范清林
- 作品数：52 被引量：181H指数：7
- 供职机构：安徽安科生物工程(集团)股份有限公司更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金安徽省科技攻关计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程经济管理更多>>
- 重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白的稳定性研究被引量：6
- 2008年
- 研究重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白(rHSA-IFNα-2b)的稳定性。以抗病毒活性和纯度为主要检测指标,考察rHSA-IFNα-2b的热稳定性,酸碱稳定性以及冻融耐受性。rHSA-IFNα-2b在37℃、55℃下放置5h后生物学活性无明显降低,60℃水浴1h即可见活性降低了约40%;pH值(分别为2、3、9)改变时,生物学活性未发生明显变化;rHSA-IFNα-2b反复冻融后聚合体逐渐增加,冻融4次后聚合体含量达到17.91%,但生物学活性无明显降低。重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白对热、酸碱变化稳定,但不宜冻融。
- 夏毅范清林邹文艺黄辉宋礼华
- 关键词：热稳定性
- 人TRAIL基因的克隆、表达纯化及对人A549细胞的抗肿瘤作用及其部分机制
- 本实验选择了人肺腺癌A549细胞瘤株作为我们实验研究的对象，通过TRAIL对人肺腺癌A549细胞诱导凋亡研究，在A549的荷瘤裸鼠的动物模型上研究了其体内的抗肿瘤活性，并进一步研究了TRAIL与化疗药物放线菌素D(act...
- 范清林
- 关键词：人肺腺癌化疗药物抗肿瘤作用
- 瑞替普酶融合蛋白的表达、纯化及分子伴侣对其复性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的构建瑞替普酶(r-PA)融合蛋白的原核表达体系,并研究DsbA、DsbC、pKJE7、pGro7、pTf16等分子伴侣对其复性的影响。方法将r-PA基因克隆到表达载体质粒PET-32a中,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在宿主菌E.coli BL21中进行表达。在复性时分别添加不同分子伴侣,研究不同分子伴侣对融合蛋白体外复性的影响。结果SDS-PAGE和Western blot结果表明r-PA融合蛋白正确表达,分子伴侣DsbA、pKJE7、pTf16对融合蛋白的复性有明显效果,体外溶圈实验表明复性后的r-PA具有纤溶活性。结论分子伴侣能有效帮助r-PA融合蛋白的复性。
- 王伟邹文艺范清林宋礼华
- 关键词：瑞替普酶融合蛋白分子伴侣复性
- 分泌型重组人生长激素的研制被引量：8
- 1999年
- 从人脑垂体组织中克隆了人生长激素基因并构建了分泌型表达基因工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＫ８０２／ｐＡＶＧＨ。研制的ｒｈＧＨ中试产品。
- 宋礼华桂向东范清林魏跃武姚红谊王荣海傅永标杨少民康勇
- 关键词：分泌型重组人生长激素基因克隆
- 利用大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶去除重组人干扰素-α2b N端的起始甲硫氨酸被引量：1
- 2012年
- 目的构建重组大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶(re-MAP)的原核表达体系,并利用表达的reMAP切除重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)N末端的初始甲硫氨酸。方法将PCR扩增得到的大肠杆菌MAP基因克隆到表达载体质粒pACYCDuet-1中,并在宿主菌E.coli BL21中通过IPTG诱导进行可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot分析及活性检测后,通过两种方法作用rhIFN-α2b:①将纯化后reMAP和rhIFN-α2b在体外适当的缓冲液中作用;②构建reMAP和rhIFN-α2b的共表达体系,实现在细胞内对rhIFN-α2b进行作用,并对两种作用方式的结果进行比较。结果 reMAP和rhIFN-α2b均得到正确表达,酶活性检测结果表明reMAP具有水解N端甲硫氨酸的活性,两种方法作用后的rhIFN-α2b经氨基酸序列测定后显示N端起始甲硫氨酸均被切除,其中体内作用切除率>94%、体外作用切除率>96%。结论 reMAP可以用于rhIFN-α2b N末端的初始甲硫氨酸的切除。
- 王中安邹文艺刘磊范清林宋礼华
- 关键词：干扰素-Α2B基因表达大肠杆菌
- 重组人粒细胞集落刺激因子的表达、纯化以及PEG修饰被引量：4
- 2008年
- 重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)经大肠杆菌温度诱导表达后,其表达产物以包涵体形式存在,包涵体经过变性、复性和分离纯化等步骤处理后得到纯化的rhG-CSF。在一定的实验条件下用单甲氧基聚乙二醇活性酯(mPEG20k-NHS)对rhG-CSF进行化学修饰,所得修饰产物经分离纯化后获得PEG20K-rhG-CSF偶联物。与修饰前的rhG-CSF相比较,尽管修饰后的rhG-CSF体外生物学活性下降至修饰前的20%左右,但其在体内的作用时间能够得到显著的延长,药效有了明显提高。
- 张兵邹文艺戎隆富范清林宋礼华
- 关键词：重组人粒细胞集落刺激因子纯化生物学活性
- 抗PD-L1与OX40双特异性抗体及其用途
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及抗PD‑L1与OX40双特异性抗体，可以增强T效应细胞的免疫刺激、促进细胞因子分泌的抗OX40和PD‑L1抗体，所述抗体在小鼠肿瘤模型中表现出了显著的肿瘤抑制效果。所述双特异性抗体，包括具...
- 刘浩许文娟徐婷周伟崔智强叶洪涛鲍文英范清林宋礼华
- 抗PD-L1与TIGIT双特异性抗体及其制备与应用
- 本发明公开提供了对人PD‑L1、TIGIT两种抗原具有特异性结合的双特异性抗体。在实施案例中，双特异性抗体包括重链和轻链结构域，在重链N端或者C端连接ScFv。其中IgG结构域对第一抗原有结合的特异性，scFv部分对第二...
- 周伟徐婷叶洪涛杨文静许文娟崔智强范清林宋礼华
- 文献传递
- 一种抗hu-OX40抗原的纳米抗体及其应用
- 本发明属于生物技术领域，具体一种抗hu‑OX40抗原的纳米抗体，所述抗体为单克隆纳米抗体，包括重链可变区；所述重链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中CDR1区、CDR2区和CDR3区分别包含SEQ ID ...
- 刘浩许文娟徐婷周伟崔智强叶洪涛鲍文英范清林宋礼华
- 不同CHO工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸化修饰的研究
- 2016年
- 目的比较中国仓鼠卵巢细胞（CHO）工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量：酸水解释放出的唾液酸用荧光试剂1,2-diamino-4,5-methylenedioxybenzene（DMB）衍生后,采用荧光-亲水保留液相色谱（HILIC-FLD）检测。寡糖链的结构分析：糖苷酶PNGase F释放出的寡糖链经邻氨基苯甲酰胺（2-AB）衍生后,一部分利用阴离子交换色谱原理分析寡糖链上唾液酸的平均数;一部分经HILIC原理分析VEGFR-Fc寡糖链指纹图谱。结果 6株工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸含量在3-12 mol NANA/mol蛋白之间,参考品Aflibercept为10.46 mol NANA/mol蛋白;每个寡糖链的唾液酸平均数在0.28-1.0之间;寡糖链的特征指纹谱图显示VEGFR-Fc有12个共有峰,各样品、参考品均有以上共有峰,但各峰的峰高有差异。结论不同的CHO工程细胞株所表达的糖蛋白的唾液酸化程度存在差异。
- 刘培宋礼华范清林刘道琴张伟魏利赵婷
- 关键词：唾液酸唾液酸化
