范慧
- 作品数：13 被引量：42H指数：3
- 供职机构：北京大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 重组人PDCD5蛋白对干扰素γ诱导人宫颈癌SiHa细胞凋亡的增敏作用的初步探讨被引量：21
- 2004年
- 目的 初步探讨重组人PDCD5蛋白对干扰素γ诱导人宫颈癌SiHa细胞凋亡的增敏作用。方法人宫颈癌SiHa细胞培养于含 1× 1 0、 1× 1 0 2 、 1× 1 0 3 、 1× 1 0 4IU/ml浓度的IFNγ的无血清培养基中 ,培养 2 0、 2 4、4 8、 72h ,以MTT法指征细胞增殖程度 ,选择适宜的作用浓度及时间。将不同浓度的rhPDCD5蛋白与选定浓度的IFNγ同时加入SiHa细胞中共同培养 ,以AnnexinV -PI标记进行流式细胞仪分析 ,检测细胞凋亡程度。结果 单次给予不同浓度的IFNγ ,培养 2 0h ,与对照组相比 ,1× 1 0 3 组、 1× 1 0 4组的MTT值显著下降 (P <0 0 5 ) ,同时测定细胞凋亡率发现 ,1× 1 0 2 、 1× 1 0 3 、 1× 1 0 4IU/mlIFNγ组SiHa细胞的凋亡率分别为 5 6 7%、 1 2 91 %、 2 0 88% ,随干扰素的浓度上升而增加。 1× 1 0 3 IU/mlIFNγ组加入 1 0、 2 0mg/LrhPDCD5蛋白后细胞凋亡率为 2 4 74 %、2 6 89% ,1× 1 0 4IU/mlIFNγ组加入 1 0、 2 0mg/LrhPDCD5蛋白后细胞凋亡率为 32 6 9%、 32 2 7%。结论干扰素可能通过诱导凋亡而抑制SiHa细胞的生长。rhPDCD5蛋白对干扰素γ诱导人宫颈癌SiHa细胞系凋亡有增敏作用。
- 张岱刘朝晖李克敏范慧廖秦平
- 关键词：IFNΓPDCD5干扰素Γ蛋白增敏作用
- 应用GM-CSF治疗恶性肿瘤化疗后白细胞减少的临床研究被引量：1
- 1995年
- 本文研究总结了北医联合生物工程公司研制的GM-CSF,应用于恶性肿瘤化疗引起的白细胞减少12例,其白细胞减少时间较对照组缩短5天。对合并感染的病人有较明显的抗感染作用,降低了抗生素的作用时间。临床应用常规剂量未发生明显副作用。是肿瘤根治性化疗的抢救、保驾药品。
- 单学健王东林刘宝江徐富蒋志林朱仁英范慧宋东光范中玉
- 关键词：白细胞减少GM-CSF化疗后恶性肿瘤生物工程
- 重组凋亡相关蛋白PDCD5的纯化及稳定性被引量：1
- 2003年
- 目的 :建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白PDCD5的纯化路线 ,获得高纯度的PDCD5蛋白 ,并观察其稳定性。方法 :以包涵体形式表达的PDCD5融合蛋白 ,经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、DEAESepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0两步层析分离获得PDCD5蛋白。选用毛细管电泳方法检定蛋白质纯度 ,SDS -PAGE检定蛋白质的稳定性。结果 :经毛细管电泳方法检测PDCD5蛋白纯度为 10 0 % ,相对分子质量 15 80 0 ,等电点 5 .9。生物学活性分析PDCD5蛋白能够促进撤除细胞因子的HL 6 0细胞的凋亡 ,呈现一定的量效关系。稳定性研究发现储藏中的PDCD5蛋白不稳定 ,对温度敏感 ,4℃和 2 5℃极易降解 ,而 - 2 0℃和冻干保存则相对稳定。结论 :本研究建立的蛋白纯化方法可以获得大量、高纯度PDCD5蛋白。稳定性实验提示PDCD5宜在 - 2 0℃以下或冻干保存。
- 王露范慧莫晓宁张颖妹魏征人钟英成黄大无
- 关键词：PDCD5纯化稳定性HL-60细胞
- CMTM1－v17的新应用及其拮抗剂
- 本发明涉及CMTM1－v17作为一个新的靶标在诊断和/或治疗癌症中的应用、CMTM1－v17的拮抗剂在诊断和/或治疗癌症药物中的应用以及检测CMTM1－v17表达的试剂在制备用于检测癌症的组合物中的应用。
- 王露马大龙王京范慧崔扬
- 文献传递
- 枸橼酸酐对原核表达重组GM－CSF的修饰作用被引量：1
- 1996年
- 根据枸橼酸酐对蛋白质中的游离氨基进行化学修饰后可使蛋白质溶解度提高的原理，以大肠杆菌表达的人重组ＧＭ－ＣＳＦ为模型，研究了枸橼酸酐修饰对含凝血酶识别位点的融合蛋白的作用，发现用微量枸橼酸酐修饰的重组ＧＭ－ＣＳＦ变性、复性更容易，溶解度明显提高，并对凝血酶的消化更为敏感，使凝血酶用量降低１００倍．ＧＭ－ＣＳＦ活性测定结果证明枸橼酸酐修饰不影响其生物学活性．这些结果为枸橼酸酐修饰法在大肠杆菌表达重组蛋白纯化中的应用提供了新途径．
- 冯丹袁勇张颖妹冯岚范慧狄春辉宋泉声马大龙
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF
- 人重组粒细胞集落刺激因子突变体rhG-CSF-Ala-17的纯化及部分理化性质被引量：7
- 2000年
- 目的 :建立高效简便的人重组粒细胞集落刺激因子突变体rhG CSF Ala 17纯化工艺 ,并对其进行鉴定。方法 :大肠杆菌表达的rhG CSF Ala 17经包涵体洗涤、变性复性后 ,采用DEAESepharoseFastFlow阴离子交换层析和Superdex75凝胶过滤层析分离纯化。经SDS PAGE和FPLC检测纯度 ,并进行N端氨基酸序列分析、比活性分析、紫外最大吸收光谱分析、内毒素检测等指标对其进行鉴定。结果 :纯化后的rhG CSF Ala 17纯度可达99.6 4% ,比活为 1× 10 8U·mg-1。其N端 19个氨基酸分析与预期序列一致 ,紫外最大吸收光谱位于 2 80nm ,氨基酸的组成与预期结果一致 ,内毒素含量低于部颁标准。结论 :两步层析即可获得高纯度的rhG CSF Ala 17重组蛋白质 ,为进一步的rhG CSF Ala
- 范慧莫晓宁张颖妹杨璐宋泉声范中玉马大龙
- 关键词：点突变粒细胞集落刺激因子
- 髓样造血抑制因子(MPIF)存在一种新的mRNA剪切变异体
- 2003年
- 目的 克隆并原核表达趋化因子 ,研究其结构与功能。方法 RT PCR技术 ,DNA测序和计算机网上比对 ,DNA重组及原核表达技术 ,离子交换层析技术 ,半固体骨髓集落培养。结果 在利用RT PCR扩增趋化因子MPIF 1的过程中发现存在一种新的变异体形式。该变异体比MPIF 1多5 1个碱基 ,编码的蛋白质比MPIF 1长 17个氨基酸 ,基因定位于人类第 17号染色体上 ,其序列符合内含子和外显子的剪切规律 ,因而很可能为MPIF 1的mRNA不同剪切形式 ,将其命名为MPIF 1β。应用DNA重组技术构建原核表达质粒PKPL MPIF 1β ,转化大肠杆菌 ,诱导表达 ,获得重组蛋白。SDS PAGE表明MPIF 1β的表达效率达 15 % ,相对分子质量 (Mr)约为 (14～ 15 )× 10 3。功能研究表明 ,MPIF 1β有抑制小鼠骨髓集落形成的作用。结论 MPIF 1β是与MPIF 1功能类似的新变异体。
- 莫晓宁范慧张颖妹曹丽钟英成马大龙
- 关键词：MPIF趋化因子变异体原核表达
- 重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性被引量：3
- 2002年
- 目的 :提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性。方法 :利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA ,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区 (HSA D3)的融合蛋白表达质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。分别对Klenow酶和Klenow HSA融合蛋白进行纯化 ,并进行活性及稳定性的研究。结果 :发现Klenow HSA融合蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达。体外实验证实这种融合蛋白具有与Klenow聚合酶相同的活性 ,其稳定性明显提高。结论 :融合蛋白确实能增加Klenow酶的热稳定性和储存稳定性 。
- 曾令娥黄晶白惠卿范慧黄大无王露
- 关键词：DNA聚合酶人血清白蛋白DNA聚合酶I
- CMTM1-v17的新应用及其拮抗剂
- 本发明涉及CMTM1-v17作为一个新的靶标在诊断和/或治疗癌症中的应用、CMTM1-v17的拮抗剂在诊断和/或治疗癌症药物中的应用以及检测CMTM1-v17表达的试剂在制备用于检测癌症的组合物中的应用。
- 王露马大龙王京范慧崔扬
- 文献传递
- 应用粒-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)治疗恶性肿瘤化疗后白细胞减少的临床研究
- 1995年
- 本文总结了北医联合生物工程公司研制的GM-CSF用于恶性肿瘤化疗引起的白细胞减少的临床研究。全组12例，男性7例，女性5例，年龄8～68岁，其中原发性支气管肺癌BN4M2M0 1例、T3N2M0 1例、T3N6M0 2例均行肺切除术；左肾移行上皮癌行肾切除术后肺转移1例；胃癌行胃大部切除术后1例；直肠癌术后1例，
- 单学健王东林刘宋江徐宙蒋志林朱仁范慧宋东光范中玉
- 关键词：GM-CSF白细胞减少化疗后粒-巨细胞集落刺激因子恶性肿瘤
