报告基因GUS的植物表达载体pRGUS1,pRGUS2,通过农杆菌介导的瞬时表达法转化烟草叶片和花粉,快速鉴定启动子片段中起关键作用的区域.结果显示两个缺失片段都能启动GUS的表达,可以初步判定这两个片段具有启动子功能.; 龚举成苟小平徐莺唐琳王乔王治涛陈放; 关键词：启动子水稻 GUS基因

水稻精细胞cDNA文库的构建及分析(英文)被引量：21: 2001年; 利用Percoll密度梯度离心和多次滤膜过滤分离到适于分子生物学研究的水稻 (OryzasativaL .cv .Guichao2 )生活精细胞。借助RT_PCR和SMART技术构建了水稻精细胞的cDNA文库。初级文库的大小为 1.5 8× 10 6 pfu ,插入片段平均大小为 980bp。 10 3个随机挑选的克隆与DIG标记的水稻幼苗根、叶及二细胞时期花粉、成熟花粉、精细胞和授粉 5～ 7d的子房cDNA探针杂交表明 ,除少数克隆外 ,它们在上述器官中的表达情况很相似。 10个随机挑选的克隆用来测序及分析 ,有 4个克隆含有完整的开放阅读框。 1个克隆与水稻Polyubiquitin (Rubq1)mRNA高度同源。Northern杂交表明它在二细胞时期花粉、成熟花粉中的表达显著少于在根、叶和授粉子房中的表达。另一个克隆的开放阅读框编码与拟南芥 (Arabidopsisthaliana (L .)Heynh .)AtRAD17同源的蛋白。这是第一次正式报道高等植物精细胞cDNA文库的构建 ,也是第一次从高等植物精细胞中分离到其表达的基因。; 苟小平徐莺唐琳颜钫陈放; 关键词：CDNA文库精细胞水稻

水稻精细胞基因RSSG58的分子克隆和表达(英文)被引量：3: 2003年; 以水稻 (OryzasativaL .)精细胞与二细胞花粉的差减文库中得到的在精细胞中优势表达的克隆作为探针 ,筛选水稻精细胞cDNA文库 ,得到对应的两个全长cDNA克隆。序列分析表明两个全长cDNA阳性克隆长度分别为2 2 78bp和 2 4 37bp ,共同拥有一个由 5 79个氨基酸组成的开放读码框 ,分子量为 6 6 .7kD ,等电点为 4 .885。在Gen Bank中比较显示与拟南芥的肌球重链蛋白有一定的同源性 (46 % ) ,并具有肌球蛋白特色的结构域。资料显示肌球蛋白在高等植物生殖发育过程中起着重要作用。Southern杂交结果表明此基因在水稻基因组中以单拷贝形式存在。Northern杂交结果显示RSSG5 8基因在水稻精细胞中表达量很高 ,在其他组织和细胞中未检测到表达 ,同时还表明在精细胞中存在两类大小不同的转录本。用更为灵敏的RT_PCR方法进行检测分析表明此基因在叶、花粉母细胞期幼穗、单细胞花粉、二细胞花粉、成熟花粉、授粉子房和精细胞中均有表达 ,但在精细胞中表达量远远高于其他组织细胞。; 苗琛苟小平兰利琼鲍锦库徐莺王胜华陈放; 关键词：分子克隆精细胞水稻

用离体培养无性繁殖苦瓜被引量：35: 1999年; 切取由苦瓜种子形成的试管苗的顶芽及带芽茎段，移植于附加４～６ｍｇ／ＬＺＴ或４～６ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的ＭＳ培养基上，可以促进芽的增殖，形成芽簇，每月每株可增殖４苗；移植于附加４ｍｇ／ＬＺＴ及０．５ｍｇ／ＬＫＴ或附加４ｍｇ／ＬＺＴ及ＬＨ（水解乳蛋白）的培养基上，每月每株可增殖５苗．将幼苗接转于ＭＳ＋ＺＴ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上，生长健壮．丛芽生根选用大量元素减半的ＭＳ培养基，蔗糖浓度为２％效果最好，生根率达８０％，移栽成活率为８０％．; 唐琳苟小平陈放贾勇炯; 关键词：苦瓜芽培养无性繁殖离体培养

水稻精细胞差异表达基因RSG6的克隆和初步研究(英文)被引量：1: 2003年; 用水稻 (OryzasativaL .)精细胞优势表达克隆BF4 75 2 0 7为探针 ,筛选水稻精细胞cDNA文库 ,得到一全长为1176bp的序列 ,其开放读码框编码 2 81个氨基酸 ,与已知蛋白质无明显同源性 ,属于一新发现的基因 ,GenBank登录号为AF4 4 2 4 90。Southern杂交显示该基因可能含有内含子。RT_PCR结果显示该基因在根、叶、二细胞花粉、成熟花粉、授粉子房和精细胞中均有表达 ,但在精细胞中的表达量要高得多 ,是精细胞差异表达基因。将此基因命名为RSG6 (ricespermgene 6 )。将RSG6的编码区克隆到表达载体pQE30上 ,构建重组质粒。在大肠杆菌M15中表达出N端融合了 6×His的融合蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔 ,制得高效价。; 白彧徐莺唐琳颜钫苟小平陈放; 关键词：精细胞克隆水稻

水稻生活精细胞的分离及细胞学观察被引量：12: 1999年; 近１０多年来已经成功分离得到白花丹［１］、玉米［２，３］、百合［４］等植物的精细胞，并建立起玉米的离体受精实验体系［５，６］。但水稻作为我国和世界重要的粮食作物，迄今未见有类似工作的报道。本文采用渗透压冲击法成功分离得到水稻的生活精细胞。１材料和方法...; 苟小平王胜华陈放; 关键词：水稻精细胞

水稻精细胞的超微结构被引量：2: 2001年; 在稻成熟花粉粒中 ,精细胞被不连续的电子透明的周质空间所包围 .纵切面上显示的精细胞具显著的由细胞质延伸形成的尾状结构 ,主要为长圆形的细胞核所占据的一端为头部 .精细胞中具一般的细胞器 ,其中线粒体主要位于头部、微丝成束与细胞纵轴平行排列 .观察表明 ,在水稻成熟花粉中具有雄性生殖单位 ,两个精细胞以尾部紧密连接。; 苟小平唐琳颜钫陈放; 关键词：超微结构花粉水稻

水稻精细胞差异表达基因RSG6的克隆和抗体制备被引量：5: 2002年; 选用在水稻精细胞和二细胞花粉的差减文库中获得的在精细胞中表达量显著增强且可能代表新基因的EST之一 (BF4 75 2 0 7)为探针 ,筛选水稻精细胞cDNA文库 ,得到一全长为 1176bp的序列 ,其开放读码框编码 2 81个氨基酸 ,与已知蛋白质无明显同源性 ,属于一新发现的基因 ,GenBank登录号为AF4 4 2 4 90 .这是第 1次从高等植物精细胞中分离到的全长基因 .RT PCR结果证明该基因在根、叶、二细胞花粉、成熟花粉、授粉子房和精细胞中均有表达 ,但在精细胞中的表达量要高得多 ,是精细胞差异表达基因 .将此基因命名为RSG6 (ricespermgene6 ) .将RSG6的编码区克隆到表达载体pQE30上 ,构建重组质粒 .经IPTG诱导后 ,在E .coliM15 (pREP4 )中表达出了N端融合了 6×His的融合蛋白 .用纯化的融合蛋白免疫家兔 ,制得高效价。; 白彧苟小平徐莺颜钫唐琳陈放; 关键词：水稻精细胞克隆抗体制备融合蛋白抗血清

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苟小平